Značilnosti obarvanja s hematoksilinom-eozinom, uporabe, tehnike

The Obarvanje s hematoksilinom - eozin To je obarvalna tehnika, ki uporablja kombinacijo barvil hematoksilina in eozina. Ta par barvil je popoln duo, saj hematoksilin deluje kot osnovno barvilo, eozin.

Oznaka osnovnih ali kislih barvil se ne nanaša na pH, ki ga dobijo v raztopini, temveč govori o deležu, ki prevladuje v smislu anionskih ali kationskih obremenitev, ki jih imajo, ali z lokacijo kromofora.

Cilindrični epitelij, obarvan s hematoksilinom - eosin (He) vir: Todd Straus in Vladimir Osipov [CC by 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licence/by/3.0)]

V tem smislu hematoksilin velja za osnovno (kationsko) barvilo in ima zato afiniteto do kislinskih struktur, kot je jedro celic. Medtem ko je eozin kislo (anionsko) barvilo, ima afiniteto do alkalnih ali osnovnih struktur, kot je celična citoplazma.

Zaradi tega se ta kombinacija barvil pogosto uporablja za obarvanje. Jedra so barvana temno modra ali vijolična in roza citoplazma.

Obarvanje s hematoksilinom-eozinom je ena najbolj uporabljenih tehnik barvanja na področju histologije in citologije zaradi lahkega ravnanja in nizkih stroškov. Uporablja se za vizualizacijo celic, debelih živčnih vlaken in prisotnost nekaterih tkivnih mikroorganizmov, kot so: zajedavci, glive in bakterije.

[TOC]

Značilnosti

Hematoksilin

Hematoksilin je nevtralno barvilo. Vendar je komponenta, ki zagotavlja barvo (kromoforo), nameščena v kationskem ali osnovnem središču molekule. Od tod tudi njena afiniteta do kislih struktur. Njegova kemična formula je c₁₆H₁₄Tudi₆ in njegovo znanstveno ime 7.11b-dihidroindeno [2,1-c] Chromene-3, 4.6a, 9,10 (6H) -Pentol.

Ohranite centre celic predvsem, saj so te zelo bogate z nukleinskimi kislinami. Prav tako lahko barvate citoplazemske vključitve virusnega izvora.

Tako da mora biti hematoksilin barvanje v oksidiranem stanju in pritrjen na kovino. Slednji bo služil za ogled tkanine, to je, da bo deloval kot mordant.

Ko se hematoksilin oksidira, se imenuje hematein. Oksidacija dosežemo z izpostavljenostjo kisiku (staranju) reagenta ali s snovmi, ki pomagajo njeni oksidaciji (kemična oksidacija).

Lahko vam služi: metode ločevanja heterogenih mešanic

Eosina

Eosina je barvilo rdeče ali roza. V vodi je netopna, čeprav obstaja hidrosolutna različica. Na splošno Eosina pripravlja raztapljanje alkohola (etanol pri 95).

Citoplazme, mišična vlakna, citoplazemske organele in kolagen, vendar ne barvajte celičnih centrov. To je zato, ker je negativno nabito, zato ima naklonjenost pozitivno obremenjenemu strukture.

Obstajata dve vrsti Eosine "Y" in "B". Eosina "y" je znana kot rumena eosina. Njegovo znanstveno ime je tetrabrome fl uorescein in njegova kemična formula je c_dvajsetH₈Br₄Tudi₅.

Po drugi strani se eosin "b" včasih imenuje modrikasto eritrozin B. Njegovo znanstveno ime je dibromodinitro fl uorescein in formula je c_dvajsetH₈Br₂N₂Tudi₉. Oba sta zelo podobna in razlika pri uporabi enega ali drugega v resnici ni opazna. Vendar je najbolj priljubljena Eosina "y".

Eosin ima lastnost razlikovanja med živo in mrtvo celico, ker je sposobna prečkati membrano, da barvanje citoplazme, ko so celice mrtve, in pusti citoplazmo brezbarvne celice, če ostane živa.

Prijave

Obarvanje živčnih vlaken

S hematoksilinom-eozinom je mogoče barvati debela živčna vlakna. Vendar ni koristno obarvati tankih živčnih vlaken, saj je za vizualizacijo slednje potrebno srebrno obarvanost.

Tinije histoloških kož

V obarvah roženice kože je barvilo, ki deluje, eozin, saj na tej ravni celice nimajo jedra.

V zrnlozni plasti kože hematoksilin močno obarva keratohialinske zrnce, ki jih najdemo znotraj zrnatih celic. Nasprotno, trni plast kože je šibko pobarvana s hematoksilinom, medtem ko je bazalna ali zarodna plast, če je precej obarvana.

Eozin obarva citoplazmo vseh celic in intenzivnost barve se lahko razlikuje med enim in drugim plastjo.

Obarvanje s hematoksilinom-eozinom

Gómez in sodelavci so leta 2005 dokazali, da je obarvanje s hematoksilinom -eozinom učinkovitejše pri prepoznavanju primerov amibiaze z Entamoeba histolytica in Entamoeba različna da je metoda sveže vizualizacije (fiziološka raztopina in lugola) pri bolnikih z akutno drisko.

Vam lahko služi: sekundarni alkohol: kaj je, struktura, lastnosti, uporabe

Dokazano je bilo tudi, da ima veliko občutljivost za odkrivanje eritrofagocitoze (amoebe, ki imajo eritrocite fagocitov).

Obarvanje histoloških rezov za diagnozo okužbe

Walwyn in sodelavci so leta 2004 predlagali uporabo histološkega obarvanja za odkrivanje mikroorganizmov, ki povzročajo okužbe.

Z barvanjem hematoksilin-eozina je uspelo vizualizirati okužbe, ki jih povzroča Clostridium, Actinomyces, Spirilno oz Candida. Uspeli so tudi opazovati prisotnost parazita Sarcoptes escabiei V usnjenih rezih in virusnih vključkih citomegalovirusa in herpesa v rezih različnih tkiv.

Tehnike

Za histološke vzorce

Obarvanje histoloških rezov gre skozi vrsto korakov. Prvo je pridobiti histološko rezanje. To je treba parafinirati in nato pridobiti reze (ultra-fin) z mikrotomom. Tehnika je sestavljena iz naslednjih korakov:

1 malmacija presežka parafina: Xilol ali hemo -D lahko uporabite, potopite 3-5 minut.

2-relief vzorca: To dosežemo s potop vzorca v različne koncentracije alkoholov (etanol) v padajočem vrstnem redu (100 °, 90 °, 70 °). V vseh primerih za 7 minut.

3-eliminacija odvečnega alkohola: Za to je 7 minut potopljen v vodo.

4-nabiranje s hematoksilinom: Vzorec je potopljen 6-10 minut na pladenj, ki vsebuje hematoksilin. Čas osvetlitve je odvisen od velikosti in debeline vzorca.

5-eliminacija presežka hematoksilina: Vodo smo sprali 5 minut, nato pa hitri prehod (10-20 sekund) izdelamo s kislim alkoholom. Nato 5 minut spet opran z vodo. Nato potopljen v etanol pri 96 ° na 1 minuto.

6-barvanje z Eosino: Če želite to narediti, je vzorec 5 minut v pladenj Eosina potopljen.

7-desedracija vzorca: Da bi to naredili, se alkoholni pladnji (etanol) ponovno prenesejo, vendar tokrat v naraščajočem vrstnem redu. (70 °, 90 °, 100 °). (5 sekund, 5 sekund, 1 minuta).

8-vzorčna pojasnila: Ta je izpostavljena Xylolu 5-10 minut in se posuši, da se trajno tesnjuje s kanadskim balzamom ali drugim podobnim materialom.

Za vzorce blata v iskanju In. Histolytica

V lameli, ki je podaljšana s pacientovim blatom in je 5 minut pritrjena z 80% alkohola. List je 5 minut potopljen v hematoksilin in se takoj spran z vodo.

Vam lahko služi: prispevki od kemije do medicine

Nato se hitro potopi v kisli alkohol in nato v amonialno vodo. Operite z vodo. V Eosini je obarvan 5 minut. Vzorec je dehidriran, kot je razloženo v prejšnji tehniki, in na koncu razjasnjen s Xileno.

Priprava reagenta

- Hematoksilin

V litru destilirane vode raztopimo 50 gramov kalija ali amonijevega aluminijevega sulfata. Ko ste popolnoma raztopljeni, dodajte 1 gram kristaliziranega hematoksilina. Pri raztapljanju v celoti dodamo 1 GR citronske kisline skupaj s 50 gr kloralnim hidratom in 0,2 gr natrijevega jodina.

Zmes kuhamo 5 minut, nato pa se pusti, da se ohladi in filtrira, da odpravi trdne delce, ki so ostali. Tako pripravljen reagent lahko takoj uporabimo.

- Eosina

Pripravimo ga lahko z alkoholno ali vodno bazo.

Alkoholni eozin

V 100 ml etanola pri 95 ° raztopi 0,5 grama eosine "y". Nato dodajte nekaj kapljic ledene ocetne kisline.

2% vodni eozin

V 1250 ml destilirane vode raztopite 25 gramov eosina "y" hidrosolucijskega. Nato dodajte nekaj kapljic ledene ocetne kisline.

Kisli alkohol

Izmerite 0,5 ml koncentrirane klorovodikove kisline in dopolnite 100 ml z absolutnim alkoholom.

Amoniakalna voda

Izmeri 0.5 ml koncentriranega amoniaka in dopolnjenih 100 ml z destilirano vodo.

Reference

1. Navarrete, g. Kožna histologija. Rev FAC MED UNAM 2003; 46 (4): 130-133. Na voljo na: Medigrafski.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela ali.
3. Identifikacija Entamoeba histolytica/e. neskladno Za svežo tehniko Amibe v primerjavi z obarvanjem s hematoksinom-eozinom v akutni driski. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Na voljo na: Medigrafski.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Uporabnost histoloških tehnik za diagnozo okužbe v anatomskih delih. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Na voljo na: Scielo.Sld
5. Panreac applichem itw ponovno. Obarvanje s hematoksilinom-eozinom. 2017, Španija. Na voljo na: itwreagns.com
6. "Eosina." Wikipedia, brezplačna enciklopedija. 7. november 2018, 08:18 UTC. 4. 2019, 22:13 je.Wikipedija.org
7. "Hematoksilin." Wikipedia, brezplačna enciklopedija. Maj 2019, 11:23 UTC. 4. 2019, 22:48 Wikipedia.org