Emb

E LunGerangularni madež. Coli na emb agarju. Vir: Eunice Laurent, CC BY-SA 4.0, Wikimedia Commons

Kaj je agar Emb?

On Emb Gre za selektivni in diferencialni medij za trdno kulturo, ki se uporablja za izolacijo gram -negativnih bacilov, predvsem iz družine Enterobacteriacee in drugih ne -obveznih gram -negativnih bacilov. Znano je tudi z kratico EAM, kar pomeni eosina-azul metilena.

Ta medij sta ustvarila Holt-Harris in Teague leta 1916. Vsebuje peptone, laktozo, saharozo, dipotassijev fosfat, agar, eozin, metilen modro in vodo. Je zelo podoben macconkey agarju, še posebej, če se uporablja emb agar z levinom, ki ne vsebuje saharoze.

Pravzaprav se vsak laboratorij odloči, ali deluje z enim ali drugim, saj izpolnjujejo isto funkcijo, čeprav so biokemično različni.

Celo predstavlja enake neprijetnosti kot klasični MacConkey Agar v proizvodnji Swarming za spol Proteus. Zato se lahko koncentracijo agarja izognete temu pojavu za do 5%.

Osnova

Selektivno

EMP agar je subtilno selektiven, ker vsebuje anilinsko (eozin in metilen modra) barvanje, ki deluje kot zaviralci, kar preprečuje rast večine gram -pozitivnih bakterij in nekatere zahtevne zahtevne zahtevne zahtevne bacile.

Vendar ima ta agar neprijetnosti, da se lahko nekatere gram -pozitivne bakterije uprejo prisotnosti zaviralnih snovi in ​​rastejo kot majhne brezbarvne, kot je na primer Enterococcus faecalis in nekaj Staphylococcus.

Tudi določeni kvas lahko rastejo, na primer Kompleks Candida albicans, ki bo dal zelo majhne roza kolonije. Clamidospore se lahko celo razvijejo iz tega kvasa, če vzorec posejemo na globino.

Diferencialno

Po drugi strani je emb agar tudi diferenčni medij, saj imajo ta barvila (eozin in metilen modra) lastnost oblikovanja oborine v kislinskem pH, zato služijo kot kazalniki proizvodnje istega.

Vam lahko služi: alometrija

Zato šibko fermentacijske ali saharozne bakterije proizvajajo vijolične barve v 24 do 48 urah. Na primer žanri Klebsiella, Enterobacter in Serratia.

Tiste bakterije, ki močno fermentirajo laktozo, kot je Escherichia coli, ali saharoza, kot Enterokolitska Yersinia tudi Proteus Penneri, Tvorijo zelenkasto črno oborino, ki daje videz kovinske svetlosti, značilne pri teh vrstah.

Treba je opozoriti, da če se uporablja emb Levine medij (brez saharoze), Enterokolitska Yersinia in Proteus Penneri Izdelali bodo prozorne kolonije.

Bakterije, ki ne fermentirajo laktoze ali saharoze, hranijo prisotnost peptonanov, ki zagotavljajo aminokisline in dušik, potrebne za razvoj bakterij, in proizvajajo prozorne kolonije. Na primer žanri Salmonela in Shigella, med ostalimi.

Pomembno je tudi poudariti, da je spol Acinetobacter Lahko predstavlja modro kolonije sivke, tudi če ni laktozni fermeter ali saharoza, vendar imajo lastnost pritrditve metilen modrega na svoji celični steni. To se lahko zgodi tudi z drugimi oksidativnimi bakterijami.

Priprava

Originalni dehidrirani medij je svetlo bež. Za pripravo tega kulturnega medija je treba 36 gramov dehidriranega medija tehtati in suspendirati v popravku, ki vsebuje liter destilirane vode.

Ko mešanico pustite 5 minut v mirovanju, odpeljite fixolo do vira toplote in mešajte na živahno in stalno, dokler ne zavre in se popolnoma raztopi.

Nato je treba že raztopljeni kulturni medij sterilizirati s pomočjo avtoklava pri 121 ° C 15 minut.

Čas končan, odstranimo ga iz avtoklava in pustimo, da stoji na kratko. Potem je še vedno vroče (45-50 ° C) med 15 in 20 ml agarja na vsaki petrijski sterilni plošči. Medij mora biti modri likmus.

Vam lahko služi: amilaza: značilnosti, klasifikacija, struktura, funkcije

Po serviranju plošče ostanejo rahlo odkrite, dokler se agar malo ne ohladi. Potem so pokriti in se pustijo v celoti utrditi. Nato se naročijo v obrnjenih trombocitih in so shranjeni v hladilniku (8 ° C) do uporabe.

Ta postopek se prednostno izvaja v laminarnem pretočnem zvoncu ali pred Bunsenovim vžigalnikom, da se prepreči onesnaževanje.

Pomembno je upoštevati, da bo vsaka poslovna hiša nakazala količino, ki jo je treba tehtati za pripravo gojišča.

Končni pH medija mora biti 7.2 ± 0.2

Prijave

• Ta medij se uporablja za sejanje urina in blata ali katere koli vrste kliničnih vzorcev, še posebej, če se sumi na prisotnost nerazpoložljivih gram -negativnih bacilov, kot je bacili, ki pripada družini Enterobacteriaceae, ki v tem mediju zelo dobro raste.
• Enteropatogene bakterije žanrov Shigella in Salmonela Odlikujejo jih njihove brezbarvne ali rahlo jantarne kolonije.
• Drugi ne -fermentacijski bacili rastejo, na primer Aeromonas, pseudomonas, acinetobacter, med ostalimi.
• Tudi ta medij je zelo uporaben pri mikrobiološki analizi hrane in vode, saj je idealen za popolno potrditveno fazo določanja koliform, torej za potrditev prisotnosti In. coli Iz Murky EC juhe, iz najverjetnejše tehnike številke (NMP).

QA

Če želite preveriti, ali novo pripravljeni kulturni medij dobro deluje, je mogoče posejati kontrole, da bi opazovali značilnosti kolonij in preverili, ali dajejo po pričakovanjih.

Če želite to narediti, lahko uporabite seve ATCC ali dobro identificirane seve In. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella tiphimurium, Shigella Flexneri, Pseudomonas aeruginosa in nekaj gram -pozitivnih bakterij, kot so S. aureus.

Pričakuje se, da In. coli Ustvari dobro razvite modrikaste črne kolonije z zelenim kovinskim sijajem. Medtem Enterobacter aerogenes in Klebsiella sp Morajo dati dobro razvite sluznice iz modrikasto črne barve.

Lahko vam služi: stolpec Winograsky

S svojim delom, Salmonela Tifimurium in Shigella Flexneri Razviti morajo velike, brezbarvne kolonije ali z lahkoto jantarno barvo.

Končno žanr Pseudomonas aeruginosa Raste kot brezbarvne kolonije nepravilne velikosti, medtem ko je treba gram -pozitivne bakterije v celoti zavirati ali odrasti z zelo majhnimi kolonijami.

Končni premisleki

Včasih sterilizacija povzroči zmanjšanje metilen modra, opazovanje oranžnega medija. Da bi metilen modra do oksida in obnovili vijolično barvo, jo je treba nežno mešati, dokler se barva ne povrne.

Tudi po steriliziranem barvilu lahko barvilo obori, zato ga je treba pred serviranjem petrijskih plošč dobro zmešati.

Reference

1. Eosina in metilen modri agar. Okreval iz kalaba.com.
2. Levine e.M.B. (Z eosino in metilen modro). Okreval od Britanaalaba.com.