Sečnina, kaj je, fundacija, priprava, uporablja

On Sečnina juha Gre za tekoče kulturne medij, ki se uporablja za prikaz prisotnosti encima Ureasa pri določenih mikroorganizmih. Ureasa je mikrobni encim, ki se pojavlja na konstitutiven način, to je sintetiziran, ne glede na to, ali je podlaga, na katerem deluje.

Funkcija Ureasa je povezana z razgradnjo organskih spojin. Vsi mikroorganizmi niso sposobni sintetizirati tega encima, zato njegova določitev v laboratoriju omogoča prepoznavanje določenih bakterijskih sevov in celo razlikovati med vrstami istega spola.

Obstajata dve vrsti testa sečnine: Stuart in Christensen. Se razlikujejo po svoji sestavi in ​​občutljivosti. Prva je posebna, ki prikazuje veliko količino ureasa, ki jo proizvajajo vrste iz rodu beljakovin.

Drugi je bolj občutljiv in lahko v zadnjem času zazna majhne količine Ureasa z drugimi bakterijskimi žanri, kot so Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter in Mycobacterium.

Stuartova sečnina juha sestavljajo sečnino, natrijev klorid, dipotassium fosfat.

Medtem ko je Christensenova juha ali oprijem sečnine sestavljena iz peptonanov, natrijevega klorida, monopotasnega fosfata, glukoze, sečnine, fenol rdeče, destilirane vode in agar-črevesa. Slednje le, če je trden medij.

Osnova

Encim Ureasa hidrolizira sečnino, da tvori ogljikov anhidrid, vodo in dve molekuli amoniaka. Te spojine reagirajo tako, da tvorijo končni izdelek, imenovan amonijev karbonat.

Serea de stuart juha

Stuartova sečnina juha je bolj varovana s pH 6,8. Zato mora biti mikroorganizem sposoben oblikovati velike količine amonija, da se obrne rdečega fenola. PH se mora dvigniti nad 8.

Zato je Stuartova sečnina juha selektivna za vrste Proteus, kar daje pozitivne rezultate v 24 do 48 urah inkubacije in ni učinkovito za bakterije, ki proizvajajo nekaj količin sečnice ali ki počasi hidrolizira sečnino.

To je zato, ker lahko vrste Proteus uporabljajo sečnino kot vir dušika. Po drugi strani pa druge bakterije, ki proizvajajo Ureasa, potrebujejo dodaten vir.

Vendar pa Pérez in sod. (2002) je ugotovil, da je Stuartova sečnina tako učinkovita kot Christensenova sečnina agar, da bi določila sečnico v sevih kvasovk.

Avtorji študije trdijo, da so z obema medijem (Stuart in Christensen) dosegli 100 -odstotno naključje z inkubacijo 24 in 48 ur; Izjema, da so sevi, ki so uspeli medij preusmeriti v močno barvo roza-fucsije.

Ta razlaga je potrebna, saj je Lodder (1970) dejal, da skoraj vsem kvasovkam uspe postaviti okvir sečnine de Christensen sečnine na Pale Rosado. To je zato, ker lahko hidrolizirajo sečnino v minimalnih količinah in na tvorbo aminov z oksidativno dekarboksilacijo površinskih aminokislin. Tega ne bi smeli razlagati kot pozitivno.

Christensenova sečnina ali agar

Christensenova sečnina ali agar je manj varovana, saj lahko odkrije majhne količine amonija. Poleg tega je ta medij obogaten s peptonami in glukozo. Te spojine naredijo druge serease, ki proizvajajo mikroorganizme, ki ne rastejo v juhi Stuart.

Prav tako Christensenov test sečnice ponuja hitrejše rezultate, zlasti za Proteus, saj lahko v samo 30 minutah močno pozitivno damo kot najmanj čas in do 6 ur kot največji čas.

Preostali Ureasi, ki proizvajajo mikroorganizme, uspejo barvo okolja po 6 urah nekoliko obrniti in po 24, 48, 72 urah ali več, in celo nekateri sevi lahko po 5 ali 6 dneh dajo šibke reakcije.

Interpretacija obeh medijev (Stuart in Christensen)

Medij je prvotno rumeno-oranžen in pozitivna reakcija bo barvo spremenila iz medija v roza-fucsia. Intenzivnost barve je neposredno sorazmerna s količino proizvedenega amonija.

Negativna reakcija bo zapustila prvotno barvo, razen kvasovk, ki lahko s Christensenovim sečnico dajo bledo roza.

Priprava

Serea de stuart juha

Tehtajo potrebne grame glede na znake komercialne hiše. Raztopimo v prednostno sterilno destilirano vodo.  Ne uporabljajte toplote za raztapljanje, ker je sečnina občutljiva na toploto.

Za sterilizacijo metode filtracije membrane se uporablja. Za to se uporablja filter Milliporja z pore premera 0,45 µ. Ne uporabljajte avtoklave. Ko je raztopina filtrirana, se porazdeli v sterilne cevi. Za pridobitev zanesljivih rezultatov je treba med 1,5 ml prenesti kot najmanjši znesek pri 3 ml kot največja količina na cev.

Pred uporabo hranite v hladilniku in temperaturi.

Če metoda filtracije ni na voljo, je treba medij takoj uporabiti za pridobitev zanesljivih rezultatov.

Drug način za pripravo Stuartove sečninske juhe je naslednji:

Nekatere poslovne hiše prodajajo osnovni medij za test sečnine, ne vključno z sečnino.

Znesek, ki ga označuje komercialna hiša, tehta. Raztopi se v destilirani vodi in sterilizira v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut. Pustite, da se malo stojite in ko je medij toplega 100 ml 20% pripravljene raztopine sečnine in filtriranje s filtracijo.

Razdeljen je v sterilnih ceveh, kot je opisano zgoraj.

Christensenova sečnina ali agar

-Priprava raztopine sečnine

Tehtamo 29 gr dehidrirane sečnine in se raztopimo v 100 ml destilirane vode. Uporabite metodo filtracije za sterilizacijo. Ne samodejno.

-Sečnina agar

Raztopimo 24 gr dehidrirane podlage v 950 ml destilirane vode. Sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut. Pustite stati, dokler ne doseže temperature 50 ° C in dodajte sečnino, ki je bila prej pripravljena na aseptičen način.

V sterilne cevi vlijemo 4 do 5 ml in se nagibamo, dokler se ne strdi. Dolg flavte mora biti.

Ta medij je mogoče pripraviti tudi v tekoči obliki.

Prijave

Test sečnine je izjemno učinkovit za razlikovanje žanra Proteus od drugih žanrov družine Enterobacteriaceae, glede na hitro reakcijo, ki jo zagotavlja Proteus.

Če je uporabljena Christensenova sestava, test pomaga razlikovati med vrstami od istega rodu. Na primer, S. Haemolyticus in s. Warneri sNaprej Staphylococcus negativna in betahemolitična koagulaza, Vendar se razlikujejo v čemu S. Haemolyticus Je negativno in S. Warneri To je pozitivna sečnina.

Po drugi strani je McNulty uspešno uporabil 2% Christensenovo sečnino za preučevanje prisotnosti Helicobacter pylori V vzorcih biopsije, odvzetih iz želodčne sluznice (Antralna regija).

Prisotnost H. Pylori Dokazano je s pozitivnim testom sečnine. Trajanje za opazovanje rezultatov je neposredno sorazmerno s količino prisotnih mikroorganizmov.

Kot je razvidno, je preprosta metoda za diagnozo Helicobacter pylori V želodčnih biopsijah.

Končno je ta test koristen tudi za razlikovanje vrst od žanrov Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus in Mycobacteria.

Sečnina test posejan

Obe metodi zahtevata močan mikrobni inokulum za optimizacijo rezultatov. Bakterijske kolonije so prednostno odvzete iz krvnega agarja in kvasovk sabouraudskega agarja, razen nekaterih izjem. Inokulum je emulgiran v tekočem okolju.

Za Stuartovo sečnino juho 37 ° C inkubira 24 do 48 ur, vedoč, da išče le seve beljakovinskega rodu, ko je sev bakterija. Za kvas lahko inkubirate pri 37 ° C ali pri sobni temperaturi 24 do 48 ur inkubacije.

V primeru Christensenove sečnine juhe 37 ° C inkubira 24 ur. Če je test negativen, ga lahko inkubiramo do 6 dni. Če test daje pozitiven pred 6. uro, kaže, da gre za sev beljakovinskega žanra.

V primeru Christensenovega sečnina je okvir agarja močno inokuliran, brez punkcije. Juha je inkuba in razlaga na enak način.

QA

Če želite preizkusiti medij, lahko uporabite kontrolne skupine, na primer Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 in Salmonella tiphimurium.  Prva dva morata dati pozitivne rezultate in zadnja dva negativna rezultata.

Reference

1. Britanski laboratoriji. Christensen Media (agar sečnine). Na voljo na: Britanaalab.com