Zgodovina citokemije, objekt študija, uporabnosti in tehnike

The Citokemija Vključuje vrsto tehnik, ki temeljijo na identifikaciji in razpolaganju nekaterih posebnih snovi znotraj celice. Velja za vejo celične biologije, ki združuje celično morfologijo s kemijsko strukturo.

Po besedah ​​Bensleyja, ustanovitelja uporabe sodobne citologije, izraža, da je namen citokemije odkriti kemijsko organizacijo celic, da bi razumeli skrivnosti življenja. Kot tudi preučevanje dinamičnih sprememb, ki se pojavijo v različnih funkcionalnih fazah.

1: Paget Extramamariaria bolezen. (Hematoksilin-eozin) 2: Senilne plošče, opažene v možganski skorji pri bolniku z Alzheimerjevo boleznijo. (Srebrna impregnacija) 3: Ravni jezik, kolagena vlakna (modra). Mišična vlakna (vijolični trakovi). (Massonov trikrom). 4: Jetrno tkivo z maščobno degeneracijo. (Sudan III) 5: Vplivana jetra. Nekroza. (Toluidin Blue) Viri: Wikipedia. com/useiner: kgh [cc by-sa 3.0 (http: // creativeCommons.Org/licence/by-sa/3.0/)]/Datoteke javne domene/Mohit Lalwani [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licence/by-sa/4.0)]

Na ta način je mogoče določiti presnovno vlogo, ki jo te snovi izpolnjujejo znotraj celice.

Citokemija uporablja dve glavni metodi. Prva temelji na kemičnih in fizikalnih postopkih. Te tehnike se zatekajo k uporabi mikroskopa kot nepogrešljivega instrumenta za vizualizacijo kemičnih reakcij, ki so se pojavile na določenih snovmi znotraj celice.

Primer: Uporaba citohimičnih barvil, kot je reakcija reakcije ferekgena ali PAS.

Druga metoda temelji na biokemiji in mikrokemiji. S to metodologijo je mogoče kvantitativno določiti prisotnost znotrajceličnih kemikalij.

Med snovmi, ki jih je mogoče dokazati v celičnem tkivu ali strukturi, so naslednje: beljakovine, nukleinske kisline, polisaharidi in lipidi.

[TOC]

Zgodovina citokemije

Citokemijske tehnike od njihovega izuma so pomagale razumeti sestavo celic in sčasoma so se pojavile različne tehnike, ki uporabljajo različne vrste barvil z afinitetami in različnimi temelji.

Nato je citokemija odprla nova obzorja z uporabo nekaterih substratov za barvanje prisotnosti encimov ali drugih molekul znotraj celice.

Prav tako so se pojavile druge tehnike, kot je imunocitociza, ki so bile v veliko pomoč pri diagnozi številnih bolezni. Imunocitokemija temelji na reakcijah proti antigenu protitelesa.

Po drugi strani je citokemija uporabljala tudi fluorescentne snovi, imenovane fluorokromi, ki so odlični markerji za odkrivanje nekaterih celičnih struktur. Zaradi značilnosti fluorokroma izpostavlja strukture, na katere je bila nastavljena.

Kaj študiraš?

Različne citokemijske tehnike, ki se uporabljajo na biološkem vzorcu.

Te snovi so lahko encimi, težke kovine, lipidi, glikogen in definirane kemijske skupine (aldehidi, tirozin itd.).

Informacije, ki jih ponujajo te tehnike, lahko vodijo ne le za identifikacijo celic, ampak tudi za diagnozo različnih patologij.

Na primer, citokemično obarvanje je zelo koristno za razlikovanje med različnimi vrstami levkemije, saj nekatere celice izražajo nekatere ključne encime ali snovi in ​​druge ne.

Po drugi strani je treba opozoriti, da je treba za uporabo citokemije opraviti naslednje razmisleke:

Vam lahko služi: gram madeža

1) Snov je treba imobilizirati na mestu, kjer je naravno.

2) Snov je treba identificirati z uporabo substratov, ki reagirajo posebej z njo in ne z drugimi spojinami.

Uporabnost

Vzorci, ki jih je mogoče preučiti s citokemičnimi tehnikami, so:

- Podaljšana periferna kri.

- Iztegnjen kostni mozeg.

- Fabrike, nastavljene za tehnike histokemije.

- Citocentrifugiranje celic.

Citokemijske tehnike so zelo podpore na področju hematologije, saj se pogosto uporabljajo za pomoč pri diagnozi in diferenciaciji nekaterih vrst levkemije.

Na primer: Matting Reakcije služijo za razlikovanje med mielomonocitno levkemijo od akutne monocitne levkemije.

Smari kostnega mozga in periferna kri teh bolnikov so podobni, saj je nekatere celice težko prepoznati le z morfološkega vidika. Za to se izvaja preizkus posesti.

V prvem dajo pozitivno posebne preproge, medtem ko v drugem ne specifične zadeve dajejo pozitivno.

Prav tako so zelo koristne v histologiji, saj na primer uporaba tehnike obarvanja težkih kovin (argikalna impregnacija), obarva intenzivna rjava retikularna vlakna v miokardnem tkivu.

Tehnike v citokemiji

Spodaj bodo pojasnjene najbolj uporabljene tehnike:

- Uporaba barvil

Uporabljena barvila so zelo raznolika v citokemičnih tehnikah in jih je mogoče razvrstiti po več pogledih:

Glede na radikal, za katerega imajo afiniteto

Razdeljeni so na: kisline, osnovne ali nevtralne. So najpreprostejši in najbolj uporabljeni skozi zgodovino, kar omogoča razlikovanje bazofilnih komponent acidofilov. Primer: obarvanost hematoksilina-eozina.

V tem primeru so središča celic barvana modra (vzamejo hematoksilin, ki je osnovno barvilo) in rdeče citoplazme (vzamejo eozin, ki je kislinsko barvanje).

Glede na barvo, ki jo zagotavljajo

Lahko so ortokromatski ali metakromatski. Ortokromatski so tisti, ki obarvajo strukture iste barve, kot jih ima barvilo. Na primer primer Eosine, katere barva je rdeča in barvila rdeča.

Metakromatski namesto tega obarvajo strukture drugačne barve od njihove barve, kot je toluidin, katerega barva je modra in kljub temu barvanje vijolične barve.

Vitalno ali supravitalno barvanje

So neškodljivo barvanje, torej obarvajo celice in ostanejo žive. Ta barvila se imenujejo vitalna (npr. Modra makrofagov Tripána na barvanje) ali supravitalna (npr. Janusova mitohondrija zelena to nista ali nevtralna rdeča barvila lizosome).

- Zaznavanje lipidov skozi maščobe -topna barvila

Osmium tetroksid

Obarvane lipide (nepazirane maščobne kisline) črne. To reakcijo lahko opazimo z optičnim mikroskopom, a ker je ta barvila z visoko gostoto, je mogoče prikazati tudi z elektronskim mikroskopom.

Sudan III

Je eden najbolj uporabljenih. To barvilo se razširi in solulizira v tkivih, ki se kopiči znotraj kapljic lipida. Barva je škrlatna rdeča.

Črni Sudan obarvanje B

Daje boljši kontrast kot prejšnji, ker se lahko raztopi tudi v fosfolipidih in holesterolu. Koristno je za odkrivanje azurofilnih in specifičnih zrnc zrelih granulocitov in njihovih predhodnikov. Zato identificira mieloidne levkemije.

Lahko vam služi: metil rdeče: značilnosti, priprave in aplikacije

- Tinion aldehidov (Schiffovo obarvanje perhijske kisline)

Schiffovo obarvanje periódinske kisline lahko zazna tri vrste vaških skupin. So:

- Prosti aldehidi, naravno prisotni v tkivih (plazemska reakcija).

- Aldehidi, ki nastanejo s selektivno oksidacijo (PAS Reakcija).

- Aldehidos, ki nastane s selektivno hidrolizo (Faulgen Reakcija).

PAS reakcija

To obarvanje temelji na odkrivanju nekaterih vrst ogljikovih hidratov, kot je glikogen. Schiffova periódinska kislina razbije C-C vezi ogljikovih hidratov zaradi oksidacije 1-2 glikolnih skupin, ki sprošča aldehidne skupine.

Skupine prostih aldehidov reagirajo z reagentom Schiffa in tvorijo vijolično rdečo spojino. Videz vijolične rdeče barve kaže pozitivno reakcijo.

This test gives positive in plant cells, detecting starch, cellulose, hemicellulose and peptines. Medtem ko v živalskih celicah zazna mucine, mukoproteine, hialuronsko kislino in hitin.

Poleg tega je koristno pri diagnozi limfoblastičnih levkemij ali eritroleukemije, med drugimi patologiji mielodisplastičnega tipa.

V primeru kislih ogljikovih hidratov lahko uporabimo snop modrega alciána. Test je pozitiven, če opazimo svetlo modro/turkizno barvo.

Plazmalna reakcija

Plazmalna reakcija poudarja prisotnost nekaterih dolgih verižnih alifatskih aldehidov, kot sta palma in stearalna. Ta tehnika velja za zamrznjene histološke reze. Je neposredno z reagentom Schiffa.

Feregena reakcija

Ta tehnika zazna prisotnost DNK. Tehnika je sestavljena iz izpodbijanje tkiva, pritrjenega na šibko kislinsko hidrolizo, da kasneje reagira s Schiffovim reagentom.

Listi hidrolize so izpostavljali aldehide deoksiriboze na ravni unije deoksiriboze-purine. Nato reagent Schiffa reagira z aldehidi, ki so bili svobodni.

Ta reakcija je pozitivna v jedrih in negativna v citoplazmi celic. Pozitivnost dokazuje prisotnost rdeče barve.

Če je ta tehnika kombinirana z zeleno-pironinsko zeleno, je mogoče hkrati zaznati DNK in RNA.

- Citohimično obarvanje za beljakovinske strukture

Če želite to narediti, lahko uporabimo Millonovo reakcijo, ki se kot reagent uporablja živosrebrni nitrat. Strukture, ki vsebujejo aromatične aminokisline, bodo barvane rdeče.

- Citokemično obarvanje, ki uporabljajo substrate za prikaz prisotnosti encimov

Ta obarvanje temelji na inkubaciji biološkega vzorca z določenim substratom in reakcijski produkt pozneje reagira z diazoičnimi solmi, da tvori barvni kompleks.

Esterasas

Ti encimi so prisotni v lizosomih nekaterih krvnih celic in so sposobni hidroliznih organskih estrov, ki sproščajo NAFTOL. Ta zadnji tvori netopni sladkor, ko se pridruži diagradni soli in obarva kraj, kjer se pojavi reakcija.

Obstaja več podlagah in odvisno od tega, kateri je mogoče uporabiti. Prvi so prisotni v nezrelih celicah mieloidne serije in drugi v celicah monocitnega izvora.

Vam lahko služi: temeljna tkanina: kaj je, značilnosti in funkcije

Podlaga, ki se uporablja za določanje določenih preprog, je: Naftol-as-d kloroacetat. Medtem ko je za določitev nespecifičnih preprog, več substratov, kot so acetat Naftol, nafil APH konfekt acetat in butirat nafil alfa.

V obeh primerih bodo celice obarvane rdeče v intenzivno rdeči, ko je reakcija pozitivna.

Mieloperoxidaza

Ta encim najdemo v azurofilnih zrncih granulocitnih in monocitnih celic.

Njegovo odkrivanje se uporablja za razlikovanje levkemije mieloidnega izvora glede na limfoide. Celice, ki vsebujejo mieloperoxidaze Colo iz oker rumene.

Fosfataze

Ti encimi sproščajo fosforne kisline iz različnih substratov. Med seboj se razlikujejo glede na specifičnost substrata, pH in delovanja zaviralcev in inaktivatorjev.

Med najbolj znanimi so fosfomonosterae, ki hidrolizirajo preproste estre (P-O). Primer: alkalna fosfataza in kisla fosfataza, pa tudi fosfamidaze, ki hidrolizirajo sindikate (P-N). Te se uporabljajo za razlikovanje limfoproliferativnih sindromov in za diagnozo triholeucemije.

- Trikromne obarvanosti

Mallary-Azan trikrom

Koristne so za razlikovanje citoplazme od celic celičnih vlaken. Celice so barvane rdeče in kolagena vlakna modrih.

Massonov trikrom

To ima enako koristnost kot prejšnja, vendar so v tem primeru celice obarvane rdeče in kolagena vlakna zelenih.

- Barvanje, ki obarva specifične organele

Janus Green

Ta selektivno obarva mitohondrije.

Soli srebra in osminske kisline

Madež na Golgijevi aparati.

Toluidin modra

Nissijeva telesa obarvajo

Silver in PAS soli

Retikularna vlakna in madež bazalnih plošč.

Orcein in fuchsin resorcin

Obarvajte elastična vlakna. S prvim so obarvani rjavi in ​​z drugo modro ali intenzivno vijolično.

- Druge tehnike, ki se uporabljajo v citokemiji

Uporaba snovi fluorescentnih ali fluorohromov

Obstajajo tehnike, ki uporabljajo fluorescentne snovi za preučevanje lokacije strukture v celici. Te reakcije so vizualizirane s posebnim mikroskopom, imenovanim fluorescenco. Primer: IFI tehnika (indirektna imunofluorescenca).

Zaznavanje celičnih komponent z imunocitokemijo

Te tehnike so zelo koristne v medicini, saj pomagajo zaznati določeno celično strukturo in jo tudi količinsko opredeljujejo. Ta reakcija temelji na reakciji antigen-protitelesa. Na primer: Elisine tehnike (encimski imuno esej).

priporočila

- Za oceno pravilnega delovanja barvil je treba uporabiti krmilje.

- Svež razmaz je treba podvrženo citokemičnim barvam. Če ni mogoče, jih je treba zaščititi pred svetlobo in ohraniti pri 4 ° C.

- Po potrebi je treba skrbeti, da uporabljeni fiksir ne vpliva negativno na preiskavo snovi. To pomeni, da se je treba izogniti, da ga lahko izvleče ali zavira.

- Čas uporabe fiksativ je treba spoštovati, saj bi moral običajno le zadnje sekunde, saj lahko razmaza več časa fiksirativni.

Reference

1. "Citohimika." Wikipedia, brezplačna enciklopedija. 30. junij 2018, 17:34 UTC. 9. julij 2019, 02:53 Na voljo pri: Wikipedia.org
2. Villarroel P, iz Suáreza C. Metode impregnacije kovin za preučevanje miokardnih retikularnih vlaken: primerjalna študija. RFM 2002; 25 (2): 224-230. Na voljo na: Scielo.org
3. Santana A, Lemes A, Bolaños B, Parra A, Martín M, Molero T. Citokemija kisle fosfataze: metodološka premisleka. Rev Diagn Biol. 200; 50 (2): 89–92. Na voljo na: Scielo.org
4. Avtor Robertis e, avtor Robertis m. (1986). Celična in molekularna biologija. 11 Godi izdaja. Uredništvo Ateneo. Buenos Aires, Argentina.
5. Klasična orodja za študij v celični biologiji. TP 1 (dopolnilno gradivo) - celična biologija. Na voljo na: DBBE.fCEN.Uba.ar