biologija

Obarvanje spor

Obarvanje spor
Obarvanje sporov s strani Shaeffer-Fulton ali Wirtz-Conklin. Vir: Y tudi (originalni nalagalnik) [gfdl (http: // www.GNU.Org/copyleft/fdl.html) ali cc-be-sa-3.0, Wikimedia Commons

Kaj je obarvanje spore?

The Obarvanje spor To je metodologija, ki se uporablja za barvanje odpornih struktur, ki tvorijo nekaj bakterijskih rodov, ko so v neugodnih pogojih. Služi za identifikacijo bakterij.

Obstaja veliko žanrov, ki tvorijo spore, vendar so glavne Bacillus in Clostridium. Ti žanri veljajo za bolj pomembne, ker imajo patogene vrste za človeka.

Vsak bacil lahko povzroči spore. V času barvanja priprave lahko Spore najdemo znotraj Bacilla (Endospora) ali zunaj tega (Exospora). Z običajnimi tehnikami obarvanja za bakterije - kot je obarvanje grama - spore so brezbarvne.

Trenutno obstaja več barvnih metodologij, ki lahko prečkajo debelo strukturo spore, da jo barvajo. Te metodologije so zelo raznolike, Dornerjeva tehnika.

Od vseh omenjenih tehnik je Shaeffer-Fultonova metodologija najbolj uporabljena v rutinskih laboratorijih. Ime dolguje dvema mikrobiologoma, ki sta obarvali leta 1930: Alicia Shaeffer in MacDonald Fulton. Vendar se včasih tehnika imenuje Wirtz-Conklin v čast dveh bakteriologov iz leta 1900.

Osnova

Spore niso pobarvane z običajnimi obarvanji, ker imajo zelo debelo steno. Kompleksna sestava sporov preprečuje vstop večine barvil.

Če se spore zunaj preučuje navznoter, opazimo naslednje plasti: Najprej je tu Exosporium, ki je najboljši in večina zunanje plasti, ki jo tvorijo glikoproteini.

Nato pride kutikula, ki zagotavlja odpornost na visoke temperature, sledi skorja, sestavljena iz peptidoglikana. Kasneje je na voljo osnova osnove, ki ščiti protoplast.

Spore je dehidrirana struktura, ki vsebuje 15% kalcija in dipikolinske kisline. Zato večina tehnik barvanja spor temelji na uporabi toplote, tako da lahko barvilo prodre v debelo strukturo.

Vam lahko služi: laktogeneza: značilnosti in stopnje

Ko je spora obarvana, ne more odpraviti barvila. V tehniki Shaeffer-Fulton Green vstopi v vegetativne celice in z uporabo toplote prodre v Endosporo.

Pri pranju z vodo se barvilo odstrani iz vegetativne celice. To se zgodi, ker je zeleno barvilo Malachita nekoliko osnovno, zato se vegetativna celica veže šibko.

Namesto tega ne morete izstopiti iz spore in na koncu je najet bacil s safraninom. Ta fundacija velja za preostale tehnike, v katerih se zgodi kaj podobnega.

Tehnike barvanja sporov

Za izvedbo obarvanja spore morate imeti čisti pridelek sumljivega seva, ki ga želite preučiti.

Pridelek je 24 ur podvržen ekstremnim temperaturam, da mikroorganizem spodbudi do sporularnega. Za to lahko pridelek postavite v 44 ° C ali v hladilnik (8 ° C) 24 ali 48 ur.

Če predolgo odidete pri zgoraj omenjenih temperaturah, bodo opazili le eksospaurre, saj bodo vse endospore zapustile bacil.

Kulminirani čas je treba postaviti nekaj kapljic sterilne fiziološke raztopine na čistem diapozitivu. Potem se vzame majhen del pridelka in podaljšana globa. 

Nato se dovoli, da se posuši, pritrjena je v vročini in barvanju z nekaterimi spodaj navedenimi tehnikami:

Dorner tehnika

  • Pripravite v testni cevi koncentrirano suspenzijo mikroorganizma, sporulirane v destilirani vodi, in dodajte enako količino Fenicada fuchsina filtriranega.
  • Cev postavite v kopel z vrelo vodo med 5 in 10 minutami.
  • Na čistem diapozitivu je pomešal kapljico prejšnjega suspenzije z kapljico vodne raztopine nigrozina pri 10%, kuhano in filtrirano.
  • Iztegnite in posušite z mehko toploto.
  • Preučite s 100 -kratnim ciljem (potopitev).

Spore so barvane rdeče in bakterijske celice so videti skoraj brezbarvne na temno sivem ozadju.

Vam lahko služi: helmintologija: izvor, kakšne študije, primer raziskav

Spremenjena tehnika Dorner

  • Iztegnjena vzmetenje sporuliranega mikroorganizma je narejena na diapozitivu in pritrjena na toploto.
  • Vzorec je pokrit s filtrirnim papirjem, ki mu je dodan Fenicada fuchsin. Barvilo se segreva 5 do 7 minut s plamenom vžigalnika. Potem se papir umakne.
  • Priprava z vodo se opere in nato posuši z vpojnim papirjem.
  • Razmaz je pokrit s tankim filmom 10%nigrozin, z drugim diapozitivom za razširitev nigrozina ali igle.

Obarvanost, ki jih vzamejo spore in bakterije, je enaka tistemu, ki je opisan v prejšnji tehniki.

Tehnika Shaeffer-Fulton ali Wirtz-Conklin

  • Naredite podaljšano globo z suspenziranjem sporuliranega mikroorganizma na diapozitivu in pritrdite toploto.
  • Diapozitiv pokrijte z vodno zeleno raztopino malahita pri 5% (filtrirni papir lahko postavite na list).
  • Segrejte na plamenu Bunsenovega lažjega, dokler ne povzroči odvajanja hlapov in odstranite plamen. Ponovite operacijo 6 do 10 minut. Če med postopkom izhlapi zelena raztopina malahita, lahko dodamo več.
  • Odstranite filtrirni papir (če je nameščen) in sperite z vodo.
  • Drsnik pokrijte z 0,5% vodnim safraninom 30 sekund (nekatere različice tehnike uporabljajo 0,1% vodnega safranina in ga pustite 3 minute).

S to tehniko so spore predstavljene zelene in rdeče bacile.

Ima neprijetnosti, da endospore mladih pridelkov niso dobro pobarvane, saj so videti izjemno jasno ali brezbarvno. Da se temu izognete, je priporočljivo uporabiti 48 -urni inkubacijski pridelki.

Möellerjeva tehnika

  • 2 minuti pokrijte razmaz s kloroformom.
  • Zavrzite kloroform.
  • 5 minut pokrijte s 5% kromično kislino.
  • Operite z destilirano vodo.
  • List s Fuchsin-Fenicada karbol je pokrit in izpostavljen plamenu vžigalnika Bunsena do emisije hlapov, nato pa nekaj trenutkov odstranimo iz plamena. Operacija se ponovi do 10 minut.
  • Operite z vodo.
  • Za razbarvanje uporabite zakisljiv etanol (klorovodikovo alkohol). Ostane 20 ali 30 sekund.
  • Operite z destilirano vodo.
  • Najemite listo z metilen modro 5 minut.
  • Operite z destilirano vodo.
  • Dovoljeno se posušiti in odpeljati vzorec na mikroskop.
Vam lahko služi: biološki pojav

Spore izgledajo rdeče in modri bacili. Pomembno je, da si ne prizadevate za hlape, saj so strupeni in dolgoročni so lahko rakotvorni.

Möellerjeva tehnika spremenjena brez toplote

Leta 2007 so Hayama in njegovi sodelavci ustvarili spremembo Möellerjeve tehnike. Odpravili so barvanje barvila in ga nadomestili z dodatkom 2 kapljic površinsko aktivnega tergitola 7 na vsakih 10 ml raztopine karbola, ki je bila Fuchsin-Fuchsin. Pridobljeni so bili enaki rezultati.

Prijave

Obarvanost sporov zagotavlja zelo dragocene in koristne informacije za identifikacijo patogena, saj so prisotnost iste, njene oblike, lokacija znotraj bacila in sposobnost deformiranja vegetativne celice ali ne, podatki, ki lahko vodijo vrsto vrste, ki sodelujejo v določenem spolu.

V tem kontekstu je vredno reči, da so spore lahko okrogle ali ovalne, lahko se nahajajo v središču ali tudi v palacentralnem, subminalnem ali končnem položaju.

Shema oblike in položaja endospore in eksospore

Primeri

  • Clostridium difficile Tvori ovalno spore v končnem položaju, ki deformira bacillus.
  • Spore Clostridium Tertium Je ovalna, ne deformira bacila in se nahaja na končni ravni.
  • Endospora Clostridium tetani Je terminal in deformira bacillus, kar daje videz bobnske palice.
  • Spore Clostridium botulinum, C. histolyticum, C. Novy in C. septicum So okrogle ali ovalne, pod zemljo in deformirajo bacillus.
  • Endospora Clostridium Sordelli Nahaja se v osrednjem položaju z rahlo deformacijo.

Reference

  1. Moeller madež. Pridobljeno iz.Wikipedija.org.
  2. Endospora. Okreval od Es.Wikipedija.org.
  3. Forbes, b., Sahm, d., Weissfeld, a. Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. Pan -ameriški uredništvo s.Do.