Wright obarvanje

Različne periferne krvi, barvane z obarvanjem. Do. Akutna levkemija b. Plasmodium vivax znotraj eritrocita. C. Plasmodium falciparum, Macrogametocito. D. Limfocit

Kaj je Wright obarvanje?

The Wright obarvanje To je tehnika obarvanja, ki jo je leta 1902 ustvaril ameriški patolog James Homer Wright, ki temelji na obarvanju Romanowskyja, da bi bolje razlikovali različne vrste krvnih celic. 

Ta obarvanost je polikromatska, kar pomeni, da ustvari več barv, odvisno od strukture, ki absorbira barvilo. Ta tehnika obarvanja se pogosto uporablja za izvajanje diferencialnih belih krvnih celic in preučevanje morfologije rdečih krvnih celic, trombocitov in levkocitov v periferni krvi in ​​kostnem mozgu.

Njegova uporaba je zelo pomembna, saj lahko nepravilnosti opazimo v različnih celičnih linijah krvi, kar olajša diagnozo bolezni, kot so levkemija ali bakterijske ali parazitske okužbe.

Morda so to najpogostejše aplikacije, v katerih se uporablja ta tehnika, vendar niso edine. Uporabna je tudi v drugih vzorcih, ki niso krvi in ​​kostni mozeg, kot so vzorci nosnega izločanja, fekalna sluz, sputum, koža, koža.

Temelj Wrightovega obarvanja

Wrightovo obarvanje se je rodilo iz madežev Romanowsky.

Mešanica barvil, ki se uporabljajo pri obarvanju Wright, povzroči učinek, znan kot Romanowsky, to je, da nudi čudovito vijolično obarvanost levkocitov.

Komponente, odgovorne za dajanje tipičnih barv Wrightovega obarvanja, so modre B in Eosina in. Opažen učinek bo odvisen od povezave barvil do kemijskih struktur in interakcij modrega B in eozina in.

Kislinske strukture, kot so nukleinske kisline, jedrski proteini in nezrela reaktivna citoplazma nekaterih vrst celic, nastavljena modra B (osnovno barvanje).

Medtem ko osnovne strukture, kot so hemoglobin, zrnce segmentiranih eozinofilcev, med drugimi celičnimi strukturami postavljajo eozin in (kislinsko barvanje).

Na rezultat obarvanja lahko vplivajo različni dejavniki, kot so pH barvila Wright, raztopina za dušenje in pranje, pa tudi čas obarvanja in pritrditve.

Zato je vsak korak pri pripravi reagentov ključnega pomena in ga je treba skrbeti za vsako podrobnost.

Materiali

Wright barvilo. Za 100 ml je potrebno:

Tehta 0.3 Gr barvila Wright, izmeri 97 ml metanola in 3 ml glicerola.

Priprava

Na malti močni količina Wrightovega barvila in postopoma vključuje glicerol, dokler se prah popolnoma ne raztopi.

Nato dodamo metanol, mešamo in vlijemo v jantarno steklenico.

Pred uporabo je treba raztopino z mehkimi gibi in filtri.

Lahko vam služi: Smernica Izbira: kaj je, definicija, primeri

Pufer pufer raztopina

V litru destilirane vode dodamo 3,76 g disodijevega hidrofosfata (NA₂HPO₄   2H₂0) plus 2,1 GR dihidrogenega kalijevega fosfata (KH₂Po₄).

Zelo dobro premešajte, dokler ne raztopite vseh vgrajenih reagentov. Prilagodite pH na 7,2.  Vlijemo v stekleni kozarec in hranite pri sobni temperaturi.

Dodatni materiali, potrebni za obarvanje

Poleg tega so za izvajanje obarvane tehnike potrebni drugi materiali, to so: Porta predmeti ali pokriva predmete, obarvalni most, trakovi z vodo ali pufer za pranje, štoparica za odvzem barvnih časov in nekaj sušilnega materiala (vpojni papir, gaza ali bombaž ).

Wright obarvanje komponent

Metanol

Alkohol (metanol) služi kot fiksar krvnega razmaza na diapozitiv.

V bistvu gre za zmanjšanje reaktivnega, dehidratorja in koagulantnega fiksata. Zato je njihova funkcija koagulirati beljakovine in jih narediti netopne, vendar ne da bi se denaturirali.

Metanol je najbolj uporabljen reagent za popravljanje razmaza v vseh laboratorijih, saj zagotavlja boljše rezultate kot tisti, pridobljeni z etanolom. Idealna koncentracija je 99%.

Amortiber šok

Absorber za udarce (puferirana raztopina) ima funkcijo prilagajanja ali vzdrževanja.

Prehod pritrditve z metanol dehidratnimi celicami in absorber za udarce jim pomaga pri rehidraciji.

Eosina (y)

Eosina ima afiniteto do osnovnih komponent, ker gre za kislo barvilo. Dve vrsti eozina sta znani zelo podobni drug drugemu, toliko, da se lahko uporabijo, pri čemer dobimo enak rezultat.

Eden se imenuje eozin in, rumeni eozin ali tetrabromofluorescein, drugi pa eozin B, modrikast e eritrozin ali dibromoditrofluorescein. Vendar je eosin in je tisti, ki se najpogosteje uporablja.

Najpomembnejša lastnost tega barvila je njegova negativna polarnost, zaradi česar so pritegnjene celične strukture s pozitivno obremenitvijo.

Metilen modra

Je osnovno barvilo. Njegova glavna lastnost je metakromija, torej ne bodo vse strukture barvale iste barve, odvisna bo od kemične sestave struktur, ki se obarvajo.

Nekateri bodo postali lahka ali temno modra, drugi iz temno vijolične ali blede lila.

Tehnika

1. Naredite razširjen vzorec, tako da je tanek film, bodisi na diapozitivu ali prevlekah.
2. Pustite, da se zrak posuši približno 2 uri.
3. Suhi vonj postavite na obarvani most ali obarvano vedro s podaljšanim vzorcem navzgor.
4. List pokrijte z Wright Drop by Gota, da pokrijete celotno površino. Pustite dejanje 5-8 minut.
5. Barvilo mora popolnoma pokriti drsnik, ne da bi se skozi robove prelilo. Če v času obarvanja začne izhlapevati, je treba namestiti dodatne kapljice.
6. Nato dodajte enako količino amortizerja, malo pihajte, dokler se ne pojavi značilna kovinska svetlost. Tame 10 do 15 minut.
7. Operite z vodo iz pipe in postavite mehko curek, dokler list ne izgleda roza.
8. Z gazo, impregnirano z alkoholom, je odpravil barvanje barvanja na zadnji strani diapozitiva.
9. Preden postavite potopno olje, pustite, da ga vizualiziramo v mikroskop.

Vam lahko služi: taksonomske ravni

Uporaba/aplikacije obarvanja Wright

Hematologija

Idealen je za obarvanje periferne krvi.

Zaradi kemijskih lastnosti te kombinacije barvil lahko celične strukture zlahka prepoznamo, saj lahko ločimo različne vrste prisotnih celic.

Smrkav nos

Ta tehnika je zelo uporabna za prepoznavanje nosnih sekrecijskih celic (epitelijske celice, segmentirani eozinofili, polimorfonuklearno) pri diagnozi alergijskega rinitisa.

parazitologija

V tem smislu je bilo koristno za preučevanje Leishmania sp Znotraj histiocitov podkožnega celičnega tkiva v kožnih razjedah. Uporablja se tudi za identifikacijo levkocitov v vzorcu blata (fekalni levkogram).

V tem primeru je zdravniku zanimivo vedeti, ali je levkocitoza, ki je prisotna v blatu, s polimorfonuklearnim ali mononuklearnim. Ta ugotovitev v fekalnem levkogramu bo vodila, ali gre za bakterijsko ali virusno okužbo.

Po drugi strani pa so lahko paraziti, ki krožijo v krvi. Iskani paraziti so Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii in filarije in v veterinarju je koristno pri iskanju Theilery Equ in Babesia Caballi, Vzročna sredstva za dojenčke, zlasti pri konjih.

Obarvanost Wrighta in tudi Giemsa omogočata razlikovanje hemoparazitov od običajnih celičnih komponent. Za to je mogoče uporabiti dve vrsti razširjenih:

Fino iztegnjeno

Kri se podaljša kot tanek film na diapozitivu. Wright obarvanje, ki razkriva značilnosti jedra in citoplazme.

Debela kapljica

Ta metodologija se uporablja za raziskovanje prisotnosti zajedavcev v večji količini krvi.

Za to se na diapozitiv postavi velika kapljica krvi. Ko morate tam defibrine, naredite večje in večje kroge od središča z robom drugega diapozitiva.

Končno, da bi opazovali parazite v debelem vonju, je treba eritrocite navesti z vodo.

Dihalne okužbe

Na ravni dihanja je koristna tudi ta tehnika, saj so za vzpostavitev diagnoze pomembne celice, ki so prisotne v vzorcih sputuma, bronhialnega ali bronhalveolarnega pranja.

Tu lahko ločite polimorfonuklearne celice in mononuklearne celice.

Bakteriologija

Uporaba te tehnike v bakteriologiji je omejena, saj ni dobro barvati bakterij. Zato se za njihovo obarvanje uporabljajo druge specializirane tehnike barvanja.

Vendar se uporablja za iskanje epitelijskih celic z vključitvenimi telesi Chlamydia trachomatis V razmazu sečnice ali endocervikalne sluznice, čeprav je treba prepoznati, da ni najboljša metoda.

Lahko vam služi: hemociani

Med rdečimi krvnimi celicami je mogoče opaziti tudi spiralne bakterije, kot so Borrelia Burgdorferi Pri okuženih bolnikih, pa tudi morule ali telesa vključitve Ehrlichia sp V citoplazmi limfocitov, monocitov ali nevtrofilcev v krvnem razmazu.

Mikologija

On Histoplasma capsulatum To je pogosto diagnosticirano patogeno glivo z mikroskopskim opazovanjem različnih vzorcev tkiv, barvanje z obarvanjem Wright.

Kako se opazijo strukture vzorcev krvi z Wrightovim obarvanjem?

Priporočila za tinco sanguine Srols za branje hemograma. Vir: Retamales E, Mazo V. Javnozdravstveni inštitut, vlada Čila

Priporočila za dobro obarvanje

- Podaljški vzorcev krvi se morajo spontano posušiti. Razmazi morajo biti čim bolj tanki, da bi dobili boljšo fiksacijo barvila in se izognili prekrivanju.

- Za kakovostno barvanje je priporočljivo. Po drugi strani je idealen vzorec kapilarna kri, brez antikoagulanta.

- Če pa se uporablja venska kri, jo je treba uporabiti kot EDTA in ne -heparin antikoagulant, saj lahko slednja deformira celične strukture.

- Da se prepreči poslabšanje pripravljenega barvila, ga je treba shraniti na suhih mestih.

- Med postopkom pranja je priporočljiva uporaba vode, prilagojena nevtralnemu pH.

- Priporočljivo je, da občasno preizkusimo metode barvanja, ki se uporabljajo v laboratoriju.

To je narejeno obarvanje vzorcev ali podaljšanih vzorcev kot nadzor kakovosti. Ta korak je pomemben, saj je zagotovljeno, da je obarvanje pravilno pripravljeno in so časi obarvanosti dobro standardizirani.

Če je vzorčni list slabo obarvan, potem obstajajo težave, ki jih je treba rešiti.

Pogoste napake v Wrightovi barvi

Zelo bledo obarvanje

Zelo blede razmaze so običajno posledica zelo kratkega časa obarvanja ali zelo pretiranega pranja. Popravi se s podaljšanjem časa stika z barvilom ali zmanjšanjem časa pranja.

Zvonovi barvila

Prisotnost barvanja oborine v vonju ima lahko več vzrokov. Najpogosteje so: uporaba nefiltriranega barvila, barvila na neenakomerni mostovi, nosite umazane rjuhe s prahom ali maščobo, ne da bi dobro prali, ko je obarvanje zaključeno.

Drgnjenje z izjemno rdečkasto ali modro obarvanostjo

Absorber za udar je odgovoren za pH barvila. Barve s pH pod navedenim (kislino) bodo povzročilo, da bodo dosegli zelo rdečkaste vonjave.

Če je pH barvila zgoraj (alkalna), bo dobil izjemno modrikast razmaz.

Način pomnilnika

Reagent mora biti shranjen pri sobni temperaturi.

Reference

1. López-jácome, l., Hernández-Durán, m., Colín-Castro, c., Ortega-Peña, s., Cerón-González, g., Franco-Cendejas, f. (2014). Osnovno obarvanje v mikrobiološkem laboratoriju. Raziskave invalidnosti.
2. Calderón, a., Cardona, J., Vergara, ali. (2013). Babesia spp frekvenca. Pri konjih Montería, Córdoba (Kolumbija). Rev. Udcaactual diskulg. znanstvenik. 
3. Retamales, npr., Mazo, v. Javno zdravstvo v Čilu. Priporočila za tinco sanguine Srols za branje hemograma.