Test koagulaze, postopek in uporabe

The Test koagulaze To je laboratorijska tehnika, ki se uporablja za poudarjanje prisotnosti encima koagulaze. Ta encim ima lastnost koagularne plazme. Loeb leta 1903 je prvi opisal ta encim.

Ta test se izvaja tako zlati stafilokok preostalih Staphylococci, saj je edini mikroorganizem kliničnega pomena, ki ga proizvaja.

Obe sliki razkrivata pozitiven test koagulaze. Vir: Leva slika: Philippinjl [cc by-sa 3.0 (http: // creativeCommons.Org/licence/by-sa/3.0/]]. Prava slika: fotografija, ki jo je posnel avtor MSC. Marielsa Gil.

V tem smislu se člani družine Staphylococaee, ki opravijo ta negativni test.

Obstaja nekaj sevov, ki se razlikujejo od S. aureus  ki lahko proizvaja koagulazo, kot je Staphylococcus schleiferi spp coagulans, s. Hyicus, s. Intermedius in s. Delphini.

Vendar so prvi trije kliničnega pomena na veterinarski ravni in jih je le redko mogoče najti kot vzročno sredstvo za človeške okužbe, medtem ko S. Delphini Najdemo ga le v morskih okoljih.

Poleg tega se zlahka razlikujejo, ker S. Hiicus in S. Intermedius Ne fermentirajo manitola in S. Schleiferi spp koagulani ne fermentira maltoze, niti trehalosa, medtem ko S. aureus Da Ferment teh ogljikovih hidratov.

Prisotnost encima koagulaze je povezana z virulenco sevov.  Vendar pa ta teorija upada, glede na to, da opazimo druge virulentne negativne koagulazne vrste, ki lahko ustvarijo pomembne okužbe.

[TOC]

Osnova

zlati stafilokok Proizvaja dve vrsti koagulaze, ki ostane povezana s celično steno, imenovan tudi aglutinacijski faktor ali reaktivni faktor koagulaze (FRC), in zunajcelična, ki se sprošča v tekočih pridelkih. Zato se imenujejo Združena koagulaza in brezplačna koagulaza.

Encim koagulaze svoje ime dolguje dejanju, ki ga proizvaja. To ima sposobnost preoblikovanja fibrinogena v fibrin, kar ustvari očiten strdek, ko je v plazmi, to je, da ta encim simulira trombinsko aktivnost koagulacijskega slapa.

Pravzaprav je ena najbolj sprejetih teorij ta, da združena koagulaza reagira s prostim koagulazo, da aktivira faktorje koagulacije. Ta aktivacija ustvari snov, ki deluje podobno kot Prothrombin, ki ustvarja spojino s funkcijo trombina.

Vam lahko služi: profil ščitnice: funkcija hormona, pomen, količinsko določanje

Razlika z običajnim koagulacijskim slapom je v tem, da ta reakcija ne potrebuje prisotnosti kalcija in na to ne vpliva heparin.

Za izvedbo testa koagulaze je dovolj, da se soočimo s svežim pridelkom Staphylococcus s prednostno zajčjo plazmo in tako opazujemo tvorbo ali ne iz strdka.

Obstajajo posebne tehnike za odkrivanje združene koagulaze in združene in brezplačne koagulaze hkrati.

Nekaj ​​sevov S. aureus Dajejo hitrejši pozitiven rezultat kot drugi. Hitrost tvorbe strdka je neposredno sorazmerna s sedanjo koncentracijo koagulaze.

Tehnika testa koagulaze na diapozitivu zazna Združene koagule.

Postopek

-Test koagulaze v držalo

Materiali

-Čist diapozitiv

-Za zajčjo plazmo je mogoče uporabiti tudi človeško ali konjsko plazmo. Plazmo lahko pridobimo komercialno liofilizirano in rekonstituiramo, ko se bo uporabljal ali jo lahko uporabimo za sveže (pred kratkim). Druga izvedljiva alternativa je uporaba fibrinogena.

-Slana raztopina (0,85%) sterilna (SSF).

Pridobivanje sveže plazme

Izvlecite človeško ali živalsko vensko kri. Lahko uporabimo katero koli od naslednjih antikoagulantov: EDTA, kalcijev oksalat, heparin ali natrijev citrat. Dobro zmešamo in centrifuge. Aseptično odstranite supernatant (plazma), brez rdečih krvnih celic in nalaganja v sterilni cevi.

Ločitev v plazmi. Vir: Fotografija avtor: MSC. Marielsa Gil.

Liofilizirana plazma

Rekonstitut, kot je določeno s komercialnim kompletom.

Svež fibrinogen

Iz citratene plazme zmešajte plazmo z nasičeno raztopino natrijevega klorida. Pustiti.

Zavrzite supernatant, obnovite oborino do 5 -krat večji volumen s sterilno destilirano vodo. Dodajte 5 heparinskih enot za vsak ml fibrinogena. Shrani.

Tehnika

V diapozitivu kapljica fiziološke raztopine in kapljice plazme ločeno postavimo. Vzemite s platinasto ročajem 1 ali 2 čisti kolonija mikroorganizma, da poskusite.

Zmešajte bakterijsko obremenitev v padcu plazme in ponovite delovanje v kapljici SSF. Rezultate takoj upoštevajte. Pozitiven rezultat bo tisti, pri katerem se po eni minuti na kapljici s plazmo opazi tvorba makroskopskega aglutiniranega (bela oborina).

Lahko vam služi: Ekofiziologija: Katere študije in aplikacije pri živalih in zelenjavi

SSF -ov kapljica služi kot negativni nadzor. Če opazimo aglutinacijo s SSF. V tem primeru je treba potrditi s testom cevi.

Priporočljivo je tudi namestiti pozitiven nadzor z znanim sevom S. aureus.   

Interpretacija

Aglutinacija znotraj 5 do 20 SEG (močan pozitiven test).

Spremenljiva aglutinacija med 20 sekundami in eno minuto (pozitiven zamudni test).

Določena stopnja aglutinacije po minuti (dvomljivi test). Priporočljivo je ponoviti test ali potrditi po metodi cevi.

Ni aglutinacije (negativni test).

Rezultat s SSF. Vedno mora dati negativno, če je rezultat testa samodejno.

-Preskus cevi koagulaze

Materiali

-Sterilna epruveta

-Plazma

-Maria Bath pri 37 ° C.

Tehnika

Izmerite s sterilno 0,5 ml pipete plazme in jo postavite v preizkusno cev 12 x 75. Naložite platinasto ročaj z 2 do 4 čistimi kolonijami, da se preučite iz trdnega pridelka od 18 do 24 ur in ga v plazmi previdno razblinite, mešajte in inkubirate pri 37 ° C 4 ure pri 37 ° C.

Preučite cev v prvi uri, ne da bi jo stresali, le nežno nagnjeno. Če še vedno ne opazimo nobenega strdka, lahko še naprej opazujete vsakih 30 minut, dokler ne končate 4 ure. Če je po 4 urah še vedno negativen, ga lahko pustite do 24 ur, vendar pri sobni temperaturi. Upoštevajte in poročajte o rezultatu.

Na podlagi izkušenj nekateri mikrobiologi priporočajo uporabo 500 ul bakterijske suspenzije iz 18 -urnega pridelka v tekočem mediju za izvedbo testa.

Očitno ponuja hitrejše in zanesljivejše rezultate kot takrat, ko so emulgirane kolonije iz trdnih medijev, še posebej, če je bila uporabljena človeška plazma, pridobljena iz banke krvi.

Uporaba sevov iz juhe pomaga zmanjšati možno prisotnost človeških protitelekoknih protiteles v plazmi, ki lahko zavirajo delovanje koagulaze.

Interpretacija

Če strdek, ki pokriva vso tekočino (popolno koagulacijo) ali strdek, ki ga v preostali tekočini (delna koagulacija) nič ne bi smel obravnavati kot pozitiven test.

Vam lahko služi: veje biologije in kaj študirajo

Če se ne tvori, to je, je suspenzija homogena, test je negativen.

-Koagulazni test z uporabo fibrinogena

Fibrinogen se uporablja tako kot plazma in služi tako za test držala kot test cevi. Nadaljujte, kot je opisano za plazmo, in razlagati na enak način.

Uporaba

Uporablja se za razlikovanje zlati stafilokok negativnih koagulaz Staphylococci.

QA

Imajo sveže pridelke seva S. aureus Uporabljati kot pozitiven nadzor. Lahko imate tudi obremenitev S. epidermidis kot negativni nadzor.

Omejitve

-Pozitivnega testa ne smete pustiti v inkubaciji 24 ur, kot S. aureus proizvaja fibrinolizin, ki raztopi strdek.

-Za zanesljiv test je treba uporabiti svežo ali sveže rekonstituirano plazmo, pa tudi pomembno je uporabljati sveže bakterijske pridelke (18 do 24 ur). To se izogne ​​lažnim negativnim.

-Test je treba izvesti skupaj z negativnim nadzorom in pozitivnim.

-Nekateri trdni mediji lahko motijo ​​test koagulaze. Ni priporočljivo.

-Če se uporablja citralna plazma. To je zato, ker nekateri različni mikroorganizmi iz S. aureus Lahko razgradijo citrat in naredijo plazemski strdek. V tem primeru je priporočljivo narediti gram in test katalaze.

-Pomembno je pri preskusu cevi spremljajte reakcijo vsakih 30 minut, saj obstajajo sevi S. aureus ki proizvajajo visoke koncentracije fibrinolisina in bodo razredčene na novo nastale strdek. Izogibajte se lažnim negativom.

-Pri spremljanju preskusa se je treba cevi naglo izogibati, kar lahko uniči začetek tvorbe strdka, ki ne bo obnovljen, kar povzroči lažne negativnosti.

Reference

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testi za identifikacijo bakterij kliničnega pomena. 3. izd. Pan -ameriški uvodnik. Buenos Aires. Argentina.
4. Pro-labijski laboratoriji. Zajec koagulira plazmo. Na voljo pri: pro-labi.com
5. "Koagulaza." Wikipedia, brezplačna enciklopedija. Februar 2019, 04:23 UTC. ABR 2019, 15:50 Wikipedia.org.