Simmons Citrate Agar

Pseudomonas fluorescens v Simmons Citrate agar. Vir: dvom, cc by-sa 3.0, Wikimedia Commons

Kaj je Simmons Citrate Apar?

On Simmons Citrate Agar Je trden medij, ki se uporablja kot biokemični test identifikacije mikroorganizmov, zlasti gram -negativnih bacilov. Originalni medij je ustvaril Koser leta 1923.

Koserjev citratni medij je bil sestavljen iz juhe, ki vsebuje natrijev fosfat, amonijev fosfat, monopotonični fosfat, magnezijev sulfat in natrijev citrat.

Kot je razvidno, je edini vir ogljika v mediju citrat, dušik.

Zato se inokulirane bakterije v tem mediju lahko razmnožujejo le, če lahko vzame ogljik citrata. Test je bil pozitiven, če je na sredini prišlo do motnosti. Vendar sem imel neprijetnosti, da bi lahko prišlo do ne -specifične motnosti.

To težavo je Simmons rešil z dodajanjem Bromotimol Agar v prvotno formulo Koserja. Čeprav je načelo enako, se razlaga drugače.

Osnova

Nekatere bakterije lahko preživijo v odsotnosti fermentacije ali proizvodnje mlečne kisline, ki jih je treba doseči z uporabo drugih substratov. V tem testu je edini ponujen vir ogljika citrat.

Bakterije, ki so sposobne preživeti v teh pogojih.

Katabolizem citrata z bakterijami vključuje encimski mehanizem brez posredovanja koencima do. Ta encim je znan po imenu Citrate (citrat oksalacetat-liasa) ali demolaze citrata. Reakcija zahteva prisotnost dvovalentnega kationa, ki ga v tem primeru dobavi magnezij.

Vam lahko služi: vrste dihanja in njihove značilnosti

Reakcija ustvari oksaloacetat in piruvat, ki nato povzročijo organske kisline sredi alkalnega pH, ki jo tvori uporaba vira dušika. Te organske kisline se uporabljajo kot vir ogljika, ki ustvarjajo karbonate in bikarbonate, še dodatno alkalizirajo medij.

Posejan način

Citratni medij Simmonsa mora biti rahlo inokuliran v ribjemu repu z ravno ali iglo in inkubiramo od 24 ur do 35-37 ° C. Vrhunec, ko so rezultati opazili.

Sejava je narejena samo na površini agarja, brez preboja.

Interpretacija

Če je medij prvotna barva (zelena) in ni vidne rasti, je test negativen, če pa se medij spremeni modro, kaže na prisotnost alkalnih izdelkov, ki jih zazna indikator pH. V tem primeru je test pozitiven.

To se zgodi, ker če bakterije uporabljajo ogljik citrata, lahko tudi vzame dušik iz amonijevega fosfata, s katerim sprošča amonijak, alkalizira medij.

Po drugi strani pa, če rast bakterij opazimo na sredini, vendar ni spremembe barve, mora biti test tudi pozitiven, saj če pride do rasti Vir ogljika, čeprav takrat ni spremembe pH (včasih lahko traja).

Če obstaja dvom v interpretaciji končne barve, jo lahko primerjamo z neokuženo citratno cevjo.

Priprava

Tehtamo 24,2 gr dehidriranega medija za liter vode. Zmešajte in pustite približno 5 minut. Zaključite raztapljanje srednjega ogrevanja 1 ali dve minuti, pogosto mahajte.

Vam lahko služi: kakšna je makromolekularna raven?

Postrezite 4 ml v preskusnih in avtoklavanskih cevi pri 121 ° C 15 minut. Ko zapustite avtoklav, se nagibate s pomočjo podpore, tako da se agar utrdi v obliki flavte z malo taco ali ozadja in še več okvirja.

Končni pH srednjega citrata je 6,9 ​​(zelena barva). Ta medij je zelo občutljiv na spremembe pH.

PH 6 ali manj, medij postane rumena barva. Te barve ne opazimo pri testu bakterij.

In pri pH 7,6 ali več se srednje spremeni v modri barvi intenzivne Prusije.

Uporaba

Simmons Citrate Agar se uporablja za prepoznavanje nekaterih mikroorganizmov, zlasti bacilov, ki pripadajo družini Enterobacteriaceae in druge nefermentalne glukoze.

Končni premisleki

Simmons Citrate Medium je zelo občutljiv test, saj je mogoče dobiti lažne pozitivne rezultate, če se naredijo nekatere napake.

Nega, ki jo je treba sprejeti, je naslednja:

Inoculo

Zelo debelega ali obremenjenega bakterijskega inokuluma ne bi smeli storiti, ker lahko povzroči, da se na mestu poseja razvije bakreno rumena barva, ne da bi to vplivalo na preostali del medija, vendar lahko verjame, da obstaja rast. Ne pomeni dokaznih pozitivnosti. 

Prav tako lahko debeli inokulum ustvari lažno pozitivno, saj lahko predhodno oblikovane organske spojine znotraj celičnih sten morbodarnih bakterij sprostijo dovolj ogljika in dušika, da spremenijo indikator pH.

Zato je ideal sejati z iglo namesto platine, da ne bi jemal odvečnega materiala.

Vam lahko postreže: prehranska veriga džungle

Posejan

Po drugi strani je, ko je baterija biokemičnih testov za identifikacijo zadevnega mikroorganizma sejala, je pomembno, da je citrat test prvi, da se inokulira.

V tej okoliščini je mogoče pridobiti lažno pozitivno, ker bo katera od teh snovi, ki jih uvede napaka.

Drug način, da se izognete vlečenju snovi, je zažgati ročaj in vzeti nov inokulum med enim in drugim.

Paziti je treba tudi pri dotiku kolonije, da izvede inokulum, saj se je treba izogibati vlečenju dela agarja pridelkov, iz katerega prihajajo bakterije, zaradi zgoraj navedenega pojasnjenega.

V tem smislu Matsen, Sherris in Branson priporočajo, da se inokulum v fiziološki raztopini razredči pred inokuliranjem citratnega testa, da se izognete prenosu drugih virov ogljika.

Intenzivnost barve

Upoštevati je treba, da se lahko intenzivnost barve, ko je test pozitiven, razlikuje glede na komercialno hišo.

Poleg tega obstajajo mikroorganizmi, ki pozitivni pri 24 urah, vendar obstajajo tudi drugi sevi, ki potrebujejo 48 ur ali več, da se ustvarijo pH.

Reference

1. Bbl Simmons citrat agar naklon. BD si je opomogel.com.
2. Simmons Citrate Agar. Okreval od Britanaalaba.com.