Standardna fundacija Agar Count, priprave in uporabe

On agar standard Je trden, neselektivni kulturni medij, zasnovan za količinsko določitev aerobne mikrobne obremenitve, ki je prisotna v potrošniških vodah, odpadnih vodah, mlečnih pijačah. Ta medij je znan tudi kot PCA Agar) za svojo kratico v angleškem grofu agar. Ustvarili so ga leta 1953 Buchbinder, Baris in Goldstein.

Standardni medij računa je sestavljen iz ekstrakta kvasa, tripteina, glukoze, agarja in destilirane vode. Ta formulacija vsebuje prehranske osnovne elemente, ki omogočajo razvoj sedanje, ZN zahtevne aerobne mikrobne obremenitve.

Decimalna redčenja za štetje štetja UFC. Vir: Quentin Geissmann [CC BY-SA 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licence/by-sa/3.0)]

Ker medij ne vsebuje zaviralcev, se lahko bakterije razvijejo brez omejitev, zato je idealen za splošno štetje kolonij. Vendar tehnika kvantifikacije plakov ne bo zaznala vseh prisotnih bakterij, temveč le tiste, ki so sposobni rasti v okoljskih pogojih, za katere je podvržen agarju.

V tem smislu je tehnika kvantifikacije plakov običajno določena s količino bakterij aerobnih mezofilnih tipov, to je tistih, ki so razvite pri temperaturah med 25 in 40 ° C, z optimalno temperaturo rasti pri 37 ° C.

Ta bakterijska skupina je zelo pomembna, saj obstaja večina patogenih bakterij za človeka.

Treba je opozoriti, da včasih količinsko določi količino psihorofilnih bakterij, ki so prisotne v hrani. Te bakterije so tiste, ki se razvijejo pri nizkih temperaturah (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Prav tako so lahko pri nekaterih vrstah živil, kot je v pločevinkah, pomembne termofilne bakterije, ki se razvijejo v območju med 50 ° C pri 80 ° C ali več.

Mikrobna količinska določitev je izražena v enotah za oblikovanje debelega črevesa (UFC) na gram ali vzorčni mililiter.

[TOC]

Osnova

Standardni račun je zasnovan tako, da omogoča zadovoljiv razvoj aerobnih bakterij, ki ne zahtevajo, saj ekstrakt kvasovk, triptein in glukoza zagotavljajo potrebna hranila za dober razvoj mikrobov.

Lahko vam služi: Alizarina: značilnosti, priprave, uporabe in strupenosti

Po drugi strani ima medij svetlo barvo in prozoren videz, zato je idealen za vizualizacijo kolonij, ki jih je razvila metoda v -dept -depth (razlitje plošče).

Možne so tudi kolonije, ki štejejo s površinsko zasajeno metodo z Drigalski lopatica.

Ko je mikrobna obremenitev visoka, je treba narediti decimalna redčenja vzorca, ki je v študiju.

Treba je opozoriti, da ta medij priporoča Ameriško združenje za javno zdravje (APHA) za štetje aerobnih medosij.

Priprava

Tehtamo 23,5 gr dehidriranega medija in se raztopimo v litru destilirane vode. Za popolnoma raztopljenje je treba zmes segreti s pogosto mahanjem, dokler ne zavre. Naslednji koraki so odvisni od zasajene tehnike, ki bo uporabljena.

Za tehniko odlaganja plošče

Distribuiraj tako, da v epruvetah daste od 12 do 15 ml. Kasneje se v avtoklaviju pri 121 ° C 15 minut sterilizira. Naj se vertikalno strdi v obliki taca. Shranite do uporabe.

Taco stopite, ko ga bo uporabil. Ko ga lahko obdržite v Mariji do 44-47 ° C, medtem ko so vzorci pripravljeni.

Za površinsko posejano

Sterilizirajte medij v avtoklavu pri 121 ° C in nato v sterilnih ploščah Petri razdelite 20 ml. Do uporabe naj se strdi, investira in prihrani v hladilnik.

Pred uporabo plošče. Srednji pH mora biti 7,0 ± 0,2.

Uporaba

Standardni račun se uporablja v tehniki aerobne mezofilne štetja med mikrobiološko analizo vode in hrane. Poročilo o aerobnih mezofilos je potreben, saj določa kakovost zdravstvene kakovosti vzorca, ki je v študiju.

Uporaba te tehnike (z uporabo tega medija) omogoča makroskopsko vizualizacijo izoliranih kolonij za količinsko določitev.

Tehnika praznjenja plošče (posejana z globino)

-Postopek

Tehnika je sestavljena iz naslednjega:

1) Homogenezirajte vzorec, da bi prerazporedili prisotne bakterije.

2) Začetno suspenzijo se izvede v sterilni steklenici ali vrečki, pri čemer spoštuje razmerje 10 gr ali 10 ml v 90 ml razredčila (10^-1).

Lahko vam služi: fikologija

3) Iz začetne suspenzije se izdelajo ustrezna decimalna redčenja, odvisno od vrste vzorca. Ex: (10^-2, 10^-3, 10^-4). Redke se izvajajo z raztopino vode ali fosfatnega pufra.

Za to^-2 in tako naprej.

4) 1 ml vsake redčenja se odvzame in postavi na prazne sterilne petrijeve plošče.

5) Dodajte vsaki plošči 12 do 15 ml agarja prej staljenega in počivate pri 44 - 47 ° C.

6) Naložite mehke vrtljive premike ploščem, da vzorec enakomerno porazdelite in pustite, da.

7) Vložite plošče in inkubirajte pri 37 ° C v aerobiozo 24 do 48 ur.

8) Dolgovinirali je čas za pregled plošč in štetje kolonij v redčenju, ki ga omogoča. Za račun so izbrane tiste plošče, ki imajo od 30 do 300 UFC.

Število je mogoče izdelati ročno ali pa lahko uporabite skupino računovodskih kolonije.

Vrednosti, ki jih dovoljuje ML vzorca, se lahko razlikujejo od ene države v drugo po pravilih, s katerimi se upravljajo.

-Izračun UFC

Splošni izračun se izvede z naslednjo formulo:

Formula za splošni izračun kvantifikacije UFC. Vir: Nacionalna uprava za zdravila in medicinska tehnologija (ANMAT). Mikrobiološka analiza hrane, uradna analitična metodologija, indikatorski mikroorganizmi. 2014 zvezek 3. Na voljo na: anmat.Gov.ar

Izrazite rezultate v 1 ali 2 števkah, pomnožite z ustrezno bazo 10. Primer: Če je rezultat 16.545 je zaokrožen na podlagi tretje številke pri 17.000 in bo izražen na naslednji način: 1,7 x 10⁴. Zdaj, če je bil rezultat 16.436 je zaokroženo na 16.000 in izraža 1.6 x 10⁴.

Tehnika posejane površine

-Postopek

-Inokulirajte z 0,1 ml neposrednega vzorca, če je tekoč, začetno suspenzija 10^-1 ali zaporednih redčenj 10^-2, 10^-3 itd, v središču standardne plošče računa.

Vam lahko služi: flora in favna iz Tamaulipasa: več reprezentativnih vrst

-Vzorec razporedite z lopatico Drigalski ali stekleno palico v obliki L. Pustite stati 10 minut.

-Vložite plošče in inkubirajte v aerobiozo pri 37 ° C 24 do 48 ur.

-Nadaljujte s štetjem kolonij, izberite tiste plošče, ki so v razponu med 20 - 250 UFC.

-Izračun UFC

Za izračun se uporablja faktor redčenja, ki je inverzni. Številka do 2 pomembni števki je zaokrožena (zaokrožena po tretji številki) in je izražena v osnovni moči 10. Na primer, če se v vzorcu šteje 224 UFC brez redčenja (10^-1), 22 x 10¹  UFC, če pa je bila številka 225, poroča 23 x 10¹ UFC.

Zdaj, če se 199 UFC šteje v redčenje 10^-3, Prijavljenih bo 20 x 10⁴ UFC, če pa se šteje 153 UFC v istem redčenju, se poroča 15 x 10⁴ UFC.

QA

Standardni medij računa je mogoče oceniti z uporabo certificiranih znanih sevov, kot so: Escherichia coli ATCC 8739, zlati stafilokok ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella Flexneri ATCC 12022.

Če je kulturni medij v optimalnih pogojih, je v vseh primerih pričakovati zadovoljivo rast, z izjemo L. Fermentum ki ima lahko redne zmogljivosti.

Za oceno sterilnosti kulturnega medija je treba 24 ur pri 37 ° C pri aerobiozi pri 37 ° C pri aerobiozi 24 ur inkubirati eno ali dve plošči vsake pripravljene parcele (brez inokuliranja). Po tem času ni treba opaziti rasti ali spremembe barve.

Omejitve

-Ne stopite agarja več kot enkrat.

-Pripravljeni medij lahko traja do 3 mesece, dokler ostane v hladilniku in zaščiten pred svetlobo.

-Ta medij ni primeren za zahtevne mikroorganizme ali anaerobe.

Reference

1. Nacionalna uprava zdravil za hrano in medicinsko tehnologijo (ANMAT). Mikrobiološka analiza hrane, uradna analitična metodologija, indikatorski mikroorganizmi. 2014 zvezek 3. Na voljo na: anmat.Gov.ar
2. Diffco Laboratories Francisco Soria Melguizo, S.Do. Agar štetja plošč. 2009. Dostopno na: http: // f-soria.je
3. Conda Laboratories. Agar za standardne metode (PCA) v skladu z APHA in ISO 4833. Na voljo na: Condalab.com
4. Britanski laboratoriji. Število plošč agar. 2015. Na voljo na: Britanaalab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B in Velázquez ali. 2009. Tehnike za mikrobiološko analizo hrane. 2. izd. Kemijska fakulteta, UNAM. Mehika. Na voljo na: depa.Fquim.Ne