Maj grünwald-giemsa madež

Kronični vzorec mieloidne levkemije z obarvanjem May Grünwald-Giemsa. Vir: Paulo Henrique Orlandi Mourao, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

Kaj je morda obarvanje Grünwald-Giemsa?

The Maj grünwald-giemsa madež, o Pappenheim, je diferencialna obarvana tehnika, ki meša reagente Giemsa in lahko Grünwald. Uporablja se za diferenciacijo normalnih in nenormalnih krvnih celic v razmazu periferne krvi in ​​kostnem mozgu, pa tudi za obarvanje histoloških rezov in citoloških vzorcev.

Oba reagenta -Giemsa in May Grünwald- izhajata iz Romanowsky obarvanja, tehnike, ki temelji na kombinaciji kisline in osnovnih barvil.

Giemsa je tehniko izboljšala s stabilizacijo mešanice eozina, metilen modrega in njegovih derivatov, z glicerolom. Namesto tega je Grünwald uporabil eozin in metilen modro, pri čemer je uporabil metanol kot topilo. Ta strateška kombinacija je dala odlične rezultate.

Medtem ko so v celični morfološki opazovalni dejanji, podobni barvanjem Giemse in Wright.

Poleg tega se je izkazalo za zelo koristno za citološko študijo spermatične tekočine. Ne le, da je bilo poudarjeno s prikazom morfoloških značilnosti sperme, ampak omogoča tudi, da se levkociti, epitelijske celice in spermatogeneze močno razlikujejo.

Osnova

Tehnika sledi temelju obarvanja Romanowskyja, v katerem imajo kisla barvila selektivno afiniteto do osnovnih celičnih komponent in kisle komponente pritegnejo osnovne barvila.

Z drugimi besedami, tako celične strukture kot barvila imajo pozitivne ali negativne električne obremenitve, enake obremenitve se odvrnejo in različne obremenitve privlačijo.

Na primer, osnovna barvila, kot je metilen modra, se pozitivno naloži in privlačijo negativno obremenjene strukture. Zato ta barvila barva jedra, ki so bogata z DNK in RNA, ki imajo negativno naložene skupine fosfatov.

Zrnce bazofilne segmentirane in citoplazme mononuklearnih belih krvnih celic, ki vsebujejo ARN, so tudi obarvane.

Lahko vam služi: Jaliscova flora in favna: reprezentativna vrsta

Tudi kislo barvilo ima negativno obremenitev, zato se veže na pozitivno obremenjene strukture, kot so eritrociti in zrnca segmentiranih eozinofilcev. Kar zadeva zrnca segmentiranih nevtrofilcev, sta oba barvila nastavljena.

Raznolikost barvil

V tej tehniki kombinacija reakcij med ortokromatsko in metakromatsko barvanje sobiva. Ortokromatski (eozin in metilen modra) so pritrjeni na celično strukturo, na katero so povezani, in zagotavljajo stabilno barvo, ki se ne spreminja.

Po drugi strani pa metakromatski (tisti, ki izhajajo iz metilen modra, Azure in Azure B), njihova prvotna barva se razlikuje, ko se nekoč združijo v določeno strukturo, lahko celo obstajajo številne nianse.

Končno, korak, ki prevzame raztopino May Grünwald. Da se zgodi, mora barvilo postati polarno ali ionizirano in se tako lahko oborino in pogleda na sorodne strukture.

Tehnika

Materiali

• Diapozitiv.
• Barvni mostovi.
• Maj Grünwald rešitev.
• Giemsa obarvanje.
• Destilirana voda.

Koncentrirano maja grünwald barvanje

0,25 gr metilen eozin-modre (barvilo po May Grünwald) in raztopine v 100 ml metanola je treba tehtati. Nato priprava mešamo 1 uro in pustimo stati 24 ur. Po času se filtrira.

Za nanašanje tehnike se maja Grünwald razredči na naslednji način: za 200 ml razredčenega barvila izmerimo 30 ml koncentrirane raztopine, 20 ml puferne raztopine in 150 ml destilirane vode, prilagojene na pH 7.2-7.3. Nato ga mešamo in filtriramo.

Koncentrirano barvanje Giemsa

0,5 gr azur-eozin-vrha metilena (barvilo po Giemsa), raztopi se v 50 ml metanola in doda 50 ml glicerina.

Za izvedbo tehnike 1:10 razredčimo z raztopino pufra in pustimo stati 10 minut. Po potrebi ga lahko filtrirate.

Vam lahko služi: mesénquima

Priprava puferske raztopine pri pH 7,2

Bi jih morali tehtati:

• 40 mg di-hidrogenega kalijevega fosfata (KH2PO4).
• 151 mg vodikovega di-sifotskega fosfata 12-hidrata (NA2HPO4).

Obe spojini se raztopita v 100 ml vode.

Postopek sanguina ali kosti Medol Srols

Obstajata dva modaliteta: klasika in hitra.

Klasična modalnost

• Vonj pokrijte 2 ali 3 minute z raztopino May Grünwald, razredčeno.
• Operite s puferirano destilirano vodo, da odstranite prejšnjo raztopino.
• Pokrijte z isto puferirano pranje raztopino in pustite 1 minuto. Ideja je, da je sprednje barvilo pritrjeno na strukture in da so hkrati celice hidrirane.
• Dodajte 12 razredčenih kapljic tinkture Giemsa na puferirano vodo in pihajte za mešanje in homogenizacijo. Pustite stati 15 ali 20 minut.
• Smear operemo z puferirano destilirano vodo in ga položite, da se posuši v zraku.
• Osredotočite se in opazujte v optičnem mikroskopu krvne celice barvanja s pomočjo 40 -kratne tarče. Po potrebi se lahko uporabi 100x.

Hitri način

• Razmaz pokrijte z barvilom May Grünwald, razredčeno 1 minuto.
• Operite s puferirano destilirano vodo.
• Pokrijte z puferirano vodo in pustite stati 1 minuto.
• Postavite razredčeno barvilo Giemsa in pustite 5 minut.
• Operite s puferirano destilirano vodo in pustite, da se zrak posuši.

Tu opisane tehnike so vodilni vodnik, vendar je treba upoštevati, da se postopki in časi obarvanja razlikujejo glede na komercialno hišo, ki prodaja reagente. Priporočljivo je slediti korakom, ki jih strogo navede vsaka komercialna hiša.

Podaljšana tehnika barvanja tekočine semenčic

• Pokrijte razširjeno s fino plastjo raztopine May Grünwald za 4 minute.
• Odstranite barvilo in sperite z destilirano vodo.
• Razdeljeno plast GIESSA (1:10) postavite v destilirano vodo 15 minut.
• Odstranite barvilo in sperite z destilirano vodo.
• Pustite, da se posuši in opazujte v mikroskopu.

Vam lahko služi: butirska fermentacija

Pomembne specifikacije

Tehnika navaja, da imajo reagenti in pralne rešitve pH prilagojeni na 7.2-7.3, tako da se pripadnosti barvil s celičnimi strukturami ne izkrivljajo in pričakovana končna barva se ne razlikuje.

Prijave

• To tehniko klinični laboratoriji uporabljajo za barvanje perifernega krvnega drgnjenja in kostnega mozga, rezanja tkiv in citologij.
• Na hematološkem področju je ta tehnika ključnega pomena pri preučevanju nepravilnosti celic glede na obliko, velikost in število. To je zelo dragoceno orodje za diagnozo nekaterih bolezni, kot sta levkemija in anemije.
• Predstavlja izjemno koristnost, ko na hematološkem področju iščejo zajedavce (Plasmodium sp in Cruzi Tripaosoma) ali histološki (Leishmanias sp).
• Kar zadeva vaginalno citologijo, je ta tehnika še posebej ugodna za opazovanje Trichomonas vaginalis. To je pomembna ugotovitev, saj njegova prisotnost simulira slike karcinoma In situ da potem izginejo, ko se parazit izloči.
• To je idealno orodje za preučevanje vzorcev sperme, saj zagotavlja dragocene informacije o kakovosti sperme. Podatki, ki jih ponuja, morajo storiti predvsem s številom in morfologijo, pa tudi s sočasnimi celicami, ki so lahko prisotne in so bistvenega pomena, kot so zarodne celice, levkociti in epitelijske celice. S to analizo je mogoče opisati nepravilnosti, ki jih opazimo v spermi na glavi, vratu, srednjem delu in glavnem kosu. Poleg tega lahko pomagajo tudi pokazati primere hosospermije (prisotnost rdečih krvnih celic) in levkospermije ali piospermije (povečanje števila levkocitov v semenu).

Reference

1. Merck KGAA laboratorij. Maj grünwald eosina modra mikroskopija metilena.
2. May-grünwald-giemsa obarvanje. Okreval od Es.Wikipedija.org.
3. Steklene kemikalije Panreac Laboratory. Reagenti za histološke tehnike, hematologijo in mikrobiologijo. Okrevano iz steklenih.com.