Priprava kulturnih medijev

Priprava kulturnih medijev je metodologija za rast mikroorganizmov, da bi jih preučili

Kakšna je priprava kulturnih medijev?

The Priprava kulturnih medijev Gre za rutinsko metodologijo, ki se uporablja v laboratorijih za rast želenih mikroorganizmov. Kulturni mediji so trdni, tekoči ali napol trdni pripravki, ki jih imajo vsa potrebna hranila za razvoj mikrobne populacije.

Na splošno so sredstva za gojenje mikroorganizmov bogata z beljakovinami in aminokislinami in ponavadi vsebujejo nekaj komponente, ki daje prednost rasti organizma, ki ga želite preučiti, kot so vitamini, kri, serum, med drugim.

Splošne ali univerzalne kulture ni sredstev, saj se njegova sestava razlikuje glede na potrebe mikroorganizma, ki vas zanimajo. Nekatere bakterije je mogoče razviti v katerem koli kulturnem mediju, druge pa imajo posebne zahteve.

Iz česa je sestavljeno?

Mikroorganizmov, kot so glive in bakterije, ni mogoče preučiti posamično zaradi svoje mikroskopske velikosti. Zato jih je treba gojiti v umetnih medijih, ki omogočajo znatno povečanje prebivalstva.

Na primer, če želimo preučiti bakterije, jim moramo zagotoviti ustrezne pogoje, da se lahko širijo in tvorijo kolonijo (ki jo lahko opazimo s prostim očesom).

Priprava kulturnih medijev se zelo razlikuje glede na vrsto mikroorganizma, ki ga želite gojiti. Preden ga pripravite, je treba poznati osnovne prehranske potrebe delovnega organizma.

Spodaj bodo opisane najpogostejše komponente, ki se uporabljajo v rastlinskih medijih, da bodo splošna predstava o njegovi pripravi:

Agar

Uporablja se v pridelkih kot geling sredstva in dodaja, ko iščemo trden ali pol -solidni medij. Prvo strjevalno sredstvo, uporabljeno pri medijskem pripravi, je bila želatina, a leta 1883 je agar v svet bakteriologije uvedel W. Hesse.

Agar bakteriološkega tipa ima kot glavni sestavni del polisaharid zapletenih posledic, pridobljen iz alg. Ta spojina se uporablja kot zgoščevalec običajne hrane, kot so sladoled in džemi.

Je zelo dragocen element v mikrobiologiji iz več razlogov. Predvsem zato, ker mi mikroorganizmi ne morejo razgraditi, utemelji pri temperaturi 100 ° C in ostane v tekočem stanju, dokler ne doseže 45 ° C ali manj.

V primeru, da želite pripraviti trden medij, mora biti koncentracija agarja približno 1,5%, pol -solide pa morajo biti pripravljene od 0,3 do 0,5%.

Tekočine

Gojenje patogenih organizmov potrebuje telesne tekočine, tako da se lahko razvijejo, kot bi se v njihovem naravnem okolju.

Vam lahko služi: protetična skupina

Zaradi tega dodamo popolno ali defibrirano kri. Tekočina se ekstrahira iz zdrave in, ko ste sterilizirana žival, dodamo v kulturni medij.

Izvlečki

Pridobljeni so iz različnih živalskih delov (na primer mesa ali jeter) ali zelenjave (semena) in so predelani tako.

Najpogostejši so izvlečki kvasa, slada in mesa.

Peptonas

Te organske spojine dobimo z encimsko ali kemijo živalskih ali rastlinskih tkiv. Namen je dodati bogato vsebnost aminokislin, ki so temeljne enote beljakovin.

Amortizerji

"Puferji" ali sistemi, ki absorbirajo udarce.

Večina organizmov lahko pravilno razvije pH 7, čeprav nekatere bakterije raje alkalne medije. Vendar pa obstajajo bakterije, ki se upirajo variacijam pH med vrednostmi 6 in 9.

Pri pH -občutljivih vrstah poškodbe ne nastanejo zaradi prekomerne količine vodikovih ali hidroksilnih ionov, temveč s povečanjem šibkih kislin ali baz, ki lahko prodrejo v celico.

Prav tako se dodajo kazalniki pH, da ga lahko spremljajo in se izognejo odstopanjem, ki jih povzročajo fermentacije ali drugi procesi.

Cilji

Glavni cilj pri pripravi kulturnega medija je dodati vse potrebne komponente, da omogočimo uspešni razvoj organizma, ki želi izolirati. Kombinacija učinkovitejših komponent in hranil za dosego želenih sredstev je treba prepoznati.

Priprava in srednje skladiščenje sta ključnega pomena za uspešno rast, saj so ti koraki odvisni od sestave okolja in razpoložljivosti hranil.

Upoštevati je treba, da je gojenje mikroorganizmov naloga, na katero vpliva več dejavnikov, ki so zunaj kulturnega okolja, kot so intenzivnost prejete svetlobe, temperatura in raven kislosti ali alkalnost medija.

Zato je treba upoštevati vsako od teh spremenljivk in strogo spremljati.

Vrste medijev

Na podlagi njegove sestave

Na podlagi njegove sestave obstajajo tri glavne vrste pridelkov: naravni ali empirični, pol-sintetični in sintetični ali kemični sredstva.

Naravno okolje

V naravnih medijih natančna sestava ni znana. Sem spadajo sestavine, kot so mleko, razredčena kri, rastlinski sokovi, izvlečki in infuzije mesa in peptonov.

Iz ekonomskih razlogov se običajno dodajo komponente z nizkimi stroški, kot so ekstrakt soje, serum, melasa itd.

Vam lahko služi: podpora: značilnosti, funkcije in primeri

Polsintetični mediji

Imenuje se pol-sintetični, če je sestava istega delno znana. Vsak medij, ki vsebuje agar, je polsintetični medij.

Med njimi imamo med drugimi primeri dekstrozni krompir, czapek-dox agar, ovseno kašo, ovzem mesa peptona.

Sintetični ali kemično definiran medij

V tem primeru je sestava medija - glede na količino ogljika, dušika, žvepla, fosforja in katerega koli drugega rastnega faktorja, popolnoma znana - popolnoma znana.

Zelo koristno je, če želite pridobiti ponovljive rezultate za druge raziskovalce.

Za tako imenovane "mikroorganizme s posebnimi zahtevami rasti" morate dodati potrebne komponente. Primer te vrste so Lactobacillus.

Na podlagi vrste mikroorganizma

Na enak način obstaja še ena klasifikacija za kulturne medije, ki temelji na vrsti mikroorganizma, ki lahko v njem raste.

Po tem načelu imamo naslednje: Splošna sredstva, obogatitev, selektivna in diferenciala. Vsaka je opisana spodaj:

Splošna sredstva

Ti priznavajo razvoj najrazličnejših mikroorganizmov. Če kateri koli organizem potrebuje posebne pogoje za svojo rast, se ne bo mogel uspešno razvijati pri tej vrsti pridelkov.

Obogatitveni mediji

Obogatitev pomeni prednost rasti določene vrste mikroorganizma, vendar ni bila dodana nobena snov, da bi preprečili, da bi druge vrste mikrobov raslo v njem.

Selektivna sredstva

Med drugim iščejo specifično rast mikroorganizma, med drugim kličejo glive, bakterije, protozoje. Da bi to naredili, zavirajo razvoj drugih.

Da bi dosegli ta cilj, lahko dodajamo smrtne kemične spojine za široko skupino mikroorganizmov in neškodljive za zanimanje ali dodajanje virov energije, ki jih je mogoče uporabiti samo iskani mikrobi.

Selektivni mediji se uporabljajo, ko se odvzamejo medicinski vzorci, da se gojijo nekaj patogenega mikroorganizma. Tu je treba dati prednost rasti patogena in zavirati razvoj normalne mikrobne flore od pacienta.

Na primer bizmut sulfitni agar ne omogoča rasti gram -pozitivnih bakterij in velikega števila bakterij, ki jih najdemo v prebavi.

Zato se uporablja za gojenje gram -negativnih bakterij, ki povzročajo tifusno vročino, Salmonella Typhi, V vzorcih fekalnih.

Diferencialna sredstva

Ta vrsta uporablja nekatere diagnostične značilnosti organizma, ki ga zanima (na primer posebnosti pri presnovi), da jih lahko identificira pred drugo vrsto, ki raste v istem mediju.

Lahko vam služi: transfaze: kaj so, funkcije, nomenklatura, podrazredi

Tako različni mediji kot selektivna sredstva so zelo koristni na področju klinične mikrobiologije in javnega zdravja, saj morajo te discipline zaznati prisotnost specifičnih mikroorganizmov, povezanih s patologiji ali slabimi pogoji higiene.

V pridelku lahko dodate indikatorne snovi, ki podeljujejo značilnost iskani koloniji. Na primer, do srednjega agar-eozin-rula metilena (skrajšanega EM) in agar-macconkey se dodajo laktoza in pH indikator.

Ko se v teh medijih razvije kolonija s sposobnostjo fermentiranja laktoze in proizvodnje aldehidov, jih lahko opazimo v posebni barvi.

Koraki za pripravo kulturnih medijev

Trenutno lahko gojenje kupite na liofiliziran način. Zato je priprava olajšana in ostane samo izdelek.

Vsebina mora biti težka (ob upoštevanju končnega zneska, ki ga želite pripraviti) in raztopljena v destilirani vodi po vseh indikacijah izdelka.

Vsebnost tekočega medija je treba za naknadno sterilizacijo razdeliti na želene posode (petrijeve plošče, cevi itd.).

Za distribucijo trdnega medija je potrebno, da ga stopimo z mikrovalovno pečico ali oddajo materiala v vodno kopel. Srednji pH je treba prilagoditi.

Običajno se agar uporablja v epruvetah ali v petrijskih ploščah. Če se agar utrdi v nagnjenem položaju, z ustreznim kotom, da je končni rob končnega roba diagonal, je znan kot flavta ali nagnjene piko cevi.

Ko se agar utrdi v popolnoma navpičnem položaju, se dobi ime "globoko".

Po sterilizaciji medijev - z uporabo avtoklava - jim pustijo, da se ohladijo. Te je treba manipulirati v okolju, ki ne vsebuje mikroorganizmov, najpogosteje je delo z lažjim vžigom, ki zagotavlja aseptično okolje v njegovi bližini.

Reference

1. Celis, J. In. (2006). Celična biologija: laboratorijski priročnik (Vol. 2). Elsevier.
2. Finegold, s. M., Bailey, w. R., Baron, e. J., Fineglod, s. M., & Scott in. G. (1991). Bailey Scott: mikrobiološka diagnoza. Pan -american Medical.
3. Olivas, npr. (2004). Priročnik mikrobiologije in II in parazitologije. Avtonomna univerza v Ciudadu Juarezu.
4. Schlegel, h. G., & Zaborosch, c. (1993). Mikrobiologija Splošno. Cambridge University Press.
5. Tortora, g. J., Funke, b. R., & Case, c. L. (2007). Uvod v mikrobiologijo. Ed. Pan -american Medical.