Giemsa obarvanje

Giemsovo obarvanje je pogosta metoda za pregled različnih vzorcev tkiv in krvi

Kaj je Giemsa obarvanje?

The Giemsa obarvanje Gre za vrsto kliničnih vzorcev (tkiva, kri), ki temeljijo na mešanici kisline in osnovnih barvil. Ustvaril je Gustav Giemso, nemško kemiko in bakteriolog, ki je izpopolnil Romanowskyjevo delo z dodajanjem glicerola za stabilizacijo spojin.

Spremembe, pridobljene v prvotni tehniki Romanowsky.

Ker je preprosta tehnika, ki jo je treba opraviti, veliko funkcionalnost in ekonomsko, se trenutno pogosto uporablja v kliničnem laboratoriju za hematološki vonj, vzorce kostnega mozga in reze tkiv.

Tehnika obarvanja Giemsa je zelo uporabna za citološke študije, saj omogoča opazovanje specifičnih celičnih struktur. Ta tehnika obarva citoplazme, jedra, nukleolos, vakuole in celična zrnca, celo razlikovanje s finimi kromatinskimi sledi.

Poleg tega je mogoče zaznati pomembne spremembe velikosti, oblike ali obarvanosti jedra.

Temelj Giemsovega obarvanja

Barvila tipa Romanowsky imajo kot osnovni kontrast med kislino in osnovnimi barvili, da ubijejo osnovne in kisle strukture. Kot je razvidno, obstaja afiniteta kislih barvil za barvanje osnovnih struktur in obratno.

Osnovno uporabljeno barvilo je metilen modro in njene zarjavele derivate (Azure A in Azure B), kisle barvilo pa eozin.

Kisle strukture celic so nukleinske kisline, med drugim zrnca bazofijske segmentirane. Zato jih bodo barvali z metilen modro.

V istem smislu so osnovne strukture celic hemoglobin in nekatere zrnce, kot so vsebina v segmentiranih eozinofilih. Te bodo barvane z Eosino.

Po drugi strani, ker je za metilen in azure modro značilno, da sta metakromatska barvila, lahko različnim strukturam zagotovijo spremenljivi ton, glede na obremenitev polianov, ki jih imajo.

Tako strateška kombinacija osnovnih in kislih barvil uspe razviti širok spekter barv, glede na biokemične značilnosti vsake strukture, ki hodi skozi bledo modre, temno modre, lila in vijolično modre odtenke, v primeru struktur kisle kisline.

Obarvanost, ki jo ponuja Eosina, je bolj stabilna, ustvarja barve med rdečkasto, oranžno in lososom.

Materiali

Priprava matične rešitve

Priprava matere.

Način priprave

Težki prah Giessa postavite na malto. Če obstajajo grudice, jih je treba pustiti. Nato dodajte opazno količino izmerjenega glicerina in zelo dobro premešajte. Pridobljeno zmes vlijemo v zelo čisto jantarno steklenico.

Preostali glicerin je nameščen v malto. Znova zmešajte, da očistite preostanek barvila, ki se je zataknilo na stene malte, in vrzite isto steklenico.

Vam lahko služi: conidia

Steklenica je pokrita in traja 2 uri v vodni kopeli pri 55 ° C. Tako dolgo.

Nato se mešanica pusti ohladiti, da se alkohol postavi. Prej je del izmerjenega alkohola nameščen v malto, da se konča pranje, kar je obarvano, nato pa dodamo mešanici, poleg preostalega alkohola.

To pripravo je treba dovoliti, da dozorejo vsaj 2 tedna. Del, ki se uporablja iz matične raztopine, je treba filtrirati.

Da se izognete kontaminaciji priprave. Ponovno se obrnite vsakič, ko je reagent izčrpan.

Priprava puferne raztopine

Po drugi strani pa je pripravljena raztopina 7,2 pH pufra na naslednji način:

6,77 GR natrijevega fosfata (brezvodni) (Nahpo je tehtan₄), 2,59 gr kalijevega dihidrogena fosfata (KH₂Po₄) in destilirana voda do 1.000 ccm.

Končna priprava barvanja

Za pripravo končne raztopine obarvanja izmerimo 2 ccm filtrirane matične raztopine in mešamo s 6 ccm puferne raztopine. Zmes mešamo.

Ustrezno dejstvo, ki ga je treba upoštevati, je, da se tehnike priprave barvila lahko spremenijo v skladu s komercialno hišo.

Dodatni materiali, potrebni za obarvanje

Poleg opisanih materialov, obarvanih mostov, plasti z vodo ali puferjem za pranje, drsnih rezin ali pokrova, štoparice, štoparice za nadzor nad barvanjem in sušilnim papirjem ali nekaj materiala, ki servira za sušenje (gaza ali bombaž (gaza ali bombaž).

Tehnika

Postopek obarvanja

1. Pred barvanjem mora biti podaljšani vzorec na čistem diapozitivu pripravljen.

Vzorci so lahko kri, kostni mozeg, histološka tkiva ali vzorci materničnega vratu-vaginalne. Priporočljivo je, da so podaljšani v redu in imajo 1 ali 2 uri sušenja, preden jih obarvate.

2. Na barvni most so nameščeni vse liste, ki jih je treba barvati. Vedno deluje v istem vrstnem redu in vsak list je dobro identificiran.

3. Nekaj ​​kapljic 100% (metanol) kovinskega alkohola postavite na vonj in pustite 3 do 5 minut, da se popravi in ​​dehidrira vzorec.

4. Zavrzite metanol, ki je prisoten v listu, in pustite, da se posuši v zraku.

5. Ko se posušite, postavite končno raztopino za obarvanje s kapalko, dokler ne pokrije celotnega lista. Pustite dejanje 15 minut. Nekateri avtorji priporočajo do 25 min. Odvisno je od komercialne hiše.

6. Odcedite barvilo in drgnjenje operete z destilirano vodo ali z raztopino 7,2 pufra.

7. Na sušnem papirju pustite, da se zunanji listi posušijo, razporejeni navpično s pomočjo podpore.

Vam lahko služi: Renina: struktura, proizvodnja, izločanje, funkcije

8. Očistite zadnji del diapozitiva z gazo ali bombažjem, navlaženim v alkoholu, da odpravite vse ostalo barvilo.

Uporaba/aplikacije Giemsovega obarvanja

Tehnika obarvanja Giemsa se uporablja na različnih področjih: v hematologiji, mikologiji, bakteriologiji, parazitologiji, citologiji in citogenetiki.

Hematologija

To je najpogostejša uporaba, ki jo dajemo temu obarvanju. Z njo se ugotovi vsaka in vsaka celica v vzorcih kostnega mozga ali periferne krvi. Kot tudi izračunajte število vsake serije, pri čemer lahko odkrijemo levkocitozo ali levkopenijo, trombocitopenijo itd.

Ker je občutljivo prepoznati nezrele celice, je pomembno pri diagnozi akutne ali kronične levkemije. Prav tako je mogoče postaviti diagnozo anemij, kot so drepanocitna, falciformna anemija.

Mikologija

Na tem področju je njegova uporaba pogosta za iskanje Histoplasma capsulatum (Intracelična dimorfna gliva) v vzorcih tkiv.

Bakteriologija

V hematološkem razmazu, barvanem z Giemso, je mogoče zaznati Borrelias sp Pri bolnikih, ki preučujejo bolezen, imenovano Recurrentis Fever. Spirokete opazujejo obilo med eritrociti, v vzorcih, odvzetih v vročinskem vrhuncu.

Možno je tudi vizualizirati znotrajcelične bakterije, kot so Rickettsias sp in Chlamydia trachomatis V okuženih celicah.

parazitologija

Na področju parazitologije je Giemsovo obarvanje omogočilo diagnozo parazitskih bolezni, kot so malarija, Chagas Evil in leishmaniasis.

V prvih dveh zajedavci Plasmodium sp in Cruzi Tripaosoma, oziroma jih je mogoče vizualizirati v periferni krvi okuženih bolnikov. Najdemo jih v različnih fazah glede na fazo, v kateri je bolezen.

Za izboljšanje iskanja krvnih zajedavcev je priporočljivo.

Prav tako lahko kožno lešmaniazo diagnosticiramo pri ocenjevanju vzorcev usnjenih biopsij, barv z Giemso, kjer najdemo parazit.

Citologija

Obarvanje Giemse se uporablja tudi za citološko študijo endocervikalnih vzorcev, čeprav v ta namen ni najpogosteje uporabljena tehnika.

Toda v primerih pomanjkanja virov ga je mogoče uporabiti, saj ima funkcionalnost, podobno tisti, ki jo ponuja pap jezero, in nižji stroški. Vendar zahteva strokovno znanje s pomočjo izpita.

Citogenetika

Ustrezna značilnost obarvanja Giemse je njegova sposobnost, da se močno pridruži regijam, bogatim z adenini in timinami DNK. To omogoča, da se DNK vizualizira med celično miitozo, v različnih kondenzacijskih stanjih.

Te študije so potrebne za odkrivanje kromatičnih aberacij, kot so podvajanja, delecije ali translokacije različnih regij kromosomov.

Giemsa obarvanje. Vir: Panreac Applichem ITW reagenti. Različica 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Španija.

Priporočila za dobro obarvanje

- Sušenja listov ne smemo pospešiti. Previden čas za sušenje je treba pričakovati na prostem. Približno 2 uri.

Vam lahko služi: timina

- Barvanje takoj po 2 uri za boljše rezultate.

- Da bi se vonji pritrdili in barvali bolje, je treba vzorec razporediti na list, tako da je tanka in enakomerna plast.

- Prednostni vzorec krvi je kapilarno, saj Smere.

- Če uporabljamo vensko kri, je treba EDTA uporabiti kot antikoagulant in ne heparin, saj slednji običajno deformira celice.

Pogoste napake pri obarvanju Giemsa

V praksi te obarvanosti lahko delate napake. Dokazujejo jih nenadne spremembe v tonalnosti struktur.

Izjemno modra obarvanost

To je lahko posledica:

- Zelo debel razmaz.

- Presegajo čas obarvanja.

- Premalo opran.

- Uporaba reagentov precej nad nevtralnim pH (alkalin).

V teh pogojih so barve naslednjih struktur popačene, tako da bodo eritrociti, namesto da bi barvali vrtnico, N zeleni, zrnca eozinofilcev, ki jih je treba barvati v rdečo opeko siva in podobno bo odstopanje v običajnih odtenkih.

Prekomerno roza obarvanost

To je lahko posledica:

- Premalo časa obarvanja.

- Dolgotrajno ali pretirano pranje.

- Slabo sušenje.

- Uporaba zelo kislih reagentov.

V tem konkretnem primeru strukture, ki se običajno barvajo v modri barvi.

Primer: Eritrociti bodo vzeli močno svetlo ali oranžno rdečo barvo, jedrski kromatin bo videti bledo roza in eozinofilna zrnca bodo barvana iz svetlo svetlo rdeče svetle.

Prisotnost oborine v razmazu

Vzroki so lahko:

- Uporabite umazane ali slabe rezine.

- Ne pustite, da se razmaza posuši.

- Predolgo pustite rešitev za pritrditev.

- Neustrezno pranje na koncu obarvanja.

- Neustrezna filtracija ali ne -filtracija barvila, ki se uporablja.

Prisotnost morfoloških artefaktov

V razmah se lahko pojavijo morfološki artefakti, ki ovirajo vizualizacijo in razlago prisotnih struktur. To je posledica:

- Vrsta uporabljenega antikoagulanta, kot je heparin.

- Uporaba umazanih, poslabšanih ali mastnih listov.

Način pomnilnika

Po pripravi je treba barvilo vzdrževati pri sobni temperaturi (15-25 ° C), da preprečimo, da bi barvilo oborilo. Shranjen mora biti v dobro zaprti jantarni posodi.

Reference

1. Cannova, d., Brita, npr. In Simons, m. (2016). Vrednotenje tehnik obarvanja za diagnozo kožne leishmaniaze. Salus. 
2. Panreac applichem itw ponovno. Giemsa obarvanje. Različica 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Španija.
3. Clark, g. Postopki obarvanja (1981). Williams & Willkins.