Tincija fundacije kapsula in tehnike

The Obarvanje kapsul To je diferencialna tehnika obarvanja, ki je lastnik osvetlitve polisaharidne strukture, ki obdaja nekatere bakterije in kvasovke, imenovane kapsula. Uporablja se v kliničnih laboratorijih za pomoč pri diagnozi nekaterih patologij, ki jih povzročajo kapsulirani mikroorganizmi.

Uporablja se tudi v poučevanju laboratorijev za prikaz te morfološke strukture študentom zdravstvene kariere, kot so: medicina, bioanaliza, zdravstvena nega ali citotehnologija.

Klebsiella pneumoniae razmaza, barvana s kapsulskim obarvanjem. Indijska metoda črnila s safraninom. Vir: A.A.V [javna domena]

Obstaja več preprostih tehnik, ki prikazujejo prisotnost kapsule v mikroorganizmih, ki jo imajo, to so: negativno obarvanje, obarvanje Anthonyja in varianta, ki združuje prejšnji dve.

Negativno obarvanje se uporablja predvsem v vzorcih CSF, kadar obstaja sum na prisotnost kvasa Cryptococcus neoformans. Ta kvas je pogost vzrok meningitisa.

Ta tehnika uporablja nigrozin ali kitajsko črnilo in temelji na ustvarjanju kontrasta med pripravljalnim dnom in neprepustno kapsulo mikroorganizma. Ozadje je barvano temno in kapsula je brezbarvna. Na ta način je ta struktura poudarjena.

Kar zadeva tehniko Anthonyja, lahko rečemo, da se večinoma uporablja pri poučevanju laboratorijev za prikaz strukture polisaharida v bakterijah, kot so Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae in Neisseria meningitidis.

Uporaba te tehnike za diagnostične namene je zelo redka, saj obstajajo tudi drugi rutinski testi, ki omogočajo prepoznavanje teh mikroorganizmov.

[TOC]

Osnova

Kapsula je močna struktura polisaharidne narave. To ščiti mikroorganizme fagocitoze in je zato težko prodreti.

Zato kapsulske obloge temeljijo na kontrastu. Barvila obarvajo dno priprave, medtem ko je kapsula brezbarvna.

Zato je s temi tehnikami kapsula zlahka prepoznavna. Če mikroorganizem nima kapsule, se s to vrsto obarvanosti ne bo razlikoval, ker bo vse pobarvano iz iste barve.

Lahko vam služi: homologne in analogne strukture (s primeri)

Vse tehnike, ki se uporabljajo za barvanje kapsule, imajo enake temelje, čeprav uporabljajo različne barve in postopke.

Tehnike parna obarvanje kapsule

-Anthony obarvanje

Anthonyjevo obarvanje uporablja vijolično steklo kot barvilo. To bo barvilo bakterijsko telo in vijolično barvno ozadje.

Po drugi strani se uporablja 20% bakrenega sulfata. To služi kot pralna raztopina, to je, da odstrani odvečno vijolično kozarec priprave, zaradi česar se kapsule pojasnijo, vendar brez bakterijskega telesa ali ozadja izgubi barvo.

Materiali

- Kratkoazolatno mleko.

- Prenosna lamina.

- 1% vijolično steklo.

- 20% bakrenega sulfata.

- Optični mikroskop.

- Potopno olje.

Postopek

Ta tehnika je sestavljena iz:

1. 36 ur gojite mikroorganizem v linijskim mlekom.
2. Kapljico pridelka postavite na koncu lista držala predmeta in zraven, da položite kapljico vijoličnega stekla, zmešajte in se raztezajte s koncem drugega diapozitiva.
3. Na prostem in ne popravite toplote.
4. Operite z 20%raztopino bakrenega sulfata, spuščajte na prostem.
5. Opazujte mikroskop s potopnim ciljem. Iskanje proti skrajnostim podaljšanega.

Pomembno je, da ne uporabljate toplote ali popravljanja ali posušitve, saj to poškoduje kapsulo. Niti pere z vodo.

Interpretacija

Kratko mleko je odličen kulturni medij, saj zagotavlja potrebna hranila mikroorganizmu, da razvije vidno kapsulo.

Po drugi strani bo likmolentno mleko tvorilo debelo in kompaktno ozadje, ki bo barvito vijolično skupaj z bakterijskim telesom, vendar je kapsula, ki obdaja mikroorganizem. Zato okoli bakterijskega telesa opazimo bistro halo.

Vam lahko služi: dejavniki, ki vplivajo na encimsko aktivnost Grafični prikaz pri mikroskopskem opazovanju razmaza Klebsiella pneumoniae, barvan z obarvanjem Anthonyja. Vir: Izdelal avtorja MSC. Marielsa Gil.

Prednosti

To je preprosta tehnika za izvajanje. Ne zahteva fiksacije.

Prav tako je treba opozoriti, da je mogoče uporabiti druge kulturne medije, vendar je prednostna medij z mlekom, ker ima prednost, da zagotavlja vidnejše kapsule.

Slabosti

To je nekoliko bolj naporna tehnika kot negativno obarvanje, za vizualizacijo.

-Negativno obarvanje

Materiali

- Diapozitiv.

- Kulturni medij z mikroorganizmom.

- Kitajsko ali nigrozinsko črnilo.

- Optični mikroskop.

- Fiziološka fiziološka raztopina.

Postopek

Na prevleke položite kapljico fiziološke fiziološke raztopine in raztopite majhen del mikrobnega pridelka. Pomembno je, da priprava ni zelo debela. Nato postavite kapljico kitajskega ali nigrozinskega črnila in zmešajte.

Nato je na pripravi nameščen pokrovček, ne da bi presegel tekočino. Opazimo ga na mikroskopu, ki se najprej osredotoči na 10x cilj in nato preide na 40x.

To tehniko lahko uporabite tudi pri vzorcih CSF. To pomeni, da namesto dajanja kapljice mikrobne kulture postavite kapljica.

Prednosti

Je preprost način izvajanja in hkrati ekonomsko. Ne zahteva fiksacije ali sušenja priprave.

Slabosti

Kot pomanjkljivost ga je treba opaziti na mikroskopu, preden se priprava posuši, ker če se to zgodi.

Po drugi strani se lahko pojavijo lažni pozitivni rezultati, če je analitik neizkušen, saj levkociti običajno zmedejo kvasovke.

Opazovanje kvasovk s kapsulo s kitajsko ali nigrozinsko tehniko je treba obravnavati kot domnevno diagnozo Cryptococcus neoformans Dokler se ne prikazuje z gojenjem.

To je zato, ker obstajajo drugi kvas, ki bi lahko bili vzrok za meningitis in ne samo Cryptococcus neoformans, kot sta tisti iz rodu Candida in Rhodotorula, pa tudi druge vrste Cryptococcus.

Vam lahko služi: acetil koencim do

Interpretacija

Če obstajajo kapsulirani mikroorganizmi, bomo opazili temno ozadje, s prozornimi telesi, ki plavajo v tekočini, kar poudarja prisotnost kapsule.

Cryptococcus kapsula neoformans, barvan s kitajskim črnilom. Vir: Fotografija: Ponudniki vsebin: CDC/DR. Leanor Haley [javna domena]

-Indijska tehnika črnila

To tehniko je mogoče izvesti tudi z nigrozinom. Je kombinacija prej razloženih tehnik. Ta tehnika uporablja vijolični kristal in Indijo ali nigrozin črnilo.

Bakterijsko telo vzame vijolično barvo vijoličnega stekla, ker je negativno naloženo, medtem ko nigrozin barva dno razmaza. Če ima bakterija kapsulo, bo videti kot prozorna halo okoli mikroorganizma.

Vijolični kristal lahko nadomestimo s katero koli od teh obarvanj: safranin, osnovni fuchsin ali metilen modra.

Materiali

- Vijolično steklo.

- Nigrozin ali indijsko črnilo.

- Diapozitiv.

- Mikroskop.

Postopek

- Gojite mikroorganizem v kulturnem mediju.

- Na koncu diapozitiva položite kapljico pridelka in zraven, da postavite kapljico indijskega ali nigrozinskega črnila, zmešajte in se raztezajte s koncem drugega diapozitiva.

- Zrak suh in ne popravi toplote.

- Pokrijte z vijolično stekleno raztopino na 1 minuto, operete z destilirano vodo, vendar zelo nežno (mehki curek), spuščeno na prostem.

- Opazujte mikroskop s potopnim ciljem. Iskanje proti skrajnostim podaljšanega.

Interpretacija

Opazili bomo vijolično bakterijsko telo in temno ozadje. Kapsula, če je prisotna, bo okoli bakterij brezbarvna.

Reference

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Osnovne tehnike mikrobiologije. Opazovanje bakterij. Zmanjšajte (biologija). Serija mikrobiologije. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Osnovno obarvanje v mikrobiološkem laboratoriju. Mediagraf.org. 2014; 3 (1): 10-18. Na voljo na: Medigrafski.com
3. Gil m. Negativno obarvanje: fundacija, tehnika, prednosti in slabosti. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. 2009. Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Pan -ameriški uredništvo s.Do
5. Tankeshwar a. Kapsulski madež: načelo, postopek in rezultati. 2019. Vodnik za medicinsko mikrobiologijo. Na voljo v: micOboonline.com