Testna fundacija Catalase, tehnika in uporabe

The Katalaza To je metodologija, ki se v laboratorijih za bakteriologije poudari za poudarjanje prisotnosti encimske katalaze pri tistih bakterijah, ki jo imajo. Gramova obarvanost so glavni testi, ki jih je treba izvesti na sveže izoliranih mikroorganizmih. Ti testi vodijo mikrobiologa na korakih, ki jih je treba slediti za dokončno identifikacijo zadevnega mikroorganizma.

Na splošno imajo bakterije, ki vsebujejo citokrom. Vendar obstajajo izjeme, na primer Streptococcus, ki kljub neobvezni anaerobni mikroorganizmi nimajo encima katalaze.

Izvedba testa katalaze, ki kaže pozitivno reakcijo. Vir: Noben strojno berljiv avtor. Nase je domneval (na podlagi zahtevkov za avtorske pravice). [CC BY-SA 3.0 (http: // creativeCommons.Org/licence/by-sa/3.0/]]

Zato se test katalaze uporablja predvsem za razlikovanje Staphylococaee in Micrococaceae (obe pozitivni katalazi) družine Streptococaee (negativna katalaza) (negativna katalaza).

Prav tako se rod Bacillus (pozitivna katalaza) med drugim razlikuje od rodu Clostridium (negativna katalaza).

[TOC]

Osnova

Katalaza je encim, razvrščen kot hidroperoksidaza, to pomeni, da vodikov peroksid uporabljajo kot substrat (H₂Tudi₂).

Šteje se tudi za oksidoreduktazo, saj v reakciji, kjer obstaja element, ki služi kot darovalec elektronov (reduciranje snovi), drugi pa kot sprejemnik elektronov (oksidacijska snov).

Katalaza je protein, ki vsebuje prostorično skupino s štirimi trivalentnimi atomi železa (vera⁺⁺⁺), zato gre za homoprotein. Železov ion ostane oksidiran med reakcijo.

Lahko rečemo, da je katalaza razstrupljevalni encim, saj je njegova funkcija odpraviti snovi, ki se pojavijo med presnovo bakterij, ki so strupene za bakterije. Med temi snovmi je vodikov peroksid.

Vodikov peroksid nastane iz razgradnje sladkorjev z aerobiko. Ta postopek se zgodi na naslednji način:

Superoksidni ion (ali₂^-) (Prosti radikal) nastane kot končni produkt asimilacije glukoze z aerobno cesto. To je strupeno in ga izloči encimsko superoksid dismutaza, ki jo pretvori v plinasti kisik in vodikov peroksid.

Lahko vam služi: Holdridge Life cone: Kaj je v Latinski Ameriki

Vodikov peroksid je strupen tudi za bakterije in ga je treba odpraviti. Katalazni encim odvije vodikov peroksid v vodi in kisiku.

Katalaza lahko deluje na druge substrate, razen vodikovega peroksida, kot so alkoholi, aldehidi, kisline, aromatični amini in fenoli. Vendar pa lahko vodikov peroksid uporabi tudi katalazo za oksidacijo drugih strupenih spojin, kot sta metil in etilni alkohol.

Prav tako je katalaza prisotna v fagocitnih celicah, ki jo ščiti pred strupenim delovanjem vodikovega peroksida.

Rutinska tehnika za test katalaze

-Metoda v diapozitivu

Materiali

3% vodikov peroksid (10 zvezkov).

Prenosna lamina

Plastični ročaj za enkratno uporabo ali lesena palica.

Postopek

Vzemite dovolj zneska iz kolonije, da se učite, ne da bi se dotaknili agarja, od katerega prihaja. Kolonija mora biti sveža, torej od pridelkov od 18 do 24 ur.

Kolonijo položite na suho držalo in nanjo dodajte kapljico 3% vodikovega peroksida (lahko uporabite tudi H₂Tudi₂ pri 30%). Takoj opazujte, ali so mehurčki odpravljeni ali ne.

Interpretacija

Pozitivna reakcija: odvajanje plina, kar je očitno s tvorbo mehurčkov (močan mehurček).

Negativna reakcija: ni tvorbe mehurčkov.

-Neposredna metoda v čisti kulturi

Postavite 1 ml h₂Tudi₂ 3% na čistem pridelku v ploščah ali klinih, ki ne vsebujejo krvi (po možnosti hranljiv oprijem). Upoštevajte, ali takoj nastane mehurček ali ne. Lahko uporabite tudi h₂Tudi₂ 30%.

Razlaga se tako kot metoda imetnika predmeta.

-Metoda s kapilarno ali glivo in petriško cevjo

Napolnite 67 mm kapilarno cev na višini 20 mm s 3% vodikovim peroksidom na kapilaro.

Dotaknite se izolirane kolonije, ki jo želite študirati s kapilarno polno h₂Tudi₂ 3%_. Upoštevajte, če je kapilarna napolnjena z mehurčki v približno 10 sekundah. Ta metoda omogoča polkvalifikacijo reakcije na križih:

Brez križev ni mehurčkov (negativna reakcija).

Vam lahko služi: flora in favna na Falklandskih otokih: izjemne vrste

+ --Omejeni mehurčki (šibka ali zapoznela reakcija).

++ -Obilni mehurčki (zmerna reakcija).

+++ -Mehurčki dosežejo nasprotni konec (energična reakcija).

-Metoda Taylor in Achanzar za teste katalaze, ki dvomijo

V čistem in suhem diapozitivu je postavil izolirano kolonijo, nato pa kapljico h postavite₂Tudi₂ 0,5% in pokrijte s pokrovi. Upoštevajte, ali obstaja zaprti mehurčki ali ne.

Interpretacija: Prisotnost mehurčkov kaže na pozitivno reakcijo. Brez mehurčkov se razlaga kot negativna reakcija.

Katalazni test za vrste Mycobacterium

To tehniko je treba izvesti z nadzorom pH in temperature. Izvajati ga je treba pod zvoncem laminarnega pretoka, saj je manipulacija različnih vrst Mycobacterium nevarna.

-Materiali

30% ali 110 volumski vodikov peroksid (superoksal).

Fosfatni pufer pH 7

Med 80 do 10%

Mycobacterium kultura v klinu od 3 do 4 tedne

-Priprava od reagenti

Fosfatni pufer pH 7

Tehtanje:

1.361 g (kh₂Po₄) Anhidra.

1,420 g (NA2HPO3) Dysodic fosfat brezvoljno.

Obe soli raztopite v malo sterilni destilirani vodi in skupaj z vodo do 1000 ml.

Med 80 do 10%

Izvedite redčenje 1:10 na Tween 80, ki je komercialno koncentriran, da se bo to nadaljevalo na naslednji način:

Vzemite 1 ml Tween 80 in ga položite v malo destilirano vodo, se raztopite in nato dopolnite z vodo do 10 ml.

Končni reagent

Mešajte količino fosfatnega pufra s količino med 80 do 10% (v enakih delih). V laboratoriju določite, koliko želite pripraviti.

-Postopek

Postavite 5 ml fosfatnega pufra v sterilno epruveto s pokrovom navoja (Baquelita).

Z ročajem inokulacije vzemite dovolj kolonije rasti Mycobacterium, posejane v klini in se raztopite v fosfatnem puferju.

Pokrijte cev, ne da bi pritegnili nit. Postavite v kopalnico pri 68 ° C 20 do 30 minut. Vzemite in ohladite pri 22-25 ° C

Izmerite 0,5 ml končnega reagenta (zmes) in ga dodajte v cev s hladno raztopino. Opazujte ali ne nastajanje mehurčkov.

Razlaga se in prejšnje tehnike.

Uporaba

Ko dobimo rast kolonij v obogatenih medijih, je treba obarvati gram in katalazni test. To bo vodilo mikrobiologa o postopkih, ki jih je treba upoštevati za dokončno identifikacijo.

Vam lahko služi: preprost ravni epitelij: značilnosti, funkcije in vrste Vir: Pripravil avtor MSC. Marielsa Gil

 QA

Za oceno pravilnega delovanja reagenta vodikovega peroksida uporabite sveže gojene kontrole, kot so zlati stafilokok kot pozitiven nadzor in sevi Streptococcus sp kot negativni nadzor.

Druga alternativa, ki služi kot pozitiven nadzor, je, da kapljica vodikovega peroksida postavi na krvni agar, eritrociti imajo katalazo, zato bo prišlo do mehurčka, če bo reagent v dobrem stanju.

Čokoladni agar lahko uporabite kot negativno kontrolo, tukaj so eritrociti že navedeni in test daje negativno.

Omejitve

-Ne uporabljajte starih pridelkov za test, saj lahko to povzroči lažne negativne.

-Izogibajte se jemanju kolonij iz pridelkov v krvnem agarju, če se pazite, da se ne dotaknete agarja; Ta postopek lahko povzroči lažne pozitivne rezultate, saj eritrociti vsebujejo katalazo.

-Če jemljete kolonijo s platinasto ročajem, ne vložite vrstnega reda postopka, ker lahko to ustvari lažne pozitivne rezultate. To je zato, ker je platina sposobna reagirati z vodikovim peroksidom, ki izvira iz mehurčka.

-Ne uporabljajte reagenta vodikovega peroksida, če je zelo star, saj je reagent zelo nestabilen in se sčasoma pokvari.

-Reagent vodikovega peroksida naj bo zaščiten pred svetlobo in hladilnikom, da preprečite poškodbe.

-Izvedite nadzor kakovosti v reagentu vodikovega peroksida vsakič, ko se uporablja.

-Upoštevajte, da če se uporablja H₂Tudi₂ Pri 30% so reakcije močnejše od tistih, ki se izvajajo s h₂Tudi₂ 3%.

Reference

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testi za identifikacijo bakterij kliničnega pomena. 3. izd. Pan -ameriški uvodnik. Buenos Aires. Argentina.
4. BD laboratoriji. Katalazni reagent. Dostopno na: http: // winklerltda.Cl
5. Vadequímica Laboratories. Vodikov peroksid. Enakovrednost med količino in odstotkom. Na voljo na: vadequimica.com