Čokoladni agar

Yersinia pestis bakterije na čokoladni agar plaketi. Vir: Ministrstvo za zdravje in človeške storitve, Wikimedia Commons

Kaj je čokoladni agar?

On Čokoladni agar Je sredstvo trdne, obogatene, neselektivne in ne -diferencialne kulture. Uporablja se predvsem za izolacijo zahtevnih mikroorganizmov s prehranskega vidika, čeprav v njem lahko raste katera koli vrsta bakterij.

Zato se njegova uporabnost poveča, zlasti pri vzorčenju vzorcev, ki so običajno sterilni, na primer CSF in skupna tekočina. Čeprav je vključen tudi v medije, izbrane za sajenje polimikrobnih vzorcev, vendar je v teh primerih treba dodati antibiotike, ki zavirajo sočasno floro.

Ta medij ima značilno rjavo barvo, zelo podobno čokoladi, od tod tudi ime. Priprava je zelo podobna pripravi krvnega agarja, le v tem primeru je treba kri segreti tako, da se rdeče krvne celice zlomijo.

Njegova priprava, kot krvni agar, je zelo občutljiva, saj je zlahka onesnažena. Zato mnogi laboratoriji raje pridobijo ta medij, ki so ga že pripravile poslovne hiše, ki zagotavljajo njihovo kakovost.

Osnova

Sestavljen je iz agar baze in ogrevane krvi. Hemoliza rdečih krvnih celic zagotavlja srednji faktor X (hemina) in faktor V (NAD), ki je potreben za rast nekaterih mikroorganizmov, kot je spol Hemophilus. Zelo koristno je tudi za izolacijo Neisserias sp.

Tako kot krvni agar se tudi različni mediji lahko uporabljajo kot osnovna agencija, odvisno od potrebe. Med uporabljenimi mediji so infuzijska cerebro srce in drobljenje soje, čeprav so najbolj priporočljivi Columbia Agar, Müeller Hinton, GC Agar in Thayer Martin Agar.

Vam lahko služi: preprosta difuzija: postopek in primeri

Nekatere različice čokoladnega agarja vključujejo obogateno dopolnilo, komercialno dostopno, imenovano Isovalex ali Polyvitex.

Ti dodatki vsebujejo vitamin B₁₂, L-glutamin, adenin, gvanin hidroklorid, p-aminobenzojska kislina, nikotinamid adenin dinukleotid (NAD), tiamin pirofosfat, železov nitrat, tiamin hidroklorid, cistein hidroklorid in glukosen in glukosen in glukose in glukose in glukose in glukosen in glukose in glukose in glukose in glukose in glukose in glukose in glukose in glukose in glukose in glukose in glukose in glukose in glukose in glukose in glukose in glukose in glukose in glukose in glukosen in glukosen in glucose.

Pomembno je poudariti, da je čokoladni agar bolj obogaten kot krvni agar, vendar ne dovoljuje vzorcev hemolize.

Prijave

• Čokoladni agar s Columbia Agar: Vsebuje kazein trebušne slinavke in srce, prebavljeno mesno peptik, natrijev klorid, agar, ekstrakt kvasa in koruzni škrob. Poleg tega je bogat z vitamini, minerali in esencialnimi aminokislinami. Ta osnova z ogrevano krvjo je idealna za izolacijo bakterij žanra Neisseria. Po drugi strani pa, če je dodano dodatno dopolnilo Brucella, Zgoraj omenjeni mikroorganizem je mogoče izolirati. Rezultati se izboljšajo z uporabo konjske krvi.
• Čokoladni agar z osnovnim agarjem GC (za Gonococci): Vsebuje peptone, koruzni škrob, monobazični in dibasični puferji, natrijev klorid in agar. Večina komercialno pripravljenih predstavitev čokolade ima to osnovo in ne vsebuje ogrevane krvi, temveč sintetična mešanica hemine in kemijsko dopolnilo rastnih faktorjev, vitaminov, mineralov, aminokislin, faktorja V in glukoze.
• Čokoladni agar, pripravljen z Müeller Hinton Agar: Uporablja se za izvajanje testa protimikrobne občutljivosti zahtevnih mikroorganizmov, kot so Streptococcus pneumoniae, Uporaba 5% ogrevane krvi. Služi tudi za primarno izolacijo Neisseries in Hemophilus, Toda v posebnem primeru izolacije Hemophilus Zaželena je uporaba konjske krvi, saj je bogata v faktorju X in V. Po drugi strani pa, če vzorec, ki ga je treba posaditi, izvira iz nesterilnega območja, priporočamo dodajanje antibiotikov za zaviranje običajne flore območja. Primer: za vzorce dihal, kjer obstaja sum na prisotnost spolnih bakterij Hemophilus Bacitracin se uporablja za zaviranje rasti Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus in Neisseries saprofiti. 
• Čokoladni agar s Thayerjem Martinom Agarjem: Posebno je za izolacijo Neisseria Gonorrhoeae. Vsebovati mora antibiotike, da zavira spremljajočo floro. Jagnjeta kri se uporablja.

Lahko vam služi: flora in favna zacatecas: več reprezentativnih vrst

Priprava

Navedene indikacije za pripravo osnovnega agarja, ki bo uporabljen, je treba videti. Na splošno opisujejo, koliko bi morali tehtati za pripravo litra kulturnega medija. V laboratoriju lahko pripravite potreben natančen znesek, ki je lahko več ali manj kot liter.

Izračuni

Navedeno je pravilo treh, da se izračuna, koliko morate tehtati za pripravo želenega obsega. Primer:

Če je za 1 liter potrebno tehtati 40 gr in laboratorij zahteva 800 ml, je rečeno:

1000 ml -40 gr

800 ml - x

Formula bo naslednja:

X = 32 gr (količina kljub 800 ml).

Tehta in se raztopi

Potrebna količina je tehtana in nameščena v Felolo z vodo.

Segreva na zmerni vročini in se nežno meša z vrtljivimi gibi, dokler se dehidrirani medij popolnoma ne raztopi, in pusti, da zavre 1 minuto.

Sterilizirajte

Fixola se vnese v avtoklav za sterilizacijo medija pri 121 ° C 20 minut.

Krvni agregat

Ko zapustite avtoklav, je dovoljeno stati, dokler temperatura medija ni približno med 56 in 70 ° C, da se postavi kri in meša, dokler medij ne postane rjava barva.

Če bodo dodani dodatki, je to čas za to. Kasneje zmešajte in postrezite 20 ml na vsako sterilno petrijsko ploščo.

Celoten postopek je treba izvesti v laminarnem pretočnem zvoncu ali okoli lažiča Bunsena. Naj stojijo, dokler se v hladilniku ne bodo strnili in na obrnjen.

Drug način za pripravo čokoladnega agarja brez uporabe krvi

Osnovni medij je pripravljen, kot je opisano zgoraj, dehidrirani hemoglobin, ki je bil komercialno dobil in steriliziran v avtoklavu, raztopimo v avtoklavu.

Vam lahko služi: hemoolinfa

Obe rešitvi se lahko ohladita pri 50 ° C, dodatek se pridruži in doda. Zmešajte aseptične razmere in nato postrezite v sterilnih ploščah Petri.

QA

Pomembno je, da je kri nameščena pri navedeni temperaturi, saj je idealna za lisar rdeče krvne celice in hkrati vzdrževanje faktorja V, ki je toploten.

Ne smejo biti mehurčki na površini agarja. Vsake serije 100 plošč je treba 24 ur inkubirati v štedilniku pri 37 ° C, da preverite njegovo sterilnost.

Za boljše rezultate je treba čokoladni agar uporabiti kmalu po pripravi.

V laboratoriju je treba opraviti nadzor bakterijskih seva.

Reference

1. Garcia, str., Stene, f., Fernández del Barrio, m. Praktična klinična mikrobiologija. Univerza Cadiz. Služba za publikacije UCA.
2. Čokoladni agar. Pridobljeno iz.Wikipedija.org.