Bakterijski razmaz, kaj je, značilnosti in priprava

On Bakterijski razmaz Gre za podaljšek v obliki tankega filma suspenzije bakterijskih mikroorganizmov, ki je narejen na prozorni stekleni plošči ali diapozitivu, za opazovanje pod optičnim mikroskopom.

Podaljšek v obliki filma se izvede, da čim bolj ločimo mikroorganizme, saj če je opazovanje razvrščeno, ni jasno.

V preučitvi bakterijskih pridelkov se za bolj analizo uporabljajo tehnike razmaza, pritrditve in pripravljanja barvanja. Zaradi majhnosti mikroorganizmov je nujno potrebna uporaba optičnega mikroskopa za opazovanje.

Optični mikroskopi so nepogrešljivi instrumenti za opazovanje razmaza. Te uporabljajo optične leče in svetlobo, kar omogoča vizualizacijo vzorcev z velikim povečanjem velikosti.

Na splošno žive celice nimajo večinoma obarvanih struktur, pogledi na optični mikroskop so brezbarvni, prozorni vzorci in kažejo zelo malo notranjega kontrasta in z okolico.

Opazovanje s preprostim optičnim mikroskopom prozornega polja, brez uporabe pomožnih tehnik obarvanja, je zelo omejeno in se uporablja le v nekaterih primerih, kot pri opazovanju gibanja mikroorganizma.

Za optimalno opazovanje mikroorganizmov je treba doseči ravnovesje med kontrastom in ločljivostjo. Podrobnosti celic ni mogoče opaziti pri mikroskopu, tudi z visoko ločljivostjo; Potrebna je uporaba barvil s tehnikami obarvanja, ki prispevajo kontrast za opazovanje.

Značilnosti kakovostnega bakterijskega razmaza

Odličen kontrast

Za dosego odličnega kontrasta se imenujejo prefinjeni mikroskopi fazni kontrastni mikroskop, diferencialne motnje in mikroskop temnega polja. Ta vrsta mikroskopa se med drugim uporablja za opazovanje bakterijskih struktur, kot so stroki in nitke.

Obarvanje je preprosta tehnika za povečanje kontrasta, ki ga dosežemo z jasnim poljskim mikroskopom. V tej tehniki lahko uporabimo različna barvila, ki znatno izboljšajo opazovanje mikroskopa.

Obarvanje je narejeno neposredno na razmazih ali podaljških suspenzij mikroorganizma na diapozitivih, prej posušenih in pritrjenih.

Dobro popravljeno

Pritrditev je tehnika, ki se uporablja za ohranjanje celičnih struktur; povzroči inaktivacijo mikroorganizmov in oprijem v kozarec diapozitiva. Obstajajo različni pritrdilni obdelavi: pritrditev toplote in kemična fiksacija.

Vam lahko služi: palmitholeinska kislina: struktura, funkcije, kje je

Pritrditev toplote

To je najbolj uporabljena metoda pri opazovanju bakterijskega razmaza. Tehnika je sestavljena iz prehoda razmazane bakterijske suspenzije s plamenom lažjega. Ta tehnika je sposobna ohraniti zunanjo morfologijo bakterij, vendar uničuje njene notranje strukture.

Kemična fiksacija

Kemična fiksacija med drugim uporablja kemične snovi v konzerviranju, kot so formaldehid ali formalin, etanol in ocetna kislina. Prednost uporabe pritrditve kemičnih zdravil je, da se doseže ohranitev notranjih celičnih struktur mikroorganizmov.

Krvni razmaz. Vir: Bobjgalindo [gfdl (http: // www.GNU.Org/copyleft/fdl.html) ali cc by-sa 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licence/by-sa/4.0)], iz Wikimedia Commons

Dobro obarvanje

Najpogostejši postopki za izvedbo obarvanja prej sušenja in fiksnega razmaza so pozitivno ali preprosto obarvanje, diferencialno obarvanje in negativno obarvanje. Obstajajo tudi posebne tehnike za obarvanje določenih celičnih struktur (kapsula, spore, flagela).

Pozitivno obarvanje ali preprosto obarvanje

Pozitivno ali preprosto obarvanje je najbolj uporabljena tehnika obarvanja z razmazom. Uporabite barvila, ki se lahko pridružijo določenim mikrobnim strukturam, kar jim omogoča, da jih opazujejo pri mikroskopu.

Ta barvila imajo v svoji kemijski strukturi kromoforozne skupine (barvni del), z nadomestnimi dvojnimi vezmi in preprostimi vezmi (konjugacija). Te povezave lahko v zameno vzpostavijo ionske ali kovalentne vezi z nekaterimi celičnimi strukturami.

Barvila, ki se uporabljajo v pozitivnem ali preprostem obarvanju, so večinoma kemični derivati anilin (obarvane organske soli).

Po drugi strani pa lahko med barvili najdemo nekatere z osnovnim pH in drugimi s kislinskim pH.

Osnovna barvila

V osnovnih barvilih ima skupina Chromophore pozitiven električni naboj. Velika večina prokariontskih mikroorganizmov ima notranji nevtralni pH, njihova celična površina. Skozi to elektrostatično interakcijo se Chromophore veže na celico in barvilo.

Primeri osnovnih barvil so metilen modro, vijolično steklo, malahit zelena, osnovna varovalka, safranin.

Kisle barvila

V kislih barvilih ima skupina kromofore negativen električni naboj. Te se uporabljajo za obarvanje beljakovin s pozitivnimi skupinami naboja. Primeri kislinskih barvil so kisla varovalka, bengalska vrtnica, kongo rdeča in eosin.

Lahko vam služi: Propage: Kaj je, vrste in njihove značilnosti

Diferencialno obarvanje

Diferencialna tehnika obarvanja je uporaba dveh barvil različnih barv ali intenzivnosti, da bi razlikovali mikroskopski mikroskop. Gramova obarvanje in obarvanje z kislinsko in alkoholom je najbolj uporabljeno diferencialno obarvanje v bakteriologiji.

Gramovo obarvanje se uporablja kot predhodni test za poznavanje oblike, velikosti, celične skupine, poleg vrste celične stene. S testom obarvanja z gramom se bakterije celične stene razvrstijo kot gram pozitivne bakterije in gram negativne bakterije.

Negativno obarvanje

V tej tehniki se uporabljajo kemična barvila, ki ne prodrejo v celično notranjost, ampak naredijo medij, v katerem so mikroorganizmi videti kot črno ozadje.

V negativni tehniki obarvanja je razmaz pripravljen s kapljico kitajske ali nigrozinske suspenzije, ki po tem, ko omogočite sušenje pri sobni temperaturi, tvori neprozoren film do prehoda svetlobe. Na ta način se mikroorganizmi opazujejo kot svetle oblike na temnem ozadju.

Priprava

Do. Razmaza

1.- Slide zelo dobro operete, posušite z vpojnim papirjem in jih označite. Oznaka mora navesti vsebino priprav, datuma in imena tistih, ki so jo obdelali.

2.- Prižgite lažji in sterilizirajte ročaj inokulacije v plamenu do rdeče žive.

3.- Naj ročaj.

4.- Vzemite bakterijsko cev, odstranite pokrov in hitro prestavite usta cevi blizu svetlejšega plamena (plamen).

5.- Vnesite ročaj inokulacije v cev, ki vsebuje bakterijsko kulturo, in vzemite vzorec.

6.- Če je pridelek v tekočini, postavite vzorec, vzet z ročajem na sredini diapozitiva in ga previdno iztegnite v krog premera približno 2 cm.

7.- Sterilizirajte ročaj inokulacije.

8.- Pustite sušenje razmaza v zraku.

9.- Ponovite korake od 3 do 8 trikrat.

10.- Če je pridelek v trdni snovi, je treba na diapozitiv predhodno namestiti kapljica destilirane vode. To se naredi za mešanje majhnega vzorca pridelka, vzetega z ročajem inokulacije, v skladu z navedbami korakov 2 do 5 (pogoji asepse).

Lahko vam služi: razvojna biologija: zgodovina, kakšne študije, aplikacije

enajst.- Razširite vzorec, razredčen z kapljico vode na diapozitivu in trikrat ponovite.

B. Fiksacija

1.- Dodajte učiteljem suhega razmaza v tekočem mediju -dve kapljici metanola ali absolutnega etanola.

2.- Pustite, da se zrak posuši od vžigalnika.

3.- Če razmaz izhaja iz trdne kulture, je pritrjena suhega vonja narejena s toploto in ga prehodi 2 do 3 -krat hitro.

4.- Dotaknite se dna razmaza z hrbtnim delom leve roke (za desne, sicer uporabite desno) in preverite, ali je hladno.

C. Preprosto obarvanje

1.- Dodajte kapljice za razmazovanje izbranega barvila in pustite, da delujejo za čas, ki ga zahtevajo v določenih protokolih vsakega barvila (običajno med 1 in 5 minutami).

2.- Nekatera barvila zahtevajo uporabo toplote za aktivacijo, v tem primeru morate biti zelo previdni pri segrevanju prtljage v plamenu vžigalnika (manipulirajte s pinceto in se izogibajte vreli). Pregrevanje razmaza lahko uniči želene celice.

3.- Odstranite odvečno pranje z destilirano vodo s slike. Odpravite pranje vode in nežno udarite po toboganu za svojo pesem, nagnjeno na delovno mizo.

4.- Pustite sušenje zraka.

5.- Glede na vrsto opazovanja se na tej stopnji uporablja pokrov ali ne. Pokrivanje in ohranja razmaz. Če na tej stopnji izvedemo opazovanje potapljanja nafte, razmaza ni uporabljena, razmaza pa ni mogoče ohraniti.

D. Dokončno ohranjanje razmaza

1.- Razmaz zaporedoma potopite v vsako od spodaj navedenih rešitev, najmanj 5 minut. Namen teh "kopalnic" je pustiti razmaz popolnoma dehidriran. Vsak reagent je treba dobro izsušiti, preden vstopite v razmaz v naslednji kopalnici.

Vrstni red dehidrirajočih kopeli je naslednji:

1. 70 % etanol
2. 95 % etanol
3. Čisti aceton
4. Acetonska zmes -xilol 1: 1
5. Xilol

Nato pustite sušenje zraka.

2.- Namestite pokrove, po možnosti 22 × 22 mm z uporabo kanadskega balzama ali drugih sredstev za montažo.

Reference

1. Cappucino, j.G. in Welch, c.T. (2017). Mikrobiologija: ročni laboratorij. Pearson.
2. Holt, j.G. Urednik. (1977). Priročnik krajšega Bergeyja za določljivo bakteriologijo. 8^th Baltimore: The Williams in Wilkins Co.