Thayer Martin Agar, kaj je, fundacija, priprava, uporablja

On Thayer Martin Agar Je zelo hranljiv in selektiven trden medij za izolacijo Neisseria meningitidis in Neisseria Gonorrhoeae; oba znana kot patogena ali klinična pomembnost.

Ena najpomembnejših posebnosti, ki jih je predstavil Thayer Martin Agar, je njegova visoka vsebina v hranljivih dodatkih. Ta lastnost je nepogrešljiva, saj so neisserice zelo zahtevni mikroorganizmi s prehranskega vidika in zato ne rastejo v skupnih medijih.

Po drugi strani pa, ker te mikroorganizme običajno najdemo na nesterilnih območjih, je potreben dodajanje zaviralcev, ki preprečujejo rast spremljajoče flore, ne da bi to vplivalo na razvoj rodu Neisseria.

Ta agar je sestavljen iz baznega agarja GC, hemoglobina, dodatnih prehranskih dopolnil in kompleksa zaviralnih snovi (antibiotiki in protiglivičniki). Komercialne hiše prodajajo vsako od dodatkov ločeno.

Vzorec za posejanje v tem mediju bo odvisen od mikroorganizma, ki ga iščejo. Za Neisseria Gonorrhoeae Idealni vzorci so vaginalni in sečniški izločki. Medtem ko za Neisseria meningitidis Najbolj uporabljeni vzorci so CSF, Exudates faringeal in nazofaringeal.

Osnova

Neissere so mikroorganizmi katalogizirani kot moteči, zato je njihova izolacija težka.  Zato je Thayer Martín kompleksen medij in vsaka njena komponenta izpolnjuje funkcijo, ki je razložena spodaj:

GC osnovni agar

GC agar vsebuje peptonski protein, koruzni škrob, natrijev klorid, dipotassijev fosfat. Njegove komponente zagotavljajo osnovna hranila za razvoj mikrobov, nevtralizirajo strupene maščobne kisline, prispevajo k ohranjanju osmotskega ravnovesja, določajo pH in zagotavljajo trdno skladnost okolju.

Hemoglobin

Hemoglobin zagotavlja faktorja V in X (nikotinamid adenin dinukleotid NAD in Hemina). Zato v tem mediju gojijo tudi vrste iz hemofila. Hemoglobin lahko dobimo komercialno dehidrirano ali lahko v okolje dodamo sveže defibrinirano goveje.

Vam lahko služi: biogenetski elementi

Dodatek obogatitve

Po drugi strani je treba medij Thayer-Martina dodati tudi obogatitveno dopolnilo, saj hranila, ki jih vsebuje osnovni agar, niso dovolj za zahteve rodu Neisseria.

Najpogosteje uporabljen dodatek obogatitve se imenuje Isavalex. Ta vsebuje glutamin, adenin, NAD, kokarboksilazo, gvanin, železov nitrat, benzojsko p-aminokislino, vitamin B12, tiamin in glukozo. Vse te spojine so potrebne za dober razvoj patogenih neisserijev.

Zaviralci

Ker gre za zelo hranljive medijske zaviralce, ki preprečujejo rast mikroorganizmov iz običajne flore območja in tako dajejo prednost izolaciji rodu Neisseria.

Inhibitor kompleks je sestavljen iz vankomicina, kolistina in nistatina. Vancomycin inhibits the growth of gram positive bacteria, colistin prevents the development of gram negative bacteria such as pseudomonas and some saprophytic neisseries, and nistatin acts on yeasts as yeasts such as Candida albicans.

Vendar je bil potem spremenjen Thayer Martin Agar; Spremembe so bile dodajanje trimetoprima, povečanja količine agarja in agregata dodatne glukoze. Te spremembe so znatno izboljšale okrevanje vrste Neisseria Gonorrhoeae.

Treba je opozoriti, da trimetoprim zavira rast beljakovinskega žanra in njegovo posledično tvorbo roje. V tem smislu so antibiotiki tisti, ki selektivnemu značaju zagotavljajo srednjemu Thayer Martinu.

Priprava

Thayer Martin originalni agar

-GC agar

Tehtamo 8,2 gr dehidriranega gc medija in suspendirate na 100 ml. Mešajte in vrejte 1 minuto s pogostim vznemirjenjem, da se raztopi v celoti. Zmes sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut.

Vam lahko služi: postopek hominizacije: značilnosti in faze

-2% hemoglobina

V 2 ali 3 ml vroče destilirane vode suspendirajte 2 GR dehidriranega hemoglobina, da tvori enakomerno zmes. Postopoma dodajte vodo, da dokončate prostornino 100 ml. Suspenzija mora biti homogena pred sterilizacijo.

Sterilizirajte v avtoklavu 15 minut.

-Dodatek obogatitve

Rekonstituirajte komercialno vialo z redčenjem, ki ga zagotavlja ista komercialna hiša. Dobro premešaj. Količina redčenja, ki jo je treba uporabiti, bo določena v navodilu za komplet.

-Inhibicijski dodatek v.C.N (Vancomicin, Colistin, Nistatin)

Rekonstituirajte vialo z redčenjem, ki ga zagotavlja komercialna hiša. Dobro premešaj. Količina redčenja, ki jo je treba uporabiti, bo določena v navodilu za komplet.

-Pripravljen

Za vsakih 100 ml GC Agar nadaljuje na naslednji način:

Ko agar GC zapusti avtoklav, pustite, da se ohladi do približno temperature 50 ° C in dodamo 2 ml pripravljene raztopine hemoglobina, 2 ml dodatka za obogatitev (Isoobalex ali Bralex) in 2 ml inhibicijskega dodatka. Mešajte in postrezite v sterilnih ploščah Petri.

Do uporabe naj se strdi in shrani v hladilniku.

Barva pripravljenega medija je češnjeva rdeča. Končni pH medija je 7,2 ± 0,2

Thayer Martin Agar Modified

Tehtamo 8,2 gr dehidriranega gc medija in suspendirate na 100 ml. Dodajte 1 gr agar-voda in dodajte 0,3 gr glukoze. Mešajte in vrejte 1 minuto s pogostim vznemirjenjem, da se raztopi v celoti. Zmes sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut.

Pripravite dodatek hemoglobina in obogatitve, kot je opisano zgoraj.

Uporabljeni inhibicijski dodatek je v.C.N.T (vankomicin, kolistin, nistatin, trimetoprim).

Vam lahko služi: predivolucionistične teorije, njene avtorje in ideje

-Pripravljen

Nadaljujte na način, opisan za originalni agar Thayer Martin.

Uporaba

Thayer Martin Agar bi moral biti pred sejanjem vzorcev. Pogosto uporabljeni vzorci so faringealni eksudati, nosni eksudati, vaginalni, uretralni in/ali rektal in CSF.

Uporabite sveže odvzete vzorce in naredite močne inokulume o agarju. Vzorci se posejemo neposredno zaradi izcedka materiala in nato izstopamo zaradi izčrpanosti na površini.

Plošče inkubiramo pri 35-37 ° C 24 do 48 ur v vrču mikroaerofilije (5% CO₂). Po času inkubacije plošče pregledajo v iskanju majhnih kolonij, sivega in včasih mukoidnega videza.

Izvedite gram in potrditvene biokemične teste na sumljive kolonije.

QA

Za izvedbo nadzora kakovosti lahko Thayer Martin uporabi naslednje mikrobne seve.

Neisseria Gonorrhoeae ATCC 49226 in Neisseria meningitidis ATCC 13090; V obeh sevih se pričakuje zadovoljiv razvoj.

Vključeni morajo biti tudi naslednji sevi: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 in Candida albicans ATCC 10231. V vseh njih se v tem mediju pričakuje skupna ali delna inhibicija.

Omejitve

-Upoštevajte, da lahko v srednjih bakterijah, ki so odporne na uporabljene zaviralce.

-Obstajajo sevi Neisseria Gonorrhoeae ki so lahko občutljive na koncentracijo uporabljenega vankomicina. Zaradi tega je priporočljivo uporabiti vzporedni čokoladni agar, dopolnjen z Isovalexom, vendar brez zaviralcev.

-Obstajajo sevi kvasovk, ki so odzivni na nistatin, ki lahko rastejo v tem mediju in motijo ​​izolacijo patogenih neisserijev, zlasti gonokokov.

Reference

1. Britanski laboratoriji. Thayer Martin Media Modified. Na voljo na: Britanaalab.com