Agar tsi kaj je, fundacija, priprava, uporablja

On TSI Agar o Triple Sugar Iron Agar je trden kulturni medij, ki služi kot biokemični test za usmerjanje začetne identifikacije gram negativnih bacilov. Temelji na dokazih.

Njegova sestava in temelj sta zelo podobna testu Kigler Hierro, z razliko, da slednji vsebuje samo glukozo in laktozo. Po drugi strani pa - kot imenuje ime - trojni sladkorni železni agar vsebuje tri fermentirane ogljikove hidrate: glukoza, laktoza in saharoza.

Poleg tega ima medij TSI štiri beljakovinske derivate, zaradi katerih je zelo hranljiv agar: ekstrakt kvasa, ekstrakt mesa, pepton in peptonski protein. Vsebuje tudi železov amonijev sulfat, natrijev tiosulfat, natrijev klorid, fenol rdeče in agar.

Nezmožnost mikroorganizma pri fermentaciji glukoze, ki je prisotna v okolju. Zato je ta test bistvenega pomena za odločitev, katero identifikacijsko pot je treba sprejeti za določitev spola in vrste.

Vsak laboratorij se odloči, ali deluje s TSI Agar ali s Kliglerjem Hierro.

Osnova

Vsaka spojina izpolnjuje funkcijo znotraj medija.

Natrijev in agar klorid

Natrijev klorid je potreben za vzdrževanje osmotskega ravnovesja medija. Medtem ko vam agar daje trdno doslednost.

Indikator pH (fenol rdeča)

Pripravljeni srednji pH je uravnotežen pri 7,3 in indikator pH (fenol rdeča) postane rumen pod 6,8. To pomeni, da bodo majhne količine kislin, ki nastanejo s fermentacijo sladkorjev.

Če se ne pojavi fermentacija, bo zaradi uporabe peptonov alkalizacija medija, ki se bo iz rdeče-oranžnega obračala v močno rdečo.

Beljakovinski derivati ​​(ekstrakt kvasa, ekstrakt mesa, pepton in peptonski beljakovine)

Ko bakterije presnavljajo beljakovine, ki so prisotni v agarju TSI, se nastajajo amini, ki alkalizirajo medij (predvsem na ravni okvirja), ker reakcija potrebuje kisik. Amini prelijejo okvir v močno rdečo.

Toda to bo odvisno od sposobnosti fermentiranja bakterij ali ne ogljikovih hidratov.

Fermentacija ogljikovih hidratov (glukoza, laktoza in saharoza)

Študija fermentacije sladkorjev lahko da več slik in vsaka se razlaga drugače. Interpretacija testa deli mikroorganizme na 3 kategorije: ne -glukozni fermenterji, fermenterji, ki niso laktoze in laktoza/saharoza.

Treba je opozoriti, da je količina glukoze na sredini omejena, koncentracija laktoze in saharoze.

Bakterije družine Enterobacteriaceae in drugih mikroorganizmov, ki fermentirajo glukozo.

Vam lahko služi: izotonična rešitev: komponente, priprava, primeri

Po drugi strani sta laktoza in saharoza zapleteni ogljikovi hidrati, ki jih je treba razgraditi in postati glukoza, da lahko vstopijo v cikel Embden-Meyerhof.

-Nefermentarni mikroorganizmi

Ko inokulirani mikroorganizem ne more fermentirati glukoze, lahko še manj fermentira druge ogljikove hidrate. Zato tukaj ne nastanejo kisline, vendar je v okvirju nastanek amina zaradi uporabe peptonov.

V tem primeru se pohoda močno obrne.

Interpretacija: K / K pomeni alkalno bevel / alkalno ali nevtralno ozadje

Na sliki, ki jo najdemo na začetku članka, glej sliko cevi D.

Ta rezultat kaže, da mikroorganizem ne spada v družino Enterobacteriaceae.

-Nefermentarni mikroorganizmi laktoze/saharoze

Če lahko bakterije fermentirajo glukozo, ne pa laktoze ali saharoze, se bo zgodilo naslednje:

Bakterije bodo po približno 6 do 8 urah zaužile vso glukozo, saj bodo lahko zakisale tako okvir kot taco; to pomeni, da bo agar popolnoma postal rumen. Ko pa je glukoza izčrpana in dana nemogoče uporabe laktoze in saharoze, bodo bakterije začele metabolizem beljakovin.

Ta reakcija potrebuje kisik, zato se razgradnja peptonanov pojavi na površini (okvir). Amini proizvajajo alkleinizirajo poševno vijugano rumeno do rdeče barve. Ta reakcija je dokazana v 18 do 24 urah inkubacije.

Interpretacija: K/A pomeni alkalni okvir in kislinski taco.

Na sliki, ki jo najdemo na začetku članka, glej sliko cevi B.

-Fermentarni/saharozni fermentacijski mikroorganizmi

Mikroorganizmi, ki lahko fermentirajo laktozo in saharozo, lahko očitno fermentirajo glukozo. Potem ko je minimalna količina glukoze, prisotna v mediju, izčrpana, se oblikovani piruvat začne presnavljati, da tvori kisline skozi aerobni cikel Krebs, v obdobju 8 do 12 ur.

Če bodo bakterije sposobne razviti laktozo ali saharozo, se bodo kisline še naprej proizvajale, po 18 do 24 urah.

Treba je opozoriti, da uporaba glukoze vzame.

Interpretacija: A/ A pomeni kislino/ kislinsko ozadje. Lahko predstavlja plin ali ne.

Na sliki, ki jo najdemo na začetku članka, glej sliko cevi A.

Vam lahko služi: citozin: struktura, funkcije, lastnosti, sinteza

Proizvodnja plina

Nekateri mikroorganizmi lahko proizvajajo plin med fermentacijo sladkorja. Plin je razviden v cevi zaradi tlaka, ki ga izvaja znotraj agarja. Tlak povzroči nastanek mehurčkov ali premik agarja. Včasih se lahko nastajanje plina zlomi na okolje.

Pomembno je, da se pri sejanju TSI medij preboj naredite čisto skozi sredino agarja, dokler ne dosežemo dna. Če punkcija odstopa na stene cevi, lahko povzroči lažne pozitivne rezultate pri proizvodnji plina, saj se bo pobegnil po kanalu.

Proizvodnja plina in reakcije, ki se pojavljajo v agarskem popusu, potrebujejo kisik, zato je priporočljivo, da se cev prekriva z pokrovčkom.

Poročajo o proizvodnji plina kot pozitivna (+) ali negativna (-).

Natrijev tiosulfat in železov amonijev sulfat (Proizvodnja vodikovega sulfida)

Bakterije, ki lahko proizvajajo vodikov sulfid (brezbarven plin), jemljejo žveplo natrijevega tiosulfata, ki je prisoten v mediju. Ko je H oblikovan₂S reagira z železovim amonijevim sulfatom, ki proizvaja železov sulfid (jasno vidna črna oborina).

H₂S poročamo kot pozitiven (+) ali negativen (-).

Na sliki, ki jo najdemo na začetku članka, glej sliko cevi c.

Priprava

Tehtajte 62,5 gr pol -sugarjevega železnega agarja (TSI) dehidriranega in se raztopi v litru destilirane vode.

Vroče, da raztopi agar. Vreti. Razdelite 4 ml medija v epruvetah 13/100 s pokrovom bombaža.

Sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut. Odstranite iz avtoklava in pustite, da se nakloni. Paziti je.

Shranjujte v hladilniku 2-8 ° C. Naj pred sejanjem bakterijskega seva pusti.

Barva dehidriranega medija je svetlo bež in pripravljen medij je rdeče-oranžen

Končni pH pripravljenega medija je 7,3 ± 0,2.

Prijave

TSI test se pogosto uporablja na laboratorijski mikrobiološki laboratoriji. Ta test je nepogrešljiv za usmerjanje vrste testa, ki ga je treba uporabiti za doseganje identifikacije rodu in vrst. Vaša dobra izvedba in razlaga lahko prihranijo gradivo in delo.

Če je rezultat TSI K/K K in test citokrom oksidaze daje pozitivno, je treba uporabiti teste za identifikacijo nefermentacijskih gram negativnih bacilov, kot so pseudomonas, alkalin, achromobacter, Burkholderia, med drugimi žanri. Če je negativna oksidaza, je usmerjena proti Acinetobacter, stenotrofomonah itd.

Lahko vam služi: totipotencialnost: zgodovina, značilnosti in pomen

Po drugi strani pa, če dobimo TSI A/A ali K/A in je test citokrom oksidaze negativen, zmanjšajo nitrati na nitrite, prepričani bomo, da gre za mikroorganizem, ki pripada družini Enterobacteriace. V tem primeru bo identifikacijska pot usmerjena v posebne teste za to skupino bakterij.

Po drugi strani pa, če je pridobljena slika K/A ali A/A in je test citokrom oksidaze pozitiven, bodo dodatni testi usmerjeni na identifikacijo fermentacijskih sevov, ki ne spadajo v družino Enterobacteriaceae, kot je: Aeromonas , Plesiomonas, Vibrio in Pasteurella.

TSI z vodikovim sulfidom, negativnim oksidazo bo vodil naslednje žanre družine Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella ali Salmonella.

TSI z malo ali zmernim vodikovim sulfidom v alkalnem okvirju z alkalnim ozadjem in pozitivno oksidazo bo vodil teste za identifikacijo ne -fermentacijskih gram negativnih proizvajalcev HICILLI, ki proizvajal H H H H H₂S, kot Shewanella putrefaciens.

Končno se lahko TSI uporabi za preiskavo proizvodnje vodikovega sulfida v gramu pozitivnih bacilih, še posebej, če je osumljeno Erysipelothrix Rhusiopathiae.

Posejan

Medij TSI je treba inokulirati s čistimi kolonijami, izoliran v primarnih ali selektivnih pridelkih. Če je kolonija vzeta iz selektivnih sredstev, ki so jih posejali z vzorci z mešano floro, je treba paziti le s površine, saj lahko v spodnjem delu kolonije v tem mediju zavira.

Zato se ročaj nikoli ne sme ohladiti v selektivnem mediju in nato vzeti kolonijo in inokulirajte medij TSI.

Sejal bo z ravno ali iglo. Prebijanje bo izvedeno in skrbite, da je skozi sredino sredine, dokler ne dosežemo dna, nato pa seja. Ne delajte dveh prebojev.

Inkubirajte pri 37 ° C v aerobiozi 18-24 ur. Razlagati v tem času niti prej, niti po.

Omejitve

TSI test je treba prebrati med 18 in 24 ur inkubacije. Branje pred tem času lahko daje lažno fermentacijo A/A. Medtem ko lahko branje po tem času privede do lažne negativne podobe nefarmentorja zaradi porabe peptonov, ki alkalizirajo medij.

Reference

1. Britanski laboratoriji. TSI Agar (Triple Sugar Iron Agar). 2015. Na voljo na: Britanaalab.com
2. BD laboratoriji. Triple sladkor železni agar (TSI agar). 2003. Na voljo na: BD.com