Kulturni mediji, funkcija, vrste, priprava

The kulturni mediji So posebne prehranske priprave na okrevanje, izolacijo in vzdrževanje bakterijskih in glivičnih mikroorganizmov. Ti mediji so lahko trdni, tekoči ali pol -solidni.

Louis Pasteur je prvi dokazal, da je v juhi, narejeni s koščki kuhanega mesa, postregla tako, da se bakterije reproducirajo v veliki količi. V tem smislu se pasterjeva mesna juha šteje za prvi uporabljeni medij tekoče kulture.

Nepripravljeni kulturni mediji (trdne snovi in ​​tekočine). Vir: Flickr

Potem je Robert Koch, zahvaljujoč pomoči svojih sodelavcev Julius Richard Petri in Walter Hesse, dosegel velik napredek. Prva je zasnovala Petrijsko ploščo, ki se še danes uporablja; In drugi se mu je zgodil, da je želatino zamenjal za agar-voda za pripravo medijev za trdno kulturo, ki je bil zelo pomemben, saj so žele razgrabili nekateri mikroorganizmi.

Trenutno obstaja veliko vrst kulturnih medijev za različne namene, zato so ti razvrščeni v skladu z njihovo funkcijo: med najpomembnejšimi sredstvi prehranske gojenja, selektivnega, diferencialnega, prometa, obogatitve, štetja, kolonij, vzdrževanja in vzdrževanja in vzdrževanja in Za dokaz dovzetnosti.

Nekateri kulturni mediji so posebni za opazovanje kemijskih reakcij, saj so zelo koristne za identifikacijo vključenega mikroorganizma. Med njimi je mogoče omeniti: srednji Kigler, Mio, Lia, Citrate, med drugim.

[TOC]

Zgodovina

Prvo kulturno medij je pripravil Louis Pasteur, ko je poskusil.

Pripravil je juho s koščki mesa in opazil, da se je po nekaj dneh po izpostavitvi zraku obrnil mutni in v juhi je bila opazna količina mikroorganizmov. Hkrati je še ena juha s koščki mesa, ki je bila prej kuhana in hermetično zaprta, ostala prosojna, ko so minili dnevi.

To je pritegnilo pozornost številnih raziskovalcev in spoznalo, da so ti mikroorganizmi odgovorni za razpadanje mesa in poleg tega, da so ustvarili nekatere bolezni.

Zaradi tega je bilo nujno ustvariti način za reprodukcijo teh mikroorganizmov v laboratoriju, da bi jih bolj temeljito preučili.

V tem smislu je Robert Koch neprecenljivo prispeval k izboljšanju nekaterih laboratorijskih tehnik, zlasti tistih, povezanih z bakterijsko izolacijo, ko je uvedel koncept trdnega kulturnega medija.

Sprva je uporabil krompirjeve rezine kot trden medij, nato pa mesnim juham dodal želatino z boljšimi rezultati. Vendar so bili časi, ko se je žele, stopil in postal tekoči pridelek. Danes je znano, da se to zgodi, ker so nekatere bakterije sposobne hidrolizirati želatino.

Takrat se je ena od njegovih sodelavcev zgodila ideja o uporabi agar-adding, spojine, ki jo je njegova žena zgostila.

Ta medij rudimentalne kulture je postopoma prefinjen, dokler ne dosežejo kulturnih medijev, ki so danes znani.

Kompozicija

Vsak medij ima drugačno sestavo, vendar je nujno, da vsebuje posebna hranila za dober razvoj vrste mikroorganizma.

Vsebuje lahko tudi posebne kemikalije, ki pomagajo razkriti presnovno pot, ki ima določen sev, ali ki dokazujejo prisotnost nekaterih encimov.

Drug pomemben element je uporaba snovi amortizerja. Ti pomagajo ohraniti osmotsko ravnovesje medijev, pa tudi pH.

Vsebujejo lahko tudi ogljikove hidrate in pH indikator, da pokažejo fermentacijo dodanega sladkorja. Če pride do zakisljevanja s fermentacijo, bomo opazili spremembo barve medija.

Nekateri kulturni mediji vsebujejo inhibitorne snovi. Odvisno od uporabljene snovi bo rast mikroorganizmov omejena, druga pa bo naklonjena.

Vrste kulturnih medijev

Mediji za gojenje so razvrščeni po različnih merilih. To so: glede na njihovo doslednost, njihovo sestavo in njihovo funkcijo.

- Glede na vašo doslednost

Tekočine

Ne vsebujejo agarja -. Rast bakterijske ali glive dokazuje motnost juhe, ki je prvotno prosojna.

Trdne snovi

Vsebujejo med 1,5 do 2% agar -gar. Utlirana mešanica ima površino, ki se upira finemu premiku platine, ne da bi se zlomil.

Pol -solid

Vsebujejo približno 0,5% agar -agar, zato je vmesno stanje med tekočino in trdno snovjo. Idealno v medijih, ki služijo za ogled gibljivosti. Priporočajo jih tudi za ohranjanje sevov, saj dolgo zadržujejo vlago.

Vam lahko služi: salacionizem: značilnosti, dokazi in primeri

Bifaza

To so pomeni, da so pripravljeni tako, da obstaja trdna faza in na tem tekočem mediju. Široko se uporablja za krvne kulture.

- Glede na njegovo sestavo

Mediji naravne kulture

So snovi, ki jih vzamejo neposredno iz narave, da gojijo bakterije, kar jim daje okolje najbližje, kako se običajno razvijajo v ekosistemu. Primer, mleko, sokovi, razredčena kri, serum itd.

Mediji sintetične kulture

Danes so najbolj uporabljeni, to so dehidrirani pomeni, da pridobimo v komercialnih hišah in do katere je znana njihova kemična sestava, saj so bili strateško zasnovani glede na vrsto mikroorganizma.

Mediji pol -stintetske kulture

To je kombinacija sintetičnega medija, ki mu je dodan naravni element za obogatitev medija.

Celični kulturni mediji

So posebna sredstva za gojenje virusov, kot so ti mikroorganizmi, ne morejo preživeti zunanjih celic, vsebovati morajo tkivo ali žive celice, od živali ali rastline.

Primer: celične opične ledvične pridelke ali embrionalna jajca.

- Glede na njegovo uporabnost

Hranilna, selektivna, diferencialna, transport, obogatitev, identifikacija, količinsko določanje kolonij, preskusi vzdrževanja in dovzetnosti. Bo opisan pozneje.

Delovanje

Ne glede na vrsto kulturnega medija ima vsak nekaj skupnega in je, da olajšajo ali spodbujajo reprodukcijo nekaterih mikroorganizmov. Razlika je v sestavi vsakega od njih, kar je odločilni dejavnik za končno uporabnost.

Vsak od obstoječih kulturnih medijev je strateško zasnovan za posebno funkcijo, za katero je bila ustvarjena, torej vsi imajo temelj, ki ureja smernice za njihovo posebno funkcijo.

Treba je opozoriti, da morajo kulturni mediji, ko se posejani.

Na primer, če želite izolirati mezofilne anaerobne bakterije, krvni agar in inkubirati v pogojih anaerobioze (brez kisika) pri 37 ° C 48 ur 48 ur 48 ur 48 ur 48 ur.

Zdaj, če je za izolacijo potrebna gliva, se uporablja sabouraud agar z antibiotiki. Inkubira se v aerobiozi, pri sobni temperaturi več dni, saj je slednja počasna rast.

Preprosti hranljivi kulturni mediji

Kot že ime pove, ti kulturni mediji vsebujejo prehranske snovi, kot so vitamin, aminokisline, dušik in viri ogljika, med njimi jih je mogoče omeniti: ekstrakt mesa ali ekstrakt kvasovk, koruzni škrob, prebavljeno trebušne slinavke, peptone, glukoza, glukoza, glukoza, glukoza, glukoza, glukoza.

Vsebujejo tudi druge komponente, ki okolju zagotavljajo osmotsko ravnovesje, saj večina pridelkov zahteva pH blizu 7,0. Ti elementi so lahko: natrijev klorid, disodijev fosfat, med drugim.

Razredčilo je destilirana voda, trdni mediji.

Namen te kulture pomeni obnoviti bakterijsko ali glivično mikrobioto, ki obstaja v določenem vzorcu. Ne diskriminira med mikroorganizmi, ker lahko goji veliko bakterij, tako gram pozitivnih kot gram negativnih, pa tudi gliv kvasovk in micelijskih gliv.

Priporočajo jih sejati vzorce, ki prihajajo iz normalno sterilnih mest. Vendar ne služijo zahtevnim mikroorganizmom.

Uporabni so tudi za vzdrževanje sevov, dokler ne vsebujejo glukoze.

Obogatitev kulturnih medijev

Če se doda kri ali ogrevana kri v preproste prehranske medije, postanejo obogateni mediji (krvni in čokoladni agar).

Ta sredstva so zelo koristna za sejanje vzorcev, ki so običajno sterilni, za reševanje sevov, ki so šibki in izolirajo zahtevne mikroorganizme z prehranskega vidika.

Selektivni kulturni mediji

Selektivni kulturni mediji, poleg tega, da vsebujejo bistvena hranila za rast nekaterih zanimivih mikroorganizmov, dodajo tudi zaviralne snovi, kot so antibiotiki, protiglivični, barvila, žolčne soli.

Inhibitorne snovi so namenjene zmanjšanju raznolikosti sevov, ki lahko rastejo, in dajejo prednost rasti posebej posebne skupine, ki želi rešiti.

Primer: EC juha (posebna za skupne in fekalne koliforme) ali sabouraud agar z antibiotiki (specifično za glive).

Diferencialni kulturni mediji

Diferencialni mediji vsebujejo prehranske elemente, potrebne za rast določene skupine mikroorganizmov, in vsebujejo tudi snovi, ki bodo ob prisotnosti nekaterih mikroorganizmov presnove ali razgrajene.

To pomeni, da bodo ustvarili kemične reakcije, ki bodo tako ali drugače dokazane v kulturnem mediju.

Lahko vam služi: Photic Zone: Značilnosti, Flora Light, favna

Nekatere reakcije alkalno ali zakisajo medij in zahvaljujoč prisotnosti indikatorja pH, se te spremembe lahko dokažejo skozi barvni zavoj na sredini in koloniji.

Zato med veliko skupino bakterij, ki lahko rastejo v tem mediju, tisti, ki snovi presnavljajo ali razgradijo, in tistimi, ki tega ne storijo.

Na primer, krvni agar omogoča razlikovanje bakterij, ki proizvajajo beta hemolizo (prozorno halo) od tistih, ki proizvajajo alfa hemolizo (zelenkasto halo), in od tistih, ki ne proizvajajo hemolize.

Selektivni in diferencialni mediji

Primer tega je, kaj se dogaja v agarju MacConkey. Selektivna je, saj omogoča le rast gram negativnih bacilov; In je različna, saj lahko razlikuje fermentacijske bakterije laktoze (barvne kolonije fuchsia) ne -fermentiranja (bledo ali brezbarvno roza barva).

Mediji za prometne kulture

Kot že ime pove, so to sredstva, ki se uporabljajo za prevoz vzorcev, ki so bili odvzeti na bolj ali manj oddaljenem mestu v laboratorij, ki bo obdelal vzorec. Prevozna sredstva ohranijo vzorec v najboljših pogojih za zanesljive rezultate.

Ti kulturni mediji imajo zelo posebne značilnosti, saj ne morejo presegati hranil, saj je prisotna bakterijska populacija ostala izvedljiva, vendar brez povečanja števila.

Običajno so pol -solidni mediji, ki omogočajo hidriranje vzorca. Vendar ga ne bi smeli raztresti, da bi vzorec čim prej poslali v laboratorij. Primeri prevoza: Medio Stuart, Cary Blair in Amies.

Polovična in obogatitvena kultura

Ti kulturni mediji so tekoči. Uporabljajo se za reševanje določenih patogenov, ki so v določenem času lahko prisotni v vzorcu minimalne količine.

Koristno je tudi reševati patogeni sev, ki je lahko šibek zaradi nekaterih predhodnih prejetih zdravljenja. Npr.: Voda peptonada, tioglikolatna juha in juha Selenito.

Ta sredstva imajo zaviralne snovi, ki se izogibajo rasti spremljajoče mikrobiote, in specifična hranila, ki dajejo prednost razvoju mikroorganizma, ki vas zanima.

Mediji za gojenje za namene identifikacije 

Ti mediji imajo snovi, ki jih lahko kemično presnavljajo nekatere bakterije, kar ustvarja kemične reakcije, ki kažejo prisotnost specifičnih encimov ali presnovnih poti.

Zato se uporabljajo kot biokemijski testi, ki pomagajo prepoznati žanr in vrste določene skupine sevov. Ex: Srednji Kigler dokazuje, ali je mikroorganizem sposoben fermentirati glukozo in laktozo, če proizvaja vodik in plinski sulfid.

Ta medij vsebuje razkrivajoče snovi, ki omogočajo opazovanje reakcije, kot so indikator pH, in železne ione.

Ta preprost test lahko razlikuje dve veliki skupini bakterijskih mikroorganizmov, kot so bakterije, ki pripadajo družini Enterobacteriaceae iz bakterij.

Pomeni šteti kolonije

To so preprosta, neselektivna sredstva, ki služijo za količinsko določitev mikrobne populacije, kot je standardni račun. Vrsta mikroorganizma, ki bo rasla v tem mediju.

Mediji za gojenje za dokaz dovzetnosti

Standardiziran medij v ta namen je Müeller Hinton agar, to pomeni, da je idealno za oceno vedenja različnih antibiotikov proti izoliranemu patogenemu mikroorganizmu.

Posebej je uporaben pri malo zahtevnih bakterijah, medtem ko je v zahtevnih bakterijah mogoče uporabiti le, če je to dopolnjeno s krvjo.

Vzdrževalna sredstva za vzdrževanje

Ta sredstva so namenjena reprodukciji mikroorganizma in tudi dolgotrajno možno ohraniti sposobnost preživetja bakterije ali glive in tudi, da se njihove fiziološke funkcije ohranijo.

Pomembna značilnost je, da ta vrsta medija ne bi smela vsebovati glukoze, ker čeprav je element, ki zagotavlja hitro rast, njegova fermentacija proizvaja kisline, ki zmanjšujejo življenjsko dobo mikroorganizma.

Nekateri laboratoriji morajo ohraniti nekatere mikroorganizme, ki jih je mogoče pozneje uporabljati v raziskovalnih študijah, notranjem nadzoru ali za učne namene.

Priprava

Trenutno obstaja veliko blagovnih znamk, ki distribuirajo različne kulturne medije. Mediji so v liofilizirani ali dehidrirani obliki, ki jo vsebujejo hermetične in zaščitene kozarce svetlobe.

Vsak medij prinaša nalepko, ki določa ime medija, njene sestavne dele, število parcel in koliko tehtanja za pripravo litra kulturnega medija.

Vam lahko služi: prebiotično evolucijo: kje se je zgodilo in kaj je potrebno

Kot redčenje se uporablja destilirana voda. Težka količina se raztopi v litru destilirane vode, dokler zmes ne homogeniziramo. Večina medijev se odpelje na avtoklav, 15 kilogramov, 121 ° C, za 15 minut časa.

Tekoči mediji so že razporejeni v svojih delovnih ceveh, trdni mediji pa avtoklavirajo v bučkah Erlenmeyer.

Slednji pustite, da stojijo, dokler ne dosežejo temperature 55 ° C in ga postrežejo v Petrijevih ploščah znotraj laminarnega pretoka ali v bližini vžigalnika. Dovoljeno se utrditi in so obrnjeni v hladilniku.

Obstajajo tudi trdni kulturni mediji, ki se distribuirajo v epruvete.

Pred uporabo katerega koli pripravljenega kulturnega medija, bodisi trdnega ali tekočega, se mora pred setvijo vzorca kaliti.

Pomembnost

Kulturni mediji so nedvomno zelo dragoceno delovno orodje za mikrobiologe, saj omogočajo okrevanje nalezljivega sredstva, ki v določenem času lahko vpliva na posameznika ali onesnažujejo hrano, okolje ali površino.

V tem smislu lahko rečemo, da ima mikrobiologija različna področja, med njimi je klinična, industrijska, okoljska, prehrambena mikrobiologija, med drugim pa se uporabljajo v vseh kulturah.

Seveda se lahko vrsta medija, ki se uporablja v vsakem primeru, razlikuje glede na potrebe in vrsto predelanega vzorca. Vpliv je tudi skupina mikroorganizma.

Izolacija patogenega mikroorganizma ali povzročitev onesnaževanja je nujno potrebna, da lahko postavi učinkovito zdravljenje ali sprejme postopke, ki pomagajo odpraviti zadevno onesnaževanje.

V primeru klinične mikrobiologije ni samo pomembno.

Ta študija, ki uporablja tudi kulturni medij.

Zato v mikrobiološkem laboratoriju ne morejo manjkati kulturnih medijev, ne glede na območje.

Končno lahko rečemo, da so nam kulturni mediji omogočili raziskovanje različnih vidikov, tako bakterij kot gliv.

Nadzor kakovosti gojenih medijev

Priprava in uporaba kulturnih medijev ne smete biti rahlo. V vsakem laboratoriju mora biti stanovanje, ki za medije uporablja protokole za nadzor kakovosti, vsakič, ko so pripravite nove sklope, in tako zagotoviti, da so pravilno pripravljeni, sterilni in funkcionalni.

Za oceno njihove sterilnosti se en ali dva sredstva vsake serije naključno vzameta in inkubirata pri 37 ° C več dni (rasti ne sme biti). Za preverjanje njegove funkcije se uporabljajo referenčni sevi ATCC (ameriška zbirka kulture), pravilno gojene in izvedljive.

Odlašanje medijev za gojenje

Po uporabi kulturnih medijev jih je treba zavreči tako, da ne kontaminira okolja.

Da bi to naredili, se material sterilizira v avtoklavu, preden ga zavržemo. Kasneje se material iz steklovine odstrani. Slednji postane opran, posušen, steriliziran in shranjen za kasnejšo uporabo. V primeru uporabe plošč za enkratno uporabo se te sterilizirajo in nato zavržejo v posebnih vrečah.

Reference

1. Borrego mikrobiologija v znamkah VIII. Robert Koch: zmaga vztrajnosti (i). SEM 2018, 117 (1): 1-18 Univerza v Malagi. Na voljo pri: Dnevi.UAB.Mačka/
2. Volcy c. Geneza in evolucija Kochovih postulatov in njihov odnos do fitopatologije. Ocena Kolumb. 2008; 26 (1): 107-15. Na voljo na: Scielo.org.co/
3. Burguet Lago Nancy, Castillo Abraham Lourdes. Nadzor kakovosti kulturnih medijev, ki se uporabljajo pri okoljskem spremljanju klasificiranih proizvodnih območij. Kubanski rev hig epidemiol 2013; 51 (2): 155-160. Na voljo na: Scielo.
4. Bonilla M, Pajares S, Vigueras J, Sigala J, Le Borgne S. Didaktični materialni priročnik osnovnih mikrobioloških praks. Metropolitanska avtonomna univerza. Oddelek za naravoslovje in inženirstvo. Enota Cuajimalpa. 2016. Na voljo na: CUA.UAM.mx/
5. Carbajal a. Mediji celične kulture: pregled. Labome svet laboratorijev. Medicinski center Univerze v Pittsburghu, ZDA. 2013 Na voljo na: ES/
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.