Krvni agar

Krvni pristop. Z licenco

Kaj je krvni agar?

On Krvni agar Gre za obogateno trdno kulturno medij, ki se uporablja za okrevanje in rast najrazličnejših mikroorganizmov iz kliničnih ali subjektivnih vzorcev.

Ta kulturni medij je v bistvu sestavljen iz obogatenega osnovnega agarja in 5% ovčje krvi. Baza agarja se lahko razlikuje glede na potrebe, v glavnem pa bodo sestavljeni iz peptonanov, aminokislin, vitaminov, ekstrakta mesa, natrijevega klorida, agarja. Kar se tiče krvi, se včasih uporablja človeška kri.

Zbiranje krvi je mogoče pripraviti v laboratoriju ali ga je že mogoče kupiti od podjetij, ki so ji namenjene. Priprava tega medija je zelo občutljiva, vsaka neprevidnost v njegovi izdelavi bo povzročila kontaminirano parcelo.

Zato je treba sprejeti vse možne varnostne ukrepe in na koncu izvesti kontrolo kakovosti, ki inkubira 37 ° C 1 plošče na 100, ki so pripravljeni.

Osnova

Staphylococcus aureus, gojen v krvnem agarju. Vir: Nathan Reading on Flickr Nathan R. Na Twitterju Wikimedia Commons

Krvni agar je obogaten, diferencialen in neselektiven medij. 

• Je obogaten medij, ker nosi kot glavni aditiv 5-10% kri na agar bazi. Obe spojini vsebujeta veliko hranil, ki omogočajo, da se v njem raste večina obdelovalnih bakterij.
• Ta rast se pojavi brez omejitev, zato je neselektivna. Če pa se dodajo spojine, ki preprečujejo rast nekaterih mikroorganizmov in naklonjeni rasti drugih, postane selektivna. Na primer, če se dodajo nekatere vrste antibiotikov ali protiglivičnih.
• Je različna, saj omogoča razlikovanje 3 vrste bakterij: beta-hemolitično, alfa-hemolitično in gama-hemolitično.
• Beta-hemolitični so tisti, ki imajo možnost lisarja ali dokončanja. Primeri ß-hemolitičnih bakterij so Streptococcus pyogenes in Streptococcus agalactiae.
• Alfa-hemolitiki so tisti, ki izvajajo delno hemolizo, kjer se hemoglobin oksidira v methemoglobin, ki ustvari zelenkasto obarvanost okoli kolonij. Ta pojav je znan kot hemoliza α ali α-hemolize, bakterije pa so razvrščene kot α-hemolitike. Primer α-hemolitičnih bakterij so Streptococcus pneumoniae in Streptococcus skupine Viridans.
• Gama-hemolitične ali nehemolitične bakterije rastejo nad agarjem, ne da bi ustvarile spremembe, učinek, znan kot γ-hemoliza, mikroorganizem. Primer γ-hemolitičnih bakterij: nekateri sevi Streptococcus skupine D (Streptococcus bovis in enterococcus faecalis).

Prijave

• Ta kulturni medij je eden najpogostejših v laboratoriju za mikrobiologijo. Med mikroorganizmi, ki lahko rastejo v tem mediju.
• Nekatere zahtevne ali nadležne bakterije rastejo tudi s prehranskega vidika, pa tudi glive in kvasovke. Uporabna je za subjektivne ali reaktivalne seve, ki so presnovno zelo šibki.

Vam lahko služi: ciklopentanoperhidropenantreno: struktura in pomen

Vendar se bo izbira krvne in bazne agencije razlikovala glede na mikroorganizem, ki se bo verjetno okrevala, in uporabe, ki jo bo dana plošča (gojenje ali antibiogram).

Izbira krvne skupine

Kri je lahko iz jagnjetine, zajca, konja ali človeka.

Najbolj priporočljiva je jagnjetina kri, razen nekaterih izjem. Na primer izolirati vrste Hemophilus, kjer je priporočena kri konj ali zajec, saj ima jagnjetina kri encime, ki zavirajo faktor V.

Najmanj priporočljiv je človek, čeprav je najbolj uporabljen, morda zato, ker ga je najlažje pridobiti. 

Kri mora biti defibriniran, pridobiva brez aditiva in zdravih živali. Za uporabo človeške krvi je treba upoštevati več dejavnikov:

• Če kri prihaja od posameznikov, ki so utrpeli bakterijske okužbe, bodo imeli posebna protitelesa. V teh pogojih je verjetno, da bo rast nekaterih bakterij zavirala.
• Če je pridobljen od Bank Blood, vsebuje citrat in možno je, da se nekatere bakterije v njegovi prisotnosti ne razvijejo.
• Če kri prihaja od bolnikov, ki jemljejo antibiotike, lahko rast dovzetnih bakterij zaviramo.
• In če je kri od diabetične osebe, odvečna glukoza posega v pravilno razvijanje vzorcev hemolize.

Izbira osnovne hitrosti

Osnovni agar, ki se uporablja za pripravo krvnega agarja, je lahko zelo širok. Med njimi so: hranilni agar, cerebro infuzija srca, triptični soja, Müeller Hinton, Thayer Martin, Columbia Agar, Brucella Agar, Campylobacter Agar itd.

Uporaba krvnega agarja v skladu z osnovnim medijem, ki se uporablja za pripravo

Hranilni agar

Ta baza je najmanj uporabljena, saj bodo zrasla predvsem neplačane bakterije, kot je enterični bacili, Pseudomonas sp, S. Aureus, Bacillus sp, med ostalimi. Ni priporočljivo izolirati Streptococcus.

Cerebro srčna infuzija (BHI)

Je ena najbolj uporabljenih kot baza, saj ima potrebna hranila za rast večine bakterij, vključno z Streptococcus sp in druge zahtevne bakterije. Čeprav ni primerno opazovati vzorcev hemolize.

S to bazo se uporablja kri jagnjetine.

Prav tako lahko pripravite krvne različice, kjer se dodajo druge spojine, da izolirajo nekatere mikroorganizme. Na primer, infuzijsko cerebro srce, dopolnjeno z zajčjo krvjo, cistinom in glukozo, služi za izolacijo Francisella tularensis.

Medtem ko je s Cistina Telurito koristno izolirati Corynebacterium diphteriae. Uporablja se lahko človeška ali jagnjeta kri.

Vam lahko služi: biotski potencial

S prvim bo beta trimoliza videti kot ozek halo, medtem ko bo z drugim halo veliko širši.

Ta baza se skupaj z bacitracinom, koruznim škrobom, konjskimi kri in drugimi obogatitvenimi dodatki (Isovalex) uporablja za izolacijo spola Haemophilus sp Iz dihalnih vzorcev.

Če je dodana kombinacija kloramfenikol-gentamicina ali penicilina-stuffyin antibiotike s konjsko krvjo, služi izolaciji zahtevnih patogenih gliv, tudi z večjo zmogljivostjo glukoznim agarjem Sabouraud. Še posebej je uporaben pri izolaciji Histoplasma capsulatum.

Triptyse Soy Agar

Ta osnova je najbolj priporočljiva za boljše opazovanje vzorca hemolize in realizacije diagnostičnih testov, kot so davki na opto -korner in bacitracin. To je klasični krvni agar, ki ga uporablja rutina.

S to bazo lahko pripravite tudi poseben krvni agar Corynebacterium diphteriae, S Telurito Cistina in Jagnjetina kri.

Kombinacija te agarjeve krvi, več kanamicina-vankomicina, je idealna za anaerobno rast, zlasti Bacterroides sp.

Müeller Hinton Agar

Ta krvno dopolnjena baza se uporablja za izvajanje antibiograma zahtevnih mikroorganizmov, kot so Streptococcus sp. Uporabna je tudi za izoliranje bakterij, kot so Legionel pneumophila.

Thayer Martin Agar

Ta medij je idealen kot baza krvnega agarja, ko sum na rod Neisseria, zlasti Neisseria meningitidis, glede na to N. Gonorrhoeae Ne raste v krvnem agarju. Služi tudi za izvajanje testov dovzetnosti za Neisseria meningitidis.

Columbia agar

Ta osnova je odlična za setev vzorcev želodčnih biopsij pri iskanju Helicobacter pylori.

Medij pripravlja 7% defibrinirane jagnjetine krvi z antibiotiki (vankomicin, trimetoprim, amfotericin B in cefsulodin), da omeji rast drugih vrst bakterij, ki so lahko prisotne.

Ta ista baza, dopolnjena s človeško ali jagnjetino krvjo, je nalidíxico in kolistinsko kislino koristna za izolacijo Gardnerella vaginalis. Idealno je tudi za oceno protimikrobne dovzetnosti za antibiotike istega mikroorganizma.

Poleg tega služi za pripravo krvnega agarja za anaerobno gojenje, dodaja aminoglikozide in vankomicin. Ta baza nam omogoča pravilno opazovanje vzorcev hemolize.

Brucella agar

Ta medij, ki se uporablja kot baza krvne agencije, skupaj z dodatkom vitamina K, je idealen za gojenje anaerobnih bakterij. V tem primeru je priporočljiva uporaba jagnjetine.

Vam lahko služi: kožna dihanje: značilnosti in primeri živali

Campylobacter agar

Agar Campylobacter, dopolnjen s 5% RAM -krvi in ​​5 antibiotiki (cefalotin, amfotericin B, Trimetoprim Campylobacter Jejuni V vzorcih iztrebkov.

Priprava

Vsaka komercialna hiša na povratno embalažo prinese indikacije za pripravo litra kulturnega medija. Ustrezne izračune lahko izvedete za pripravo želene količine v skladu z izbranim baznim agarjem.

Tehta in se raztopi

Osnovni agar je dehidriran (v prahu), zato ga je treba raztopiti v destilirani vodi, prilagojeni pH 7,3.

Količina, ki jo označuje izbrani osnovni agar, se tehta in raztopi v ustrezni količini vode v fixoli, nato pa se segreva na zmerni vročini in se meša z vrtljivimi gibi do celotnega prahu.

Sterilizirajte

Ko se raztopimo, sterilizirajte v avtoklaviju pri 121 ° C 20 minut.

Krvni agregat

Ko zapustite avtoklav, se fixola ohladi, dokler temperatura ne bo med 40 in 50 ° C. To je temperatura, ki podpira človeško kožo, hkrati pa se agar še ni utrdil.

Če želite to narediti, se fixola dotakne z roko in če je toplota dopustna, je idealna temperatura, da dodate ustrezno defibrinirano kri (50 ml na liter agarja). Mešamo, da homogeniziramo.

Prehod agregata krvi je ključnega.

Če se doda prehladno, se oblikujejo grudice in površina medija ne bo gladka, da bi lahko pravilno naredila striatum.

Vlijemo v Petrijeve krožnike

Postrezite v sterilnih petrijskih ploščah takoj po homogenizaciji krvi. V vsaki plošči Petri vlijemo približno 20 ml. Ta postopek se izvaja v laminarnem pretočnem zvoncu ali v bližini vžigalnika.

V času serviranja krvi na Petrijevih ploščah zračnih mehurčkov ne bi smeli pustiti na površini plaka. Če se to zgodi, se na plošči hitro prenese plamen bunsenovega vžigalnika.

Plošče se lahko strdijo in so shranjene v hladilniku (2-8 ° C) obrnjene do uporabe. Pred uporabo krvnih agar plošč se morajo ublažiti, da bodo lahko posejali.

Pripravljene plošče imajo približno 1 teden.

Reference

1. Bayona, m. Mikrobiološki pogoji za gojenje Helicobacter pylori. Rev. Zelje. Gastroenterol. 
2. Forbes, B ,, Sahm, D., Weissfeld, a. Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. Pan -ameriški uredništvo s.Do.