Negativno obarvanje

Podoba negativnega obarvanja virusa gripe a. Vir: Glej stran za avtorja, Wikimedia Commons

Kaj je negativno obarvanje?

The negativno obarvanje To je posebna obarvana metoda za poudarjanje prisotnosti kapsule v nekaterih mikroorganizmi Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae in Cryptococcus neoformans-, iz kliničnih vzorcev ali čistih pridelkov.

Neposredno uporabljen neposreden vzorec za nanašanje negativnega obarvanja je cerebrospinalna tekočina. Ta tehnika predstavlja hitro alternativo za domnevno diagnozo meningitisa, zlasti Cryptococcus neoformans.

To obarvanje je mogoče uporabiti za sterilni sputum in tekočine na splošno, pa tudi za seve, pridobljene iz mladih čistih pridelkov. Tehnika za njegovo izvedbo uporablja nigrozin ali kitajsko črnilo, zato je za uporabo zelo preprosta in ekonomična metodologija, ki v kratkem času zagotavlja informacije o veliki diagnostični vrednosti.

V tem smislu je vsak laboratorij v sposobnosti izvajanja te obarvanosti. Seveda mora imeti laboratorij kompetentno osebje, ki lahko prepozna kvasovke Cryptococcus neoformans izolirani ali v gematizaciji in jih ločite od levkocitov in artefaktov, ki jih vzorec lahko predstavlja.

Osnova

Podobno delujeta nigrozin in kitajsko črnilo, tako da se lahko uporabijo bodisi snovi nerazločno.

Ta tehnika se imenuje negativno obarvanje, ker deluje v nasprotju s preostalimi tehnikami barvanja. V tem je tisto, kar je brez barvanja, struktura, ki jo iščete ali ki jo želite videti, torej mikroorganizmi.

Zato obarvanost temelji na barvanju dna razmaza v temni barvi. V tem scenariju se bodo kapsulirane strukture izpostavile v svetlobi ali brezbarvnem.

Običajno opazimo kvasovke, obkrožene s prozornim halo, ki ustreza kapsuli. To se zgodi, ker kitajska črnila in nigrozin snovi ne moreta prodreti v polisaharid, ki tvori kapsulo živih mikroorganizmov.

Vam lahko služi: butirska fermentacija

Treba je opozoriti, da so tudi druge strukture, ki so lahko prisotne v neposrednem vzorcu, na primer levkociti ali rdeče krvne celice.

Zdaj, če so mikroorganizmi mrtvi, lahko tinktura prodre vanje, tako da je to obarvanje koristno tudi za oceno sposobnosti mikroorganizmov.

Tehnika

Materiali

Nigrozin

Nigrosine dolguje ime črne barve, ki jo ima. To je sintetična snov, ki jo dobimo s segrevanjem mešanice organskih spojin -na primer nitrobenzeine, anilin in anilin hidroklorit -, pri čemer v tej reakciji katalizator (železo ali baker).

Kitajsko črnilo

Kitajsko črnilo je snov, ki jo Azijci uporabljajo predvsem za pisanje, izdelava umetniških del in enobarvnega slikanja. Je zelo priljubljen v kitajski kulturi.

Dobimo ga iz črnila lignjev, pomešanega s premogom v prahu, proizvodu kurjenja majhnih smolnih dreves.

Prav tako ga je mogoče pripraviti iz saje sežiganja ogljikovodika (rastlinska olja), skupaj z beljakovinskim želejem, ki mu daje ustrezno konsistenco, da se izogne ​​padavine delcev premoga.

Specifikacije za vzorčenje

• Ne potrebuje post.
• Vzorec vzorca, sputum ali sterilna tekočina morajo vsebovati vsaj 1 ml volumna in ga je treba prenesti v laboratorij pri sobni temperaturi.
• Vzorce CSF in sterilne tekočine mora vzeti specializiran zdravnik.
• Lahko je tudi čisti pridelek sumljivega seva, povezanega z prej omenjenimi patogeni.

Izvedba tehnike z neposrednimi vzorci

• Vzorci morajo biti centrifugirani, nato pa supernatant zavržemo in se usedlina.
• Kapljica centrifugiranega materiala (usedlina) in kapljica kitajskega ali nigrozinskega črnila.
• Dobro ga je treba mešati in pokriti s pokrovom, ki pusti, da se padec razteza kot lep film, ne da bi presegel robove.
• Nato je priprava mikroskopa nameščena.
• Če je priprava zelo temna, jo lahko razredčimo z vodo.

Vam lahko služi: kemotropizem

Izvedba tehnike s sevi pred gojenjem

• Zelo majhen del mladega pridelka jemljemo z posejano iglo in se raztopi v kapljici kitajskega črnila, ki je prej postavljeno na čisti diapozitiv.
• Na vrhu je nameščen pokrov.
• Opazimo ga v 10X mikroskopu in nato pri 40x.

Del kolonije lahko raztopite tudi v destilirani vodi in od tam vzamete kapljico in ga zmešate s kitajskim črnilom. Na ta način priprava ne bo tako debela, kar bo omogočilo opazovanje struktur izolirano. Če obstajajo aglomeracije, ne bo dobro opaziti.

Druga metodologija je naslednja:

• Na enem koncu diapozitiva postavite padec vzmetenja.
• Na istem koncu postavite kapljico nigrozina in zmešajte.
• S pomočjo drugega diapozitiva iztegnite vzorec, kot da bi naredil hematološki razmaz.
• Pustite, da se posuši in opazujte v mikroskopu.

Opazovanje mikroskopa

Najprej se mora osredotočiti z 10 -kratnim ciljem, da ima široko vizijo polja. Nato morate iskati, če obstajajo jasni prostori. Če obstajajo, se osredotočite na 40x, da vidite podrobnosti.

Prednosti

• Enostavno je izvesti.
• To je ekonomska tehnika.
• Ta metoda ne zahteva, da se razmaza pritrdi na toploto ali s kemikalijami, zato mikroorganizmi opazimo brez izkrivljanja.
• Priprava freske ni treba biti suha, zato jo je mogoče takoj opaziti, hitro ustvarite rezultate.

Prikrajšanost

• Ko so nameščeni, je treba takoj opaziti sveže priprave. Če se jim dovoli, da jih posušijo, jih ni več mogoče opazovati in novega.

Vam lahko služi: samovšečna

Konzerviranje tkiv s kitajskim črnilom

Druga funkcija, ki lahko izpolni kitajsko črnilo, je v patoloških laboratorijih. To se uporablja v vzorcih kirurško ekstrahiranih z namenom označevanja robov resekcije tumorja.

Označeno tkivo je razpršeno z ocetno kislino. To deluje kot mordant in preprečuje, da bi črnilo izstopalo, ko je tkivo podvrženo rutinskim obdelavo za pripravo biopsije.

Postopek je sestavljen iz kopanja tkanine v alkoholu in ksilenu, nato pa vdelan v parafinski vosek. Ta označevanje vodi patologa pri opazovanju tkiva, kar kaže, kje je meja kirurške resekcije ali druge zanimive točke.

Reference

1. Nigrozin. Okreval od Es.Wikipedija.org.
2. Forbes, b., Sahm, d., Weissfeld, a. Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. Pan -ameriški uredništvo s.Do.