Sim Fundacija, priprava in uporaba

On SIM medij Gre za pol -soliden in diferencialni agar, posebej zasnovan za pomoč pri identifikaciji nekaterih bakterij, predvsem iz družine Enterobacteriaceae. Sestavljen je iz tripteina, peptona, železovega sulfata, amonijevega sulfata, natrijevega tiosulfata in agarja.

Ta medij omogoča izvedbo treh pomembnih testov: proizvodnja vodikovega sulfida (H₂S), nastajanje indola in gibljivosti, od tam prihaja akronim sim. Zaradi svoje velike uporabnosti ga v laboratoriju za bakteriologijo ne more manjkati.

Do. Srednja reklama SIM B. SIM H2S (-), Indol (-) in gibljivost (+) in SIM H2S (+), Indol (-), preskus gibljivosti (+). Vir: a. Fotografija, ki jo je posnel avtor MSC. Marielsa Gil b. Mfloayza [cc by-sa 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licence/by-sa/3.0)]

Za razliko od drugih medijev mora biti to pol -solidno, da odkrije sposobnost gibanja, ki jo imajo nekatere bakterije. V tem smislu ta test deluje zelo dobro za enterobakterije, vendar ne za nefermentarno negativne bacile, kjer so raje druge metode, kot je na primer čakajoča kapljica.

SIM medij omogoča razlikovanje določenih posebnih lastnosti, ki označujejo nekatere bakterije glede na druge. Na primer Escherichia coli se odlikuje s tem, da je h₂S (-), indol (+) in gibljivost (+), medtem ko Proteus mirabilis to je h₂S (+), indol (-), gibljivost (+).

[TOC]

Osnova

To je kultura pomeni, da veljajo za različno, saj njegova uporaba uspe razlikovati med mikroorganizmi, ki lahko proizvajajo vodikov sulfid od tistih, ki tega ne storijo; Poudarja tudi tiste, ki tvorijo Indola iz triptofana iz tistih, ki se ne tvorijo, in na koncu razlikuje gibljive bakterije od nepremičnin.

Vir energije

Kot kakršna koli kulturna sredstva ima tudi elemente, ki zagotavljajo potrebna hranila, tako da se lahko razvijejo mikroorganizmi, ki se lahko razvijejo. Te elemente predstavljata peptone in Triptein.

Razvoj mikroorganizma v okolju je bistven za opazovanje prisotnosti ali odsotnosti značilnosti, ki jih to pomeni.

Proizvodnja vodikovega sulfida

Pismo a kratice SIM se nanaša na proizvodnjo vodikovega sulfida (h₂S). Bakterije, ki lahko tvorijo vodikov sulfid, bodo vzele natrijev sulfat.

Vam lahko služi: intra -specifično konkurenco: značilnosti, vrste in primeri

Ko je H oblikovan₂S -GAS BREZPLAČNO -to reagira z železno soljo, ki je prisotna na sredini, ki tvori železov sulfid, jasno viden (črna oborina). Bakterije, ki ne tvorijo h₂S, pustite originalni barvni medij (bež).

Prisotnost črne oborine lahko ovira razlago gibljivosti. Vendar je znano, da večina enterobakterij, ki proizvajajo HT₂S so pozitivna gibljivost, kot so Salmonella, Proteus in Citrobacter. Poleg tega črna oborina, ki pokriva skoraj celoten medij, kaže na pozitivno gibljivost.

Indol tvorba

Druga črka kratice SIM je "i", ki predstavlja tvorbo Indola.

V tem smislu triptein poleg tega, da je vir hranil, izpolnjuje drugo temeljno funkcijo. Ta pepton je bogat z aminokislino, imenovano triptofan, zato lahko pokaže bakterije, ki proizvajajo triptofanazo.

Ta encim je zadolžen za clivar do triptofanske aminokisline, s posledično tvorbo indola (brezbarvna snov), piruvične kisline in amonij.

Zato je za prikaz te reakcije potrebno. Nobena od obeh reagira z Indolom in tvori obroč v obliki rdečega fucsije na površini agarja. Če se pojavi barvni obroč Fuchsia, se Indol test razlaga kot pozitiven.

Bakterije, ki nimajo tega encima, ne bodo tvorili obroča in se razlagajo kot negativni indolni test.

Pomembno je opozoriti, da mora biti dokaz Indola zadnji, ki ga je treba razlagati, saj ko se reagent doda, medij ovira vizualizacijo gibljivosti.

Gibljivost

Končno črka "m" besede sim pomeni gibljivost. Da bi ocenili gibljivost, je ta medij strateško napol trden, saj je ta lastnost bistvenega pomena za opazovanje, ali obstaja gibanje bakterij ali ne. Bakterije, ki imajo flagele, so tiste, ki dajejo ta pozitiven test.

Vam lahko služi: t limfociti: struktura, funkcije, vrste, zorenje

Pozitiven test bo dokazan, ko opazimo motnost, tako v začetnem inokulumu kot tudi okoli tega. Medtem ko se ne -mobilne bakterije razvijejo le na začetnem potovanju po inokulumu.

Priprava

SIM medij

Tehtamo 30 gr dehidriranega medija in se raztopimo v litru destilirane vode. Zmes pustimo v mirovanju 5 minut in se nato segrevamo, dokler ne vremo, pogosto mešamo, dokler ni popolno raztapljanje.

Mešanico v epruvetah razdelite z bombažnim pokrovom in avtoklavacijo pri 121 ° C 15 minut. Odstranite stojalo avtoklaviranih cevi in ​​pustite, da se strdi v navpičnem položaju, tako da je medij v obliki taco.

Za ohranitev se shrani v hladilniku do njegove uporabe. Pripravljeni medij mora imeti končni pH 7,3 ± 0,2.

Pri inokuliranju medija mora biti to pri sobni temperaturi. Barva medija je bež.

Kovacov reagent

Izmerite 150 ml amila ali izoamilnega ali butilnega alkohola. (Uporabite enega od treh omenjenih).

Raztopimo 10 gr od p-dimetilaminobenzaldehida. Nato počasi dodajte 50 ml koncentrirane klorovodikove kisline.

Reagent, pripravljen za uporabo. Hraniti ga je treba v jantarni steklenici in shranjeni v hladilniku. Ne uporabljajte, če vzamete temno rjavo barvo; To kaže, da je poškodovan. Ta reagent je prednostna, ko gre za enterobakterije.

Erlich reagent

Tehtamo 2 GR p-dimetilaminobenzaldehida in se raztopimo v 190 ml absolutnega etilnega alkohola in počasi mešamo s 40 ml koncentrirane klorovodikove kisline. Kovacov reagent hranite na enak način. Ehrlichov reagent se bolj uporablja za nefermentacijo in anaerobne bakterije.

Prijave

SIM medij se zelo uporablja v bakterioloških laboratorijih. Kot prednost ima, da lahko pri identifikaciji enterobakterij opazimo tri bistvene značilnosti.

Vam lahko služi: ocetna fermentacija: značilnosti, aplikacije, primeri

Posejan

Pravi način za posejanje tega medija je uporaba igle, s katero se del čiste kolonije za preučevanje vzame in vstavi v sredino medija navpično. Opraviti je treba eno samo lunge. Preboj ne sme doseči dna cevi, prava stvar je, da pokrijeta le dve tretji osebi.

Ni priporočljivo ponoviti inokuluma, saj lahko to izvaja lažne interpretacije pozitivne gibljivosti. Inokulirani medij inkubiramo v aerobiozi pri 37 ° C 24 ur.

Ko je čas konec, je opaziti, ali je prišlo do proizvodnje H ali ne₂S in preberite gibljivost. Končno se razkrije Indol in doda 3 do 4 kapljice reagenta Ehrlicha ali Kovaca, nežno mešane in razlagane.

Vir: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.

QA

Kot nadzor sterilnosti se inkubirata ena ali dve cevi brez inokuliranja v 37 ° C na 24 ur. Pričakuje se, da po tem času ne pride do spremembe ali spremembe barve.

Kot nadzor kakovosti lahko uporabite certificirane znane seve, kot so: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella tiphimurium ATCC 14028, Shigella Sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Pričakovani rezultati so: Escherichia coli H₂S Negativna, indol in pozitivna gibljivost, Enterobacter aerogenes samo pozitivna gibljivost, Salmonella tiphimurium H₂S in pozitivno gibljivost, z negativnim indolom. Proteus vulgaris Vse pozitivno, dokler Klebsiella pneumoniae in Shigella Sonnei Vse negativno.

Omejitve

-Nekaj ​​sevov Morganella Morganii, Med drugimi sevi lahko v tem mediju proizvedejo rjavkast pigment zaradi proizvodnje melanina, tega ne smete zamenjati s oborino železovega sulfida. Pri neizkušenih strokovnjakih lahko ta položaj ustvari lažne pozitivne rezultate pri razlagi H testa₂S.

-Stroge aerobne bakterije bodo rasle le na površini cevi, kar ovira interpretacija gibljivosti.

Reference

1. BD laboratoriji. Bbl sim medum. 2008. Na voljo na: BD.com
2. Neogen laboratoriji. Sim medum. Na voljo na: FoodSafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. Sim medum. 2009. Dostopno na: http: // f-soria.je
4. Laboratorij Brizuela-laboratorij.  Povprečni sim. Na voljo v: .Brizuela-lab.com
5. Britanski laboratoriji. Povprečni sim. 2015. Na voljo na: studires.Je/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.