Voges-Proskauer test Kaj je, temelj, priprava, uporablja

On Voges-Proskauer test To je biokemijski test, ki se uporablja za pomoč pri identifikaciji bakterij, ki pripadajo družini Enterobacteriaceae. Še posebej je koristno za razlikovanje sevov od Escherichia coli od Klebsiella in Enterobacter, med drugim.

Test se izvaja v mediju s tekočino, imenovanim rdeči metil-voges proskauer, bolj znan z akronim RM/VP. Ta medij je sestavljen iz puferiranega polipeptona, glukoze, dipotasijevega fosfata in destilirane vode.

Rdeči metril Metilo-Voges Proskauer (RM/ VP)/ pozitiven in negativen VP test. Vir: Fotografija avtorja MSC. Marielsa Gil/ Sudipta.November15 [cc by-sa 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licence/by-sa/3.0)], iz Wikimedia Commons

Trenutni medij RM/VP je sprememba medija Clark in Lubs, ki je prvotno vseboval manj koncentracije peptonov in glukoze. Zato je bilo za pozitivno reakcijo Voges-Proskauer potrebne manj količine vodikovega iona, potrebne za pozitivno reakcijo.

Test temelji na zmogljivosti mikroorganizma uporabe glukoze z butilén-glikolno potjo in tvori nevtralni končni produkt, imenovan acetoin, v prisotnosti kisika in alkalnega pH.

V mediju RM/VP, poleg tega, da lahko razkrijete test Voges-Proskauer, lahko razkrijete tudi Metilian Red Test.

Osnova

Temelj testa Voges-Proskauer

Pluripeptoni, ki so prisotni na sredini, zagotavljajo nepogrešljive prehranske potrebe za rast bakterij. Glukoza je glavna spojina. Mnoge bakterije imajo sposobnost presnavljanja glukoze in oblikovanja piruvične kisline.

Piruvična kislina je sredi presnove glukoze in od tam lahko vsak mikroorganizem stopi v različne poti. Nekateri bodo tvorili mešane kisline, kot so mlečna kislina, ocetna kislina, mravljična kislina in sukcinska kislina, drugi.

Lahko vam služi: flora in favna iz Mexico Cityja

Test Voges-Proskauer razkriva zmogljivost mikroorganizma tvorjenja acetil metil karbinola (acetoina), posredniškega produkta 2,3-butediola v pogojih aerobioze.

Acetoin je zmanjšan in 2,3-varovalna oblika, vendar je ta reakcija reverzibilna, torej, če je 2,3-butediol oksidiran. Zato je kisik nepogrešljiv.

Dipotassium fosfat je pufer, ki mešanico blaži na pH 6,9 ± 0,2.

Temelj za razvoj dokazov in razlage

Za prikaz reakcije je treba razkritje izvesti z uporabo dveh reagentov (Barrit Reagents), znani kot Voges A in Voges B.

VOGES A je 5% raztopina α-naftola, Voges B pa 40% priprava kalijevega hidroksida. Če kalijev hidroksid ni na voljo, ga lahko nadomestite s 40% natrijevim hidroksidom.

Α-naftol je katalizator, ki bo povečal intenzivnost barve reakcije, zaradi česar je najbolj občutljiv test. Α-naftol je treba vedno dodati najprej in mešati cev, tako da medij vstopi v stik s kisikom. Na ta način se sedanji acetoin oksidira v diacetil, 2,3-butediol.

Tako se bo α-naftol pridružil diacetilu, kar se je pridružilo gvanidinskemu jedru, ki je prisotno v argininski aminokislini, slednji.

Kalijev ali natrijev hidroksid je odgovoren za absorpcijo co₂ In reagirati s peptoni. Ta reakcija izvira iz tvorbe roza-salmonske barve, jasno vidno po mešanju cevi.

Vam lahko služi: raven tkiva organizacije: značilnosti in primeri

Da se obarvanost takoj pojavi, je treba mešati pravilne količine diacetila, peptona in α-naftola. Če se to ne zgodi, lahko cev lahko počiva 15 minut, preden razlaga.

Test je na splošno pozitiven po 2 do 5 minutah, ko lahko vidite šibko roza barvo. Če pustite 30 minut v mirovanju v 1 uro, bo intenzivnost barve največja (intenzivna rdeča).

Negativni test bo dokazan, ko je juha rumena. Po 1 uri, če je test negativen, lahko oblikujemo koperni barvni produkt reakcije kalijevega hidroksida na α-naftolu.

Priprava

Srednji RM/VP

Tehtajo 17 gr dehidrirane kulture in se raztopijo v litru destilirane vode. Pustite stati 5 minut. Segrejte do vrenja, da se popolnoma raztopi. V epruvetah servirajte 3 do 4 ml in sterilizirajte v avtoklaviju pri 121 ° C 15 minut.

Dehidrirani kulturni medij je bež, pripravljen medij.

Končni pH medija je 6,9 ​​± 0,2.

VOGES reagent a

Tehtamo 5 gr iz α-naftola in se raztopimo v 50 ml etilnega alkohola (absolutno). Nato dodamo etilni alkohol celo Enrasar pri 100 ml.

VOGES reagent b

Tehtamo 40 gr kalijevega hidroksida in se raztopimo v 50 ml destilirane vode v čaši. Kozarec je treba namestiti v hladno vodno kopel, da nadzoruje temperaturo, saj ob raztapljanju priprave močno dvigne temperaturo.

Ko je raztopina hladna, se prenese na sesekljano kroglico in izplakne pri 100 ml z destilirano vodo.

Lahko vam služi: krvni agar

Voges-Proskauer testni postopek

Za izvedbo testa Voges-Proskauer je juha RM/VP inokulirana s preučevanjem mikroorganizma, od čistega pridelka od 18 do 24 ur.

Inokulum ne bi smel biti zelo gost. 35-37 ° C je inkuba od 24 do 48 ur, čeprav je inkubacija več dni včasih potrebna. Cowan in Steel verjameta, da je 5 dni minimalni čas inkubacije, potreben za odkrivanje vseh Vges-Proskauer (VP) pozitivnih vrst družine Enterobacteriae.

Razkrit test

V cevi ločite alikvot 1 ml in naredite razvoj na naslednji način: Postavite 12 kapljic (0,6 ml) Vog A in 4 kapljic (0,2 ml) VOGE B. Zmešajte do zraka in pustite stati 5 - 10 minut, preden razlagate. Če pa je test še vedno negativen, pustite, da stojite in opazujte cev po 30 minutah do 1 uro.

Videz roza-rdeče barve kaže, da je reakcija Voges-Proskauer pozitivna. Če medij ostane rumen, je reakcija negativna.

Dodajanje razkritja v navedenem vrstnem redu in količini je bistvenega pomena, da se izognete lažnim negativnim.

Uporaba

Voges-Proskauer test je uporaben za razlikovanje med sevi od In. coli ki so negativni VP, med žanri Klebsiella, Enterobacter, Serratia, med drugim, ki so pozitivni VP.

Vir: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.

QA

Če želite preizkusiti kakovost pripravljenega medija, lahko uporabite kontrolne skupine, vključno z Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella tiphimurium in Kanalizacija Enterobacter ATCC 13047.

Pričakovani rezultati so pozitivne reakcije Voges-Proskauer samo za K. pneumoniae in In. Cloacae. Ostali dajejo negativne reakcije.

Reference

1. Britanski laboratoriji. MR-VP povprečje. Na voljo na: www.Britanaalab.com