Zgodovina, značilnosti Neubauer Camera, uporabe

The Neubauer kamera, Heatimeter ali hehocitometer je laboratorijski instrument, ki je sestavljen iz posebne steklene plošče. Ta komora služi za izvajanje nekaterih vrst celic, kot so rdeče krvne celice, bele krvne celice in trombociti, čeprav jo lahko uporabimo za štetje sporov, sperme, zajedavcev itd.

Predstavlja zelo posebne značilnosti, saj je sestavljen iz 3 cone, osrednjega za štetje in dve podportni coni. Vsaka kamera ima dve odšteti področja ali mrežice, eno na vrhu in eno na dnu.

Neubauer kamera. Vir: Santibadia [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licence/by-sa/4.0)]. Urejena slika.

Te imajo več oddelkov v obliki mreže. Območja za štetje so srednje škatle, ki jih najdemo v štirih vogalih obeh mrežic, in osrednji kvadrat.

Sklop kamere je treba opraviti zelo previdno, saj vsaka podrobnost vpliva na število celic. Obstaja veliko napak, ki jih je mogoče storiti, toda če se kdo od njih zgodi, je treba kamero razstaviti, čistiti in ponovno sestavljati. Med glavnimi napakami je mogoče omeniti naslednje:

ODBORI fotoaparat ali naredite nezadostno nadev, pustite, da se kamera posuši, poskusite odstraniti odvečno tekočino z gazo, nagibajte kamero tako. Vse te napake bodo povzročile neresnično vrednost.

[TOC]

Zgodovina

Neubauerjeva kamera je natančni instrument, v proizvodnem procesu pa skozi strog nadzor kakovosti. Ustvarjen je bil za natančne delce ali oblike z mm³, na primer celice v različnih tekočinah. Njegova nežna grafika je vklesana z diamantnim svinčnikom.

Značilnosti neubauerske komore

Celotna kamera je velikost običajnega diapozitiva, tako da ga je mogoče postaviti na mikroskopsko ploščo.

Kamera je sestavljena iz treh osrednjih pravokotnih površin (a, b, c). V coni "B" se nahaja R ali štetje cona, imenovano tudi reticulum. Po enega na vsaki strani kamere, ločeno z območjem "D".

Grafična shema kamere Neubauer. Vir: Vodnik za praktično hematologijo. Šola za bioanalizo Univerze v Carabobu, Venezuela.

Vsak retikulum je polirano območje, ki vsebuje vgravirano območje prispevka. Sestavljen je iz kvadrata s površino 9 mm² In notranje je razdeljen na 9 slik z 1 mm² površina. Štirje vogali so razdeljeni na 16 manjših omrežij (0.0625 mm² Površine).

Te mreže tvorijo niz milimetrskih črt, ki se med seboj sekajo, ki predstavljajo odlično grafične omrežja in omejeni na določene ukrepe. Te vrstice so bile zabeležene z diamantnim konico.

Izboljšan Neubauer Reticulum. Vir: Vodnik za praktično hematologijo šole za bioanalizo Univerze v Carabobu, Venezuela.

Štiri strani ustrezajo območju štetja. Na teh straneh ali vogalih je opravljen račun večine celic (rdečih krvnih celic in levkocitov), ​​medtem ko se trombociti štejejo na osrednjem območju.

Vam lahko služi: malahit zelena: značilnosti, priprava, aplikacije, strupenost

Osrednja cona ima več delitev, sestavljen iz 1 mm kvadrata² Razdeljeno na 25 slik, ki imajo površino 0,04 mm² vsak. Te so razdeljene na 16 mrež s površino 0,0025 mm².

Opis izboljšanega Neubauer Reticulum. a) kvadrat vogalov, b) osrednji kvadrat, c) srednja kvadrat osrednjega kvadrata. Vir: Vodnik za praktično hematologijo šole za bioanalizo Univerze v Carabobu, Venezuela.

Območje "A" in "C" služi kot podpora za postavitev posebnih objektov, ki se imenujejo hematimetrična lamela ali hematimetrski pokrovi.

Višina med lamelico in štetsko površino je 0,1 mm. Površinski ukrepi štetja, pa tudi višina kamere in redčenje vzorca, so potrebni podatki za izvedbo končnih izračunov.

Prijave

Uporablja se za število celic. Zlasti je v veliko pomoč na območju hematologije, saj omogoča izdelavo 3 serije krvnih celic; to je rdeče krvne celice, bele krvne celice in trombociti.

Vendar se lahko uporablja na drugih območjih, na primer za štetje sperme, spor, bakterij ali drugih pomembnih elementov, odvisno od vrste vzorca.

Kako se uporablja?

Priprava vzorca

Za izvedbo števila celic se običajno začne iz prejšnje redčenja. Primer: Če preštejem bele krvne celice, se s turško tekočino pripravi redčenje 1:20. Razredčenje je dobro mešano, preden nalagamo pipeto in nastavite kamero Neubauer.

Obstajajo priložnosti, ko redčenje 1:20 ni dovolj. Na primer pri bolnikih, ki trpijo zaradi nekaterih vrst kroničnih levkemij. V teh primerih je treba izdelati večja redčenja kot 1: 100.

Če je nasprotno, je račun zelo nizek, tako kot v hudih levkopenijah, lahko naredite manjša razredčila za koncentracijo vzorca. Primer: lahko razredčite 1:10.

Spremembe, ki so nastale, vplivajo na izračune.

Sestavljanje neubauerjeve komore

Neubauerjeva komora je sestavljena z namestitvijo hematimetrične lamele v osrednji coni. Oba morata biti zelo čista in suha. Za postavitev lamele jo prevzamejo robovi in ​​nežno padejo na kamero.

To se napolni tako, da konico samodejne pipete ali Thoma pipete pod kotom 35 ° na robu območja tovora. Tekočina se nežno odvaja in območje nalaganja napolni kapilaro. To se naredi na obeh straneh za nalaganje obeh mrežic.

Nobenih mrež ne smete preobremeniti in tekočine ne smete zanikati. Obremenitev mora biti natančna. Pomembno je, da se nadev izvaja homogeno, to je, da ne bi smelo biti mehurčkov.

Ko je kamera 2 minuti nastavljena v mirovanju, da se celice oborijo v ozadju, njegova vizualizacija in štetje pa je lažje.

Po preostalem času je nameščen na svetlobnem mikroskopu za opazovanje. Najprej se osredotoči z 10 -kratnim ciljem in če je potrebno, se prenese na 40x.

Vam lahko služi: Gap anion

Za izboljšanje vizualizacije se mikroskopska luč zmanjša. Če želite to narediti, se kondenzator spusti in diafragma se malo zapre.

račun

Za prikaz belih krvnih celic ali levkocitov je treba prešteti celotno površino štirih srednjih kvadratov in osrednjega kvadrata vsakega retikuluma.

Število se začne v kvadratu zgornjega levega vogala. Začne se od prvega kvadrata sprednje vrstice, torej od leve proti desni.

Tam se spusti in videz se vrne od desne proti levi, dokler ne dosežete drugega konca in tako na celicah znotraj vsakega omrežja v obliki cikcaka. Šteje se 16 mrež vsake srednje trga.

Da se izognemo štetju celice dvakrat, obstajajo pravila na celicah, ki so nameščene na mejnih linijah vsake mreže. Celice, ki se nahajajo v levi in ​​zgornji črti, se štejejo in tiste, ki se nahajajo na desni in spodnji črti.

Na voljo mora biti ročni števec celic, tako da operater zatira ključ naprave tolikokrat kot opazovanje celic. Z uporabo računovodjo lahko operater šteje, ne da bi bilo treba pogledati iz mikroskopskega polja. Na koncu računa boste opazili skupno število štetih celic.

Izračuni

Za izračune lahko nadaljujete na več načinov. Lahko preštejete en retikulum ali oboje šteje in v povprečju obeh. V teh dveh situacijah je treba šteti celice pomnožiti s faktorjem, ki bi bil v tem primeru 40. In tako dobimo skupno število na mm³.

Če pa se štejeta obe mrežici in ni povprečnega, ga je treba pomnožiti z drugačnim dejavnikom, v tem primeru do 20.

-Faktor množenja

Nato se izračuna faktor množenja.

Za izračune se upošteva več podatkov, vključno z naslovom redčenja, višino komore in površino.

Redčenje

Razredčenje, ki se uporablja na standarden način, je 1:20 za število levkocitov.

Višina komore

Višina med kamero in hematimetrično lamino je 0,1 mm.

Prešteta površina

Če se šteje 5 kvadratov 1 mm² površina, to pomeni, da je skupni račun štetja 5 mm². Te podatke je treba pomnožiti z višino fotoaparata. To je 5 mm² x 0,1 mm = 0,5 mm³.

Formule in izračune

S podatki, ki so rečeni, je rečeno:

Če pri 0,5 mm³ -Šteje se ° celic

V 1 mm³ --bo - x število celic

X Cell N ° = (n ° celic Caled x 1) /0,5 mm³

Vendar je treba upoštevati tudi redčenje. Zato je formula naslednja:

(N ° štetih celic x 1) x 20/0,5 mm³

Končno, če povzamem, lahko pomnožite število celic, ki jih šteje 40. Tako dobimo vrednost levkocitov na mm³.

Vam lahko služi: osmoza: proces, vrste, razlike z difuzijo in primeri

Če se štejeta oba mreža, se podatki spremenijo, da bi v tem primeru znašali 10 kvadratov, torej 10 mm². In skupni glasnost 1 mm3. Formula bi ostala:

(N ° celic šteje x 1) x 20/1 mm³

Zato bi bil v tem primeru faktor množenja 20.

Napake

-Če je pri nalaganju kamere presežena ali presežena s tekočino, se višina kamere razlikuje. To ima za posledico štetje resničnega. Če poskusite odstraniti presežek z gazo ali bombažjem, to predstavlja napako. To dejanje bo celice koncentriralo in povečalo število.

-Če se slabo zaračuna, bo štetje pod resničnim.

-V primeru, da je kamera nameščena in izpuščena, števila ni več mogoče, ker bo predvajala napačne rezultate.

-Če pred nalaganjem kamere redčenje vzorca ni dobro mešano, obstaja tveganje za napako odčitavanja, saj celice ne bodo homogeno razporejene. Zato bo manj ali večja koncentracija celic, odvisno od tega, ali je vzorec odvzet s površine tekočine ali dna cevi.  

-Prisotnost mehurčkov zmanjšuje količino tekočine, ki mora vstopiti v mrežico, ki posega v pravilno vizualizacijo in porazdelitev celic. Vse to pomembno vpliva na rezultate.

-Med štetjem ne dvigajte mikroskopa, dokler se vsak velik kvadrat ne konča.

-Razlog za napako je, da se kamera pokloni po namestitvi. Zato morate previdno naložiti mikroskopsko ploščo.

Priporočilo

Če iz nekega razloga zaznate nepravilnost pri vložitvi kamere, je najbolj priporočljivo, da razstavite to pripravo, očistite kamero in sestavite iz nič.

Bodite zelo previdni pri čiščenju fotoaparata, da se izognete praskam mrežic. Po drugi strani ne pozabite, da je hematimetrična lamel nežna in krhka. Neustrezna manipulacija jo lahko zlomi.

Pred začetkom štetja se prepričajte, da so celice dobro razporejene. Neenakomerna porazdelitev celic se pojavi s slabo mešanico vzorca ali redčenja. Če se to zgodi, je treba sklop ponoviti.

Način vedenja, ali so celice dobro razporejene, primerja prikaz vsakega velikega kvadrata, število celic, ki jih šteje vsak kvadrat.

-Če bele krvne celice štejejo več kot 50.000 mm³ Priporočljivo je ponoviti račun in večje redčenje.

-Če spremeni redčenje, mora faktor množenja znova izračunati, saj to vpliva na formulo.

Reference

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Primerjava koncentracije semenčic z uporabo Maklerjeve kamere in Neubauerjeve kamere. Urol esp 2008; 32 (4): 443–445. Na voljo na: Scielo.
2. Neubauer kamera. (2018, 27. marec). Wikipedia, brezplačna enciklopedija. Datum posvetovanja: 04:10, 23. junij 2019 od ES.Wikipedija.org
3. Meneses a, rojas l, sifontes s. Uporaba alternativne metode štetja v Neubauerjevi komori za določitev koncentracije vaginalis trichomonas. Rev. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180–8. Na voljo na: ResearchGate.mreža
4. Gómez-Pérez Roald e. Analiza eksperimentalnega programa. Rev. Venez. Endocrinol. Metab.  2007; 5 (2): 19-20. Na voljo na: ve.Scielo
5. Praktični vodnik za hematologijo šole za bioanalizo Univerze v Carabobu. Venezuela.1998