biologija

Kinyoun obarvanje

Kinyoun obarvanje
Cryptosporidium parvum, barvan z obarvanjem kinyoun. Vir: Punlop AnusonPornperm, Wiikimedia Commons

Kaj je Kinyounovo obarvanje?

The Kinyoun obarvanje To je tehnika obarvanja, ki se uporablja za barvanje bakterij in kislinskih parazitov, odpornih na kislino. Rodil se je iz modifikacije obarvanosti Ziehl-Neelsena. Obe tehniki se razlagata na enak način, vendar se razlikujeta v dveh elementih: pri pripravi glavnega reagenta in v katerem tehnika kinyoun ne uporablja toplote.

Zaradi tega je znan tudi kot Ziehl-Neelsen v hladnem modificiranem ali Kinyonovem hladnem obarvanju. Je označen za barvo Mycobacterium tuberculosis, Leprae Mycobacterium, Atipične mikobakterije, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris in Cyclosporras cayetanensis.

To je vredno opozoriti Nocardias S to tehniko se šibko barvajo, saj so delno kisli alkohol, zato za ta žanr obstaja sprememba metodologije.

Kinyonovo tehniko je bila kombinirana s trihromsko tehniko, ki jo je Didier spremenil za odkrivanje kokcidijev (Cryptosporidium parvum in Isospora belli) in mikrosporske spore (Enterocitozoon bieneusi in Enchelitozoon Intestinalis).

Osnova

Glavni reagent obarvanja je karbolfucsin ali Fenicada fuchsin, ki ima lastnost združevanja obstoječih karboličnih kislin znotraj viteške celične stene, bogato z lipidi (mikolične kisline) mikobakterij in določenimi zajedavci.

Temu zvezi ne preprečuje kislinskega dekoloranta, zato so mikroorganizmi opredeljeni kot odporna alkoholna kislina.

Za razliko od tehnike Ziehl-Neelsen-ki barvanje popravlja skozi toploto, v kinioun tehniki ta korak ni potreben, saj pripravljena raztopina Fuchsina Fenicada vsebuje visoko koncentracijo fenola.

Lahko vam služi: salmonella-shigella agar

Fenol raztopi lipidni material celične stene, kar omogoča vstop barvila karbolfucsin. Ko barvilo prodira, je pritrjen kljub pranju z alkoholno kislino.

Na ta način so odporni mikroorganizmi alkoholne kisle značilno rdečo barvo, medtem ko je vse, kar ni kisli alkohol, razbarvano in barvano modro.

Tehnika

Materiali

  • Spremenjen feeniciran fuchsin.
  • Kislina alkohola.
  • Metilen modra.

Priprava Fuchsina kinyoun Feenic

  • Osnovna fuchsina: 4 gr.
  • Fenol: 8 ml.
  • Alkohol (95%): 20 ml.
  • Destilirana voda: 100 ml.

Osnovni fuhsin v alkoholu je treba počasi raztopiti, nenehno mešati. Nato se kristaliziran fenol topi v kopalnici pri 56 ° C. Ko se raztopimo, se predhodno pripravljeni raztopini Fuchsina dodajo 8 ml.

Priprava alkohola

  • Koncentrirana klorovodikova kislina: 3 ml.
  • Etanol (95%): 97 ml.

Morate meriti, se pridružiti in mešati.

Priprava metilen modrega kontrasta

  • Metilen modra: 0.3 g.
  • Destilirana voda: 100 ml.

Tehta in se raztopi.

Kinyouna tehnika obarvanja

  • Pripravite razmaz neposredno iz vzorca, ki je lahko med drugim sputum, pljučna tekočina, usedlina urina, cerebrospinalna tekočina ali iztrebki, ali iz suspenzije mikroorganizmov, pridobljenih iz čistih kolonij, razvitih v medijskih medijih.
  • Popravite razmaz s toploto.
  • Postavite razmaz na obarvani most in pokrijte z reagentom Fenicada fuchsin iz kinyous pripravljenega. Pustite stati 3 ali 5 minut.
  • Operite z destilirano vodo.
  • 3 minute okrasite s kislim alkoholom in ponovno operete z destilirano vodo.
  • Okrasite znova s ​​kislim alkoholom 1 ali 2 minuti, dokler ni več barvanja.
  • Operite z destilirano vodo in pustite, da se drsnik postavi v navpični položaj.
  • Pripravo pokrijte z metilen modro in pustite 4 minute.
  • Operite z destilirano vodo in pustite, da se zrak posuši.
  • Preučite 40x in nato 100x.
Vam lahko služi: prozorni poljski mikroskop: značilnosti, deli, funkcije

Če želite izboljšati in pospešiti obarvanje odpornih mikroorganizmov z alkoholno kislino, se doda 1 kapljica vlažilnega sredstva (na primer žaba št. 7) do 30 ali 40 ml Fenicate fuchsin iz kinyoun.

Nekateri laboratoriji spremenijo modro metilensko kontrastno barvilo zaradi svetlo zelene ali picrične kisline. Prva daje zeleno barvo ozadju, drugi pa rumeno barvo.

Posebna tehnika kinyoun za Nocardias

Izboljšati obarvanje spolnih bakterij Nokardija Uporablja se sprememba obarvanja Kinyoun. Tehnika je naslednja:

  • Smear pokrijte s Fenicado Fuchsina iz Kinyouna 3 minute.
  • Operite z destilirano vodo.
  • Na kratko razbarvano s 3% pripravljenim alkoholom, dokler ni bolj obarvano.
  • Spet operemo z destilirano vodo.
  • Pripravo pokrijte z metilen modro in pustite dejanje 30 sekund.
  • Operite z destilirano vodo in pustite, da se zrak posuši.

Kombinirana tehnika feenicirane in trikromične fuchsine, ki jo je spremenil Didier

Ta tehnika je priporočljiva za analizo vzorcev blata v iskanju kokcidijev in sporov Microsporidium sp ob istem času. Postopek, ki ga je treba slediti, je naslednji:

  • Smear pokrijte s Fenicado Fuchsina iz Kinyouna 10 minut.
  • Odstranite barvilo in sperite z destilirano vodo.
  • Okrasite 30 sekund z alkoholom s klorovodikovo kislino.
  • Spet operemo z destilirano vodo.
  • Razmaz pokrijte s trihromsko raztopino 30 minut pri 37 ° C.
  • Operite z destilirano vodo.
  • Okrasite 10 sekund z alkoholom ocetne kisline.
  • Vonj operemo 30 sekund z 95% etanolom.

QA

Kot pozitiven nadzor se razmaza pripravi s sevi Mycobacterium tuberculosis in barvimo z reagenti, pripravljenimi za preverjanje, ali bakterije vzamejo pravo barvo (rdeča-fucsia).

Lahko vam služi: gameToogenesis

Negativne kontrole lahko uporabimo tudi s pripravo razmaza s katerim koli sevom, ki ni odporna na alkoholno kislino, s čimer preverite, ali celoten vzorec prevzame kontrastno barvo.

Kinyoun tehnika v primerjavi s tehniko Ziehl-Neelsen

Kinyounova tehnika je preprostejša, saj odpravlja prehod ogrevanja, njegova glavna prednost pa je, da se izogne ​​emisiji hlapov, zelo strupenih in povzroča dolgoročni rak. Zato je obarvanje Kinyouna varnejše za osebje, zadolženo za obarvanje.

Pomembno je upoštevati, da morate biti previdni, da reagenti ne pridejo v neposreden stik s kožo, saj so jedke in razbarva.

Kar zadeva slabosti, negativni razmaz ne pomeni nujno, da mikroorganizem ni. Poleg tega lahko prisotnost celičnega detritusa povzroči lažne pozitivne rezultate, kar pri diagnozi povzroči zmedo.

Sklic

  1. Uporabna klinična kemija. KINYOON KIT. Cromakit si je opomogel.je.
  2. Orozco-Erico, m. Obarvanje kinyoun in dva kokcidija v HIV. MD Medical Magazine. 
  3. Forbes, b., Sahm, d., Weissfeld, a. Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. Pan -ameriški uredništvo s.Do.