Tetracijska juha, kaj je, temelj, priprava, uporablja

On Tetracijska juha o tt juha je selektivni medij za tekoče kulturo za obogatitev in obnovo sevov rodu Salmonella. Ustvaril ga je Müeller, kasneje pa ga je spremenil Kauffmann, zato so tisti, ki ga imenujejo Müeller-Kauffmann juha.

Prvotni medij je vseboval protein peptonanov, kalcijev karbonat in natrijev tiosulfat. Kauffmann je dodal žolčne soli in ustvaril še eno modalnost z svetlo zeleno. Te snovi zavirajo rast koliform in puščajo prosti medij za razvoj patogenih bakterij, v tem primeru salmonela.

Agregat raztopine jodure jodure do tetracijske juhe. Vir: Manuel Almagro Rivas [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licence/by-sa/4.0)]

Sprememba je bila zelo uspešna, ker se je občutljivost medija znatno povečala. Zato je trenutno koristno za iskanje salmonel v kateri koli vrsti vzorca, predvsem pa za trden ali tekoči iztrebki in hrano.

Njegova priprava je sestavljena iz dveh faz; Komercialni medij je osnova za pripravo tetracijske juhe, kasneje pa tako, da se tetracijato lahko oblikuje.

Ameriško združenje za javno zdravje (APHA) priporoča uporabo tetracijske juhe, dopolnjene s svetlo zeleno za obogatitev vzorcev v iskanju salmonele, saj je bolj selektivna kot tetracijska juha in juha Selenito.

Na splošno je tetracijska juha idealna, kadar obstaja prisotnost bakterij salmonele rodu v majhnih količinah ali ki jih trpinčijo izpostavljenost zaviralnim snovi ali industrijskimi procesi, ki zmanjšujejo njihovo sposobnost preživetja.

Osnova

Prisotni peptoni ustrezajo digreatičnemu kazeinu in digretirani digrealni peptični peptik. Te zagotavljajo vir ogljika, dušika in hranil na splošno za rast bakterij.

Vam lahko služi: mastozoologija: izvor, kakšne študije, primer raziskav

Natrijev tiosulfat reagira z raztopino jodida, da tvori tetracijo. To zavira rast koliform in daje prednost razvoju bakterij, ki vsebujejo encim tetracijato reduktazo, med njimi je spolna salmonela, pa tudi Proteus.

Žolčne soli delujejo tudi kot zaviralna snov najbolj pozitivnih gram bakterij in nekaj grama negativnih (koliform).

Kalcijev karbonat absorbira strupene snovi, ki nastanejo z razgradnjo tetracije, ki tvori žveplovo kislino. V tem smislu kalcijev karbonat nevtralizira kislost, ki ohranja pH stabilnega medija.

V primeru modalnosti z briljantno zeleno ta snov poveča selektivno moč tetracijske juhe z zaviranjem drugih mikroorganizmov, razen spolne salmonele.

Priprava

-Tetracijska juha

Rešitev jodurada joda

Tehtanje:

• 6 gr joda.
• 5 gr kalijevega jodida.

Kalijev jodid se raztopi v približno 5 ml sterilne destilirane vode, nato pa jod malo malo dodamo, medtem ko se mešanica segreva. Ko se popolnoma raztopi, se zaletava s sterilno destilirano vodo, dokler ne doseže končnega volumna 20 ml.

Napol osnove za tetracijsko juho

Tehtamo 46 gramov dehidriranega medija in suspendirate v 1 liter sterilne destilirane vode. Zmešajte in segrejte do skupnega raztapljanja, lahko vodi le nekaj minut. Ne sterilizirajte v avtoklavi. Osnova medija se lahko ohladi do 45 ° C približno in takrat dodamo 20 ml raztopine jodure.

Po dodajanju jodurirane raztopine v medij jo je treba takoj uporabiti. Če ne želite uporabiti celotne mešanice, nadaljujte na naslednji način:

Vam lahko služi: intra -specifično konkurenco: značilnosti, vrste in primeri

10 ml osnovnega medija se porazdeli v cevi, le tistim, ki jih bodo inokulirali z vzorci.

Tisti, ki se ne bodo uporabljali.

Barva medija pred dodajanjem raztopine jodida jodida je mlečno bela z belo oborino in po agregatu je rjava z gosto oborino. Opažena oborina je normalna in ustreza kalcijeve karbonatu, ki se ne raztopi. Končni pH medija je 8,4 ± 0,2.

-Varianta tetracije juhe s svetlo zeleno

Za pripravo tetracijske juhe s svetlo zeleno se izvedejo vsi zgoraj opisani koraki, poleg tega pa bo dodana mešanici 0,1% svetlo zelene raztopine.

Sijoča ​​zelena

Ta rešitev je pripravljena na naslednji način:

Tehtamo 0,1 gr svetlo zelene in suspendirate v 100 ml destilirane vode. Segrejte do vrenja, da dosežemo skupno raztapljanje. Shrani v steklenici Amber.

Uporaba

Za vzorce iztrebkov (Comproulture) je protokol naslednji:

Inokulirajte 1 GR trdnih blatov ali 1 ml tekočega blata v cevi z 10 ml tetracijske juhe, pripravljene za uporabo. Močno raztegnite in inkubirajte aerobiozo pri 43 ° C 6-24 ur.

Nato vzemite alikvoto 10 do 20 ul juhe in se med drugim dvignite v selektivni medij za salmonelo, kot so SS agar, XLD agar, svetlo zeleni agar, hektoen enteric agar.

Vzporedno je treba selektivna sredstva za salmonelo inokulirati z neposrednim vzorcem (iztrebki). Za vzorce rektalnega brisa prenesite gradivo, zbrano v cevi, in nadaljujte na zgoraj opisani način.

Vam lahko služi: lipogeneza: značilnosti, funkcije in reakcije

Za vzorce hrane tehtajo 10 gr iz trdne hrane ali 10 ml tekoče hrane in inokulirajte steklenico s 100 ml tetracijske juhe, pripravljene za uporabo. Nadaljujte enako kot zgoraj, vendar inkubirajte 37 ° C.

Kot je razvidno, bo razmerje med vzorcem in juho vedno 1:10.

QA

Če želite testirati kulturni medij, lahko uporabite seve znane kontrole. Najbolj uporabljeni so sevi s certifikatom ATCC.

Sevi, ki jih je treba uporabiti Salmonella tiphimurium ATCC 14028, Salmonella Abony DSM 4224, Salmonella Enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 in zlati stafilokok ATCC 25923.

Za seve salmonele se pričakuje odličen razvoj, medtem ko Escherichia coli Lahko ima šibek ali reden razvoj, in gram pozitivni sevi (enterococcus in staphylococcus) so delno ali popolnoma zavirani.

priporočila

-Ker ta medij ne zavira rasti proteusa, nekateri laboratoriji običajno postavijo 40 mg/L novobiocina, da se izognejo razvoju tega mikrobnega seva. Pred raztopino jodo jodo je treba dodati antibiotik.

-Po pripravi medija, vključno z raztopino joda joda, ne sme porabiti več kot 2 uri za inokuliranje.

-V času porazdelitve medija v cevi je treba zmes neprekinjeno homogenizirati, da se oblikuje oblikovano oborino.

-V manj onesnaženih vzorcih se vzorci 35-37 ° C inkubirajo, v zelo onesnaženih vzorcih pa se priporoča inkubacija pri 43 ° C.

Reference

1. Bbl mediji. 2005. Pripravljeno v cevi za gojenje vrste salmonele.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.