Temelj tioglikolata, priprava in uporabe

On Tioglikolatna juha Je obogateno sredstvo za konsistenco tekočine. Znano je z kratico ftm). Ustvaril ga je Brewer, leta 1944.

Ta medij ima nizko oksidacijsko potencialno zmanjšanje, zato ga ne priporočamo za razvoj strogih aerobnih bakterij, vendar je idealen za obnovitev izbirnih aerobnih bakterij, strogih in mikroaerobnih anaerobnih bakterij.

Tioglikolatna juha brez indikatorja. Vzorčna izločanje vaginalnega. Vir: Bobjgalindo [cc by-sa 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licence/by-sa/4.0)]

Visoka zmogljivost, ki so jo opazili s tem medijem pri izolaciji in okrevanju najrazličnejših mikroorganizmov, je sprejela farmakopeja Združenih držav Amerike (USP), Uradno združenje kmetijskih kemikov (AOAC) in Evropska farmakopeja (EP).

Te organizacije ga priporočajo za preskuse za nadzor sterilnosti farmacevtskih izdelkov in za obogatitev različnih vrst vzorcev.

Thioglikolatni kadi je sestavljen iz ekstrakta kvasa, digreatskega kazeina, brezvodne dekstroze, L-cistina, natrijevega klorida, natrijevega tioglikolata, počitka in vrha v majhni količini v majhni količini.

Obstaja več različic tega medija, med njimi je: tioglikolatna juha z indikatorjem, tioglikolatno juho brez indikatorja, tioglikolatne juhe z obolelimi indikatorjem s heminom in vitaminom K_1, In tioglikolatno juho s kalcičnim karbonatom.

Treba je opozoriti, da varianta tioglikatne juhe, obogatene s heminom in vitaminom K.

[TOC]

Osnova

Tioglikolatna juha velja za obogatitev in ne selektivno, saj omogoča razvoj večine ne -obveznih bakterij. Prehranske potrebe zagotavljajo ekstrakt kvasovk, prebavljeno trebušne slinavke in glukoza.

Po drugi strani pa ta medij, čeprav je juha, vsebuje majhno količino agarja; To povzroči nizko oksidno zmanjšanje potenciala, ker vhodne zavore kisika, tako da se kisik zmanjšuje, ko se poglobi znotraj cevi.

Zato je ta medij idealen za razvoj neobveznih aerobnih bakterij, mikroaerofilov in strogih anaerobnih. Isti medij uravnava količino kisika v okolju, saj je odsoten na dnu cevi in ​​v zadostni količini na površini.

Vam lahko služi: fenilalanin: značilnosti, funkcije, biosinteza, hrana

Prav tako tioglikolat in L-cistinasta dejavnika delujeta kot reducirajoča sredstva, kar prispeva k preprečevanju kopičenja snovi, ki škodujejo bakterijskemu razvoju, kot je peroksid. Poleg tega te spojine vsebujejo skupine sulfidril (-sh-), nevtralizirajo zaviralne učinke merkurskih derivatov, med drugimi težkimi kovinami.

Po drugi strani je nemir indikator redukcije oksida. Ta snov je brezbarvna, ko se ob oksidiranju zmanjša in roza. Obstajajo različice tioglikolatne juhe z indikatorjem in brez indikatorja. Njegova uporaba bo odvisna od vrste vzorcev in laboratorijskih naklonjenosti.

Medtem natrijev klorid vzdržuje osmotsko ravnovesje tioglikatne juhe in uporaba anhidra glukoze preprečuje odvečno vlago v dehidriranem okolju.

Priprava

Tioglikolatna juha z indikatorjem

Tehtamo 29,75 gr dehidriranega medija in se raztopimo v 1 liter destilirane vode. Zmes ostane približno 5 minut. Prinesite vir toplote in pogosto mešajte, dokler se popolnoma ne raztopi.

Medij vlijemo v epruvete in avtoklaviramo pri 121 ° C 15 minut. Pred uporabo pustite, da se ohladi. Preverite vložek komercialne hiše za njegovo ohranjanje. Nekateri priporočajo shranjevanje pri sobni temperaturi v temnem mestu, drugi pa v hladilniku, zaščiteni pred svetlobo.

Pripravljeni srednji pH je 7,1 ± 0,2.

Barva dehidriranega medija je lahka in pripravljena bež je jasna jantarna z nekaj opalescence.

Tioglikolatna juha s heminom in indikatorjem vitamina K₁

Obstajajo komercialni mediji, ki že prinašajo Hemino in vitamin K₁, Posebno za anaerobno gojenje.

Če za anaerobe nimate obogatenega medija, lahko pripravite osnovno juho tioglikolata. Če želite to narediti, dodamo 10 mg hemina hidroklorida in 1 mg vitamina K₁ Za vsak liter medija. Če pa v tioglikolatno juho dodamo kri ali serum, dodajanje hemina, vitamin K ni potreben.

Vam lahko služi: intra -specifično konkurenco: značilnosti, vrste in primeri

Tioglikolatna juha s kalcijevim karbonatom

Prihaja komercialno in se pripravlja po navodilih vložka.

Tioglikolatna juha brez indikatorja

To ima isto sestavo osnovnega tioglikata, vendar ne vsebuje resazurina.

Tehtamo 30 gr dehidriranega medija in se raztopimo v litru destilirane vode. Preostali del priprave je enak tistemu, ki je opisan v tioglikatni juhi z indikatorjem.

Uporaba

Tioglikolatna juha je uporabna za obogatitev kliničnih vzorcev, zlasti za tiste iz sterilnih mest. Uporabna je tudi za neklinične vzorce, kot so kozmetika, zdravila itd.

Za inokulacijo tekočih vzorcev (na primer CSF, sinovialna tekočina, med drugim), se vzorci najprej centrifugirajo, nato pa 2 kapljici usedlin in nameščeni v tioglikolatno juho. Inkubirajte pri 35 ° C 24 ur. Če v tem trenutku ni rasti (motnosti), se inkubira do največ 7 dni.

Če vzorec vzamemo s hiopusom, se kulturni mediji najprej inokulirajo v ploščah in na koncu se bris vnese v juho, del, ki izstopa, in cev je pokrit, pri čemer se v notranjosti pusti bris. Inkuba pri 35 ° C 24 ur, največ 7 dni.

Za trdne vzorce ga je treba homogenizirati v raztopini fiziološke fiziološke raztopine (SSF) in nato inokuliranje tioglikolatne juhe z 2 kapljici suspenzije.

Včasih ga lahko uporabimo kot prevozno sredstvo za vzorce, kjer obstaja sum na prisotnost strogih anaerobov ali kot rezervna juha.

Varianta tioglikolatne juhe s kalcijevim karbonatom se dlje časa uporablja za vzdrževanje kontrol, saj ima možnost nevtralizacije kislin, ki nastanejo z uporabo glukoze; Te kisline so strupene za nekatere bakterije.

Rast v tioglikolatni juhi bomo opazili zaradi motnosti okolja. Priporočljivo je izvesti gramovo obarvanje in pozneje subjektivno v neselektivnih in selektivnih medijih, odvisno od vrste vzorca in mikroorganizmov, za katere se sumijo.

QA

Za nadzor sterilnosti je priporočljivo inkubirati eno ali dve juhi brez inokuliranja. Pričakovani rezultat je prozorna juha, brez spremembe barve, čeprav je normalno, da je na površini cevi opaziti rahlo roza barvo.

Lahko vam služi: Marine Meadow: kaj je, značilnosti, flora, favna

Za nadzor kakovosti je med 10 do 100 UFC certificiranega nadzora, kot je zlati stafilokok ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes ATCC 11437, Vulgatus bakteriji ATCC 8482.

Inkubirajte pri 30-35 ° C v aerobiozi 24 ur do največ 3 dni, saj so ti mikroorganizmi hitra rast.

V vseh primerih se pričakuje dober razvoj, z izjemo Micrococcus luteus in Bacillus subtilis, kjer je lahko zmerni razvoj.

Za nadzor kakovosti tioglikolatne juhe, obogatene s Hemino in vitaminom K₁, Lahko uporabimo kontrolne seve Vulgatus bakteriji  ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 in Fragilis bakteriji ATCC 25285. Pričakovani rezultat je zadovoljiva rast.

priporočila

-Včasih je razvidno, da površina tioglikatne juhe z indikatorjem postane roza; To je posledica oksidacije okolja. Če roza barva pokriva 30% ali več skupne juhe, lahko segrejete v vodni kopeli 5 minut, spet ohladite in uporabite.

To bo odpravilo absorbirani kisik, ki bo medij vrnil v prvotno barvo. Ta postopek je mogoče izvesti samo enkrat.

-Za izboljšanje rasti aerobnih bakterij ga je treba inkubirati z rahlo lenim pokrovom. Vendar je za ta namen ravno uporabiti infuzijsko juho možgansko srce ali triptično sojino juho za dober razvoj strogih aerobov.

-Izogibati se je treba zamrznitvi okolja ali pregrevanja, saj oba pogoja poškodujeta medij.

-Neposredna svetloba poškoduje kulturni medij, pred svetlobo mora biti zaščiten.

Reference

1. Britanski laboratoriji. USP tioglikolat z indikatorjem. 2015. Na voljo na: Labbritania.com.
2. Quos sas laboratoriji. 2019. Tioglikolatna juha. Na voljo na: quios.com.co
3. BD Laboratories Fluid Thioglikolatni medij (FTM). 2003. Na voljo na: BD.com/Evropa
4. BBL mediji, pripravljeni v cevi za gojenje anaerobnih mikroorganizmov. Tioglicate Media. 2013. Na voljo na: BD.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.