Polovica mojega, kar je, temelj, priprava, uporablja

On Moja polovica Gre za biokemijski test, ki se uporablja za pomoč pri identifikaciji vrst bakterij, ki pripadajo družini Enterobacteriace. Je precej hranljiv in je sestavljen iz glukoze, ekstrakta kvasa, peptona, tripteina, L -nitin hidroklorida, bromokresh in agar vijoličnega.

Pomen njene kratice (rudnik) opisuje vsak parametri, ki jih je mogoče opaziti v tem mediju; Gibljivost, indol in ornitin. Gibalnost je sposobnost mikroorganizma, da se giblje okoli prisotnosti flagela. Da bi lahko opazili to lastnost, mora biti doslednost medija pol -solidna, zato priprava nosi manj količine agarja.

Shema razlage rezultatov v srednjem rudniku. Vir: Pripravil avtor MSC. Marielsa Gil

Proizvodnja indola dokazuje prisotnost encimske triptofanasa, ki deluje na aminokislino triptofana, saj je potrebna za uporabo razkrivajočega reagenta za vidno proizvodnjo indola.

Končno ornithine določi, ali so bakterije sposobne dekarboksilarne.

Osnova

Pepton, ekstrakt kvasovk in triptein

Ti elementi prispevajo k prehranski moči tega medija. Služijo kot vir bistvenih hranil in aminokislin za razvoj bakterij.

Poleg tega je Triptein vir triptofana za prikaz prisotnosti encima triptofanasa, ki razgradi triptofan.

Indol je brezbarven, zato se njegova prisotnost razkrije z dodajanjem pet kapljic reagenta Ehrlich ali Kovacs, obe s p-dimetilaminobenzaldehidom.

Skupina aldehida te spojine reagira z indolom in na površini agarja ustvari proizvod v rdeči barvi fuksije.

Vsak ostanek barve je treba obravnavati kot pozitiven test. Test je treba brati takoj, saj se barva poslabša.

Po drugi strani je treba ta test razkriti, potem ko je opozoril na rezultate gibljivosti in dekarboksilacije ornitina.

Vam lahko služi: kompaktna kost: značilnosti, struktura, funkcije

Interpretacija

Pozitiven test: Oblikovanje rdečega obroča fuksije pri dodajanju kapljic reagenta Kovacs.

Negativni test: Ni tvorjenja obroča.

Gibljivost

Značilnost bakterije bo dokaz.

Negativni test gibljivosti bo dokazan z opazovanjem tanke rasti in vse naokoli bo brez rasti.

Pomembno je, da se gibljivost prebere pred razkritjem.

V mobilnih bakterijah, vendar počasne rasti, je težko pokazati svojo gibljivost s tem medijem. V tem primeru je priporočljivo uporabljati druge teste ali metode, na primer srednje gibljivost ali način čakanja.

Glukoza

Glukoza je fermentirajoča ogljikovi hidrat, ki poleg zagotavljanja energije zakimi medij, nujno stanje, tako da se lahko pojavi dekarboksilacija ornitina aminokisline.

Vedno se mora pojaviti fermentacija glukoze, ki temelji na načelu, da vse bakterije, ki pripadajo družini Enterobacteriaceae, fermentira glukozo.

L -ornitin

V primeru, da bakterije proizvajajo encimski ornitin dekarboksilaza, lahko deluje, ko medij zakisi s fermentacijo glukoze.

Encimska ornitin dekarboksilaza deluje na karboksilno skupino aminokisline, ki proizvaja amin, imenovan Putresina, ki alkheies spet medij.

Ta test je treba brati po 24 urah inkubacije, ker če poskusite brati, preden lahko test napačno razumete z lažnim negativnim.

Ne pozabite, da je prva reakcija, ki se pojavi. Če se dekarboksilacija ornitina pojavi pozneje, bo medij postal vijoličen.

Pomembno je razlagati test dekarboksilacije ornitina, preden razkrijete indol, saj agregat reagenta Kovacs spreminja barvo medija.

Vam lahko služi: kraljestva narave in njene značilnosti

Interpretacija

Negativni test: Rumena ali rumena medij.

Pozitiven test: Popolnoma vijolična polovica.

PH indikator

V tem primeru se uporablja Bromocresol Purple; Oseba, ki je zadolžena za razkritje, ko se na sredini spremeni pH. Z zakiskovanjem indikator postane rumen in ko alkalinarji postane vijoličen.

Posejana in razkrita tehnika

Če želite sejati moj medij, se uporablja ravna ali igla in se z njim zbira del kolonije za študij.

V moji sredini je globoka punkcija v ravni črti. Ni priporočljivo.

Inkubirajte 24 do 48 ur pri 37 ° C v aerobiozi. Upoštevajte rezultate v tem vrstnem redu: gibljivost, dekarboksilacija ornitina in na koncu razkrijte indole.

Priporočljivo je, da v medij odnesete 2 ml, ga prenesete v sterilno cev in tam opravite indolov test, tako da, če daje negativno, lahko preostali del originalne cevi inkubiramo še 24 ur, da ponovno razkrijete Indol.

Razvoj indola je izveden na naslednji način: 3 do 5 kapljic reagenta Kovacs se dodajo v moje okolje in močno vzbujajo. Opazimo, ali se pojavi rdeč obroč Fuchsia ali ne.

Priprava

Moja polovica

Tehtamo 31 gr mojega okolja in se raztopi v litru destilirane vode.

Segrejte, dokler zmes ne vre niti minuto, pogosto mešajte, dokler se agar popolnoma ne raztopi. Razdelite 4 ml medija v epruvetah 13/100 s pokrovom bombaža.

Sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut. Odstranite iz avtoklava in pustite, da stojijo naravnost v šoku, tako da nastane pol -solidni taco.

Shranjujte v hladilniku 2-8 ° C. Naj pred sejanjem bakterijskega seva pusti.

Barva dehidriranega medija je bež in medij, pripravljen vijolično rahlo opalescentno.

Lahko vam služi: različna evolucija: vzroki in primeri

Končni pH pripravljenega medija je 6,5 ± 0.2

Medij postane rumen s kislinskim pH in je vijoličen do alkalnega pH.

Kovacs Reactive (razvijalec Indol Test)

Ta reagent je pripravljen na naslednji način:

Izmeri se 150 ml amila, izoamilnega ali butilnega alkohola (kateri koli od treh). 10 Gr p-dimetilaminobenzaldehida se raztopi vanj. Nato počasi dodamo 50 ml koncentrirane klorovodikove.

Pripravljeni reagent je brezbarven ali prozoren rumen. Shranjujejo ga v jantarni steklenici in ohranjeni v hladilniku. Temno rjava barva kaže njegovo poslabšanje.

Tudi reagent Kovacs lahko nadomesti z reagentom Ehrlicha. Slednji, ker je bolj občutljiv, je raje razkrivanje indola v bakterijah, ki ga proizvajajo v minimalnih količinah, kot pri nekaterih nefermentacijskih negativnih bacilih in nekaterih anaerobih.

Uporaba

Ta medij je test, ki dopolnjuje baterijo biokemičnih testov za identifikacijo bakterij, ki pripadajo družini Enterobacteriace.

Podatki dekarboksilacije ornitina služijo za razlikovanje Shigella Sonnei, ki daje pozitivno, Shigella Boydii, Shigella Flexneri in S. Dysenterieae, Dajejo negativno.

Razlikuje tudi rod Klebsiella, ki daje negativno, iz rodu Enterobacter, kjer večina njegovih vrst daje pozitivno.

Vir: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.

QA

Vsakič, ko je polovica moje pripravljena, je mogoče izvesti kontrolni test. Za to se za opazovanje vedenja medija uporabljajo znani ali certificirani sevi.

Sevi, ki jih je mogoče uporabiti Escherichia coli, Morganella Morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes in Proteus mirabilis.

Pričakovani rezultati so In. coli in m. Morganii. Dan M: +, i: + in o: +.

Klebsiella pneumoniae Dajte vse negativno (M:-, i:-, o :-). Proteus mirabilis in Enterobacter aerogenes Dan M:+ i:- in o: +.

Reference

1. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testi za identifikacijo bakterij kliničnega pomena. 3. izd. Pan -ameriški uvodnik. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.