Agar m.R.Kaj je, temelj, priprava, uporablja

On Agar m.R.S. Je selektivni medij za trdno kulturo, ki se uporablja za izolacijo in štetje mlečnokislih bakterij, zlasti rodu Lactobacillus. Ta agar so leta 1960 ustvarili Man, Rogosa in Sharpe, ki nosijo istoimensko medij, vendar se zaradi svoje zapletenosti pogosto uporablja kratica m.R.S.

Sestavljen je iz peptonskega beljakovin, ekstrakta mesa, ekstrakta kvasa, glukoze, sorbitanskega monoleato, dipbotassijevega fosfata, natrijevega acetata, amonijevega citrata, magnezijevega sulfata, mangana sulfata in agarja.

Han in Sharpe Man Agar (m.R.S.) posejan z laktobacillus sp. Vir: Doniran fotografija za ta članek avtorjev: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Fotografija, posneta med preiskavo z naslovom: Vrednotenje mlečnokislih bakterij in bifidobakterij s probiotičnim potencialom v materinem mleku in dojenčku.

Ta sestava omogoča dober razvoj mlečnokislih bakterij iz kliničnih vzorcev, kot so iztrebki, vaginalni izločanje, peroralni vzorci in materino mleko, pa tudi mlečna in mesna hrana.

V kliničnih laboratorijih se ne uporablja rutinsko, ker se mlečnokislinske bakterije redko vključijo v patološke procese. Vendar je na območju mikrobiologije prehrana uporaba agarja m pogostejša.R.S.

Po drugi strani ta medij uporabljajo nekateri raziskovalni centri, katerih cilj je preučevanje mlečnokislih bakterij.

Osnova

Človek, Rogosa in Sharpe ima dokaj zapleteno sestavo. Z raztrganjem funkcije, ki jo izpolnjuje vsaka njena komponenta, lahko razložite njeno temelj.

Peptonski protein, ekstrakt mesa, ekstrakt kvasovk in glukoza so hranila, ki zagotavljajo vir ogljika, dušika, vitaminov in mineralov, potrebnih za rast bakterij. Poleg tega je glukoza univerzalni vir energije, ki se uporablja v večini gojenih medijev.

Po drugi strani pa je v presnovi laktobacilla in sorodnih bakterij potrebna za dajanje rasti mlečnokislinskih bakterij, je potrebna prisotnost nepogrešljivih kofaktorjev (kationov); Te spojine so natrij, magnezij in manganove soli.

Lahko vam služi: Opssonizacija: kaj je, vrste, funkcije, molekule

Prav tako so sorbitanski ali polisorbat monoleoat 80 pomemben vir maščobnih kislin, če jih absorbiramo kot hranila.

Poleg tega sorbitanski monoleoat in amonijev citrat, ki zavirajo razvoj spremljajoče flore, zlasti gram negativne bakterije, ki zagotavlja selektivni značaj tega agarja.

Končno je agar -gar tisti, ki zagotavlja trdno doslednost okolju.

Obstajajo tudi druge različice agarja Rogosa Sharpe; Eden od njih je dopolnjen s cisteinom (m.R.S.c), zelo koristno za izolacijo bifidobakterij, med drugimi mikroorganizmi. Po drugi strani je tu dopolnjena MRS z neomicinom, paromomicinom, ritno kislino in litijevim kloridom, posebnim za selektivno število bifidobakterij v mlečnih izdelkih.

Priprava

Tehtamo 68,25 gramov dehidriranega medija in se raztopimo v litru destilirane vode. Pustite stati 5 minut. Raztopiti v celoti privede do pogosto mahanja vira toplote in vreti 1 do 2 minuti. Sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut.

Ko zapustite avtoklav, pustite stati nekaj minut in distribuirajte še vedno vroče na sterilnih ploščah Petri.

Naj se strdi in vložite plošče, naročite v trombocite in shranite v hladilnik do uporabe. Plošča naj vzamejo sobno temperaturo, preden jih uporabijo.

Srednji pH mora biti 6,4 ± 0,2. Nekatere poslovne hiše priporočajo pH med 5,5 in 5,9.

Dehidrirani medij je bež in pripravljen je temna jantarna.

Tako dehidrirani medij in pripravljene plošče je treba shraniti od 2 do 8 ° C.

Prijave

Plošče agar m.R.S. Sejajo jih lahko na površini (izčrpanost ali z lopatico Drigalski). Lahko ga posejemo tudi po globini. Plošče je treba inkubirati pri 37 ° C v mikroaerofiliji (4% ali₂ in 5-10% co₂) 24 do 72 ur.

Vam lahko služi: amenzalizem: značilnosti, primeri, razlike z dinirizmom

Metoda posejanja je izbrana v skladu z namenom (izolacija ali štetje).

Značilnosti kolonij

Domnevne kolonije laktobacila rastejo iz belkaste barve in imajo v tem agarju mukoidni ali kremast videz. Kasneje se morajo identificirati.

Izolacija mlečnokislih bakterij

Za to se uporablja posejana površina. Vzorci, ki jih je treba tožiti, zahtevajo prejšnji postopek. 

V primeru vzorcev materinega mleka je priporočljivo centrifugiranje 1 ml vzorca pri 14.000 RMP 10 minut, da odstranite maščobno plast. 900 µL se zavržejo, v preostalih 100 µL pa se usedlina suspendira in površina agarja m.R.S. Potem se morate enakomerno razdeliti z lopatico Drigalski.

V primeru vzorcev blata se tehta en (1) gram blata in 9 ml sterilne peptonene vode 0,1%homogenizira, kar ustreza razredčitvi 1/10. Nato se izvedejo serijska redčenja, do končnega redčenja 10^-4.

Končno jemljemo 100 μl redčenja 10^-2, 10^-3 in 10^-4 In vsako redčenje je posejano na gospe agar, ki se enakomerno distribuira z lopatico Drigalski.

Število laktično kislih bakterij

V tem primeru posejano sejamo po globini.

Za vzorce materinega mleka se odvzame 1 ml in postavi v sterilno stožčasto plastično cev. Agar MRS dodamo pri približni temperaturi 40 ° C do končne prostornine 25 ml, pri čemer dobimo homogeno mešanico. Kasneje ga vlijemo v sterilni petri.

Za vzorce blata se opravijo redčenja, kot je opisano zgoraj. 1 ml vsakega redčenja se vzame in plastične cevi sterilne. Masted agar MRS je dodan v prostornino 25 ml.

Vam lahko služi: vodni biomi: značilnosti, vrste, flora, favna, primeri

Zmes vsakega redčenja se enakomerno vliva v sterilne plošče Petri. Končno pustite, da stojite do vaše polimerizacije.

Kolonije računajo na človeka in ostre agar (m.R.S.). Vir: podarjena fotografija za ta članek. Avtorji: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Fotografija, posneta med preiskavo z naslovom: Vrednotenje mlečnokislih bakterij in bifidobakterij s probiotičnim potencialom v materinem mleku in dojenčku.

Na ravni raziskave

Vsak dan postane bolj zanimiva študija mlečnokislih bakterij; Še posebej raziskovalci si med drugim prizadevajo poznati nove seve in njihov potencial kot pobuda za standardizacijo pri proizvodnji mlečnih izdelkov.

V tem smislu Alvarado in sod. (2007) uporabljen agar m.R.S. Za izvedbo študije, v kateri so izolirali, identificirali in značilne mlečne kisline, ki so prisotne v ahumado andskem obrtnem siru.

V siru so našli prisotnost bakterij žanrov Lactococcus in Lactobacillus, in ugotovili, da so mešanice izoliranih sevov primerne kot sprožitve sevov pri proizvodnji sirov iz pasteriziranega mleka.

Po drugi strani pa Sánchez y Cols. (2017) uporabljen agar m.R.S. Za raziskovanje prisotnosti mlečnokislih bakterij v prebavnem traktu pujsa, da bi jih uporabili kot domače probiotike, ki povečujejo produktivnost zdravih prašičev.

S tem medijem jim je uspelo izolirati štiri vrste: Lactobacillus Johnsonii, Lactobacillus Brevis, Enterococcus Hirae in Pediococcus pentosaceus.

Prav tako Báez in sod. (2019) uporabljen staranje m.R.S. Za oceno mlečne kisline (BAL) in bifidobakterij s probiotičnim potencialom v materinem mleku in dojenčku.

Uspeli so izolirati 11 bal in 3 Bifidobacteria sp V materinem mleku in 8 bal in 2 Bifidobacteria sp. V blatu. Vsi so izpolnili določene parametre, ki jih akredirajo kot bakterije s probiotično aktivnostjo.

Avtorji so zaključili, da tako materino mleko kot iztrebki dojenčkov, ki dojijo, izključno služijo kot naravni viri probiotičnih bakterij.

QA

Oceniti kakovost agarja m.R.S. Kontrole, kot so:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli in Bacillus cereus.

Pričakovani rezultati so zadovoljiva rast za prvih 6 bakterij, medtem ko In. coli in Bacillus cereus je treba zavirati v celoti.

Reference

1. Britanski laboratorij. M.R.S agar. Na voljo na: Britanaalab.com