Agar lia (Iron Lysina) Kaj je, fundacija, priprava, uporablja

On Agar lia (Iron Lysina) Je biokemijski test, ki se uporablja za identifikacijo bakterij družine Enterobacteriaceae. Ta medij sta ustvarila Edwards in Fife, ki temelji na formuli Falkow.

Prvotno je bil ta test juha, ki vsebuje peptone, ekstrakt kvasa, glukozo, L-lizin, bromokresh in destilirano vodo vijolično. Edwards in Fife sta dodala agar-adagar, železni citratus amonija in natrijevega tiosulfata.

Pozitiven in negativen test dekarboksilacije lizina. Vir: Foto in shema v lasti avtorja MSC. Marielsa Gil

Test je v bistvu sestavljen iz prikazovanja prisotnosti encima rudboksilaze, ki lahko reagira s karboksilno skupino aminokisline L-lizin. Zaradi prisotnosti encima lizina srca se lahko pojavi tudi deaminacija aminokisline.

Poleg tega sestava medija omogoča prikaz sposobnosti nekaterih bakterijskih rodov, da proizvaja vodikov sulfid. Končno je mogoče tudi opazovati generacijo ali ne plina na sredini.

Osnova

Izvleček peptona in kvasa

Kot večina pridelkov medijev lizin železni agar vsebuje sestavne dele, ki zagotavljajo potreben vir hranil za rast bakterij. Te komponente predstavljajo peptone in ekstrakt kvasovk.

Glukoza

Prav tako ta agar vsebuje kot fermentirano glukozo ogljikovih hidratov. Znano je, da vse bakterije družine Enterobacteriaceae fermentirajo glukozo.

Ta korak je ključnega.

V nekaterih bakterijskih žanrih lahko opazimo proizvodnjo plina zaradi fermentacije glukoze.

Plin je dokazan, ko premik agar OCC.

Vam lahko služi: biomateriali

L-lisina

Ko je lizin dekarboksiliran, se tvori diamin (kadaverin) in ogljikov anhidrid.

Razkritje se pojavi v prisotnosti koencima piridoksalnega fosfata. Ta reakcija je nepopravljiva.

PH indikator (bromocresol vijolična)

Vse spremembe pH so se na sredini zgodile z različnimi reakcijami, odkrijemo s pH indikatorjem bromocresola.

V tem smislu, ko pride do zakisanja, medij postane rumen, in ko pride do alkalizacije, se medij vrne v prvotno vijolično ali vijolično barvo.

Ko se lizinin srčni utrip pojavi zaradi prisotnosti encimskega lizina.

To je posledica dejstva, da se med postopkom razkrivanja tvori alfa-zo-karbonska kislina, ki reagira z amonijevim citratom v prisotnosti kisika, kar povzroča prej omenjeno barvo.

Železni citrat amonija in natrijevega tiosulfata

Po drugi strani bodo bakterije, ki proizvajajo vodikov sulfid₂S.

Bakterije, ki imajo zmanjšan encim tiosulfata₂S).

Slednji je brezbarven plin, toda pri reakciji z železno soljo oblikuje kovinski sulfid, ki je netopna spojina (vidna črna oborina).

Vendar pa vadbena sposobnost H₂S tega medija ni zelo zanesljiv, ker nekatere negativne bakterije dekarboksilaze, ki lahko proizvajajo H₂S ne bo tvoril črne oborine, ker se kislost medija moti. Zato je priporočljivo podkrepiti z drugimi sredstvi, ki vsebujejo železo.

Vam lahko služi: nevroni

Razlaga testa

Recboxilacija lizina

Cevi je treba brati po končanih 24 urah inkubacije, sicer obstaja tveganje za nerazumevanje reakcije in poročanje o lažnih negativnosti.

Ne pozabite, da bo prva reakcija, ki se bo pojavila, fermentacija glukoze, zato bodo vse cevi po 10 do 12 urah postale rumene.

Če je na koncu inkubacijskega časa (24 ur) rumeno ozadje z vijolično ali vijolično površino, je reakcija negativna. Vijolična barva površine ustreza alkalizaciji medija z uporabo peptonov.

Pozitivna reakcija je, da se dno in površina cevi popolnoma vijolična, to je, da se vrne v prvotno barvo.

Torej, ki določa pozitivnost testa, je osnova ali dno medija. Če dvomite o barvi, jo lahko primerjate z neinokulirano cevjo LIA.

Deaminacija lizina

Cev, ki prikazuje srčni utrip lizina, bo imela granatno rdečkasto površino in rumeno ozadje (kislina) ali celotno granatno rdečkasto cev.

Ta reakcija se razlaga kot negativna za dekarboksilacijo lizina, vendar pozitivna na lizino.

Ta reakcija je definirana in razlagana v poševnici.

Proizvodnja vodikovega sulfida (H₂S)

Pozitivno reakcijo opazimo z videzom črne oborine na sredini ali njenem delu. Na splošno med okončino okvirja in bazo.

Če se oborina pojavi po celotni cevi, ne bo videti drugih reakcij, ki se pojavijo na sredini.

Registracija rezultatov

Pri interpretaciji testa se rezultati zabeležijo na naslednji način:

Vam lahko služi: Miller in Urey Experiment

Najprej se prebere okvir, nato ozadje ali taco, nato proizvodnja h₂S, in končno proizvodnja plina.

Primer: K/A + (-). To pomeni:

• K: alkalni okvir (vijolična barva)
• O: Kislinsko ozadje (rumena), to je negativna dekarboksilacijska reakcija in negativni srčni utrip.
• +: Proizvodnja vodikovega sulfida
• (-): brez plina.

Priprava

Tehtajte 35 gr ležečega srednjega železa in se raztopi v litru destilirane vode.

Vroče, dokler ni popolnoma raztopil agarja, da zavre za minuto mahanja. Razdelite 4 ml medija v epruvetah 13/100 s pokrovom bombaža.

Sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut. Odstranite iz avtoklava in pustite, da se naklonijo, tako da je globoka podlaga in kratek krog.

Shranjujte v hladilniku 2-8 ° C. Naj pred sejanjem bakterijskega seva pusti.

Barva dehidriranega medija je bež in pripravljeni rdečkasto vijoličen medij.

Končni pH pripravljenega medija je 6,7 ± 0.2

Medij postane rumen s pH ali manjšim od 5,2 in je vijoličen pri pH 6,5 Up.

Prijave

Ta test se skupaj z drugimi biokemijskimi testi uporablja za identifikacijo bacilov družine Enterobacteriaceae.

Medij je posejan z ravno ali iglo, eno ali dve punkciji se naredimo na dnu cevi, nato pa je stala površina medija v cikcak.

Inkuba je 24 ur pri 35-37 ° C pri aerobiozi. Če je potrebno, ostane inkubiranje za 24 ur več.

Uporabna je predvsem za razlikovanje negativnih vrst Citrobacter od Salmonellas sp.

Reference

1. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testi za identifikacijo bakterij kliničnega pomena. 3. izd. Pan -ameriški uvodnik. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.