Malonatna juha, priprave in uporabe

On Malonato juha To je medij tekoče kulture, ki se uporablja za diagnostični test (Malonato test), ki se uporablja za razlikovanje nekaterih žanrov družine Enterobacteriace. Ustvaril ga je Leifson v 1.933 in nato spremenjen z Ewingom, ki je prvotni formuli dodal majhno količino ekstrakta dekstroze in kvasa.

Medij je trenutno sestavljen iz ekstrakta kvasa, amonijevega sulfata, dipotasijevega fosfata, monopotonskega fosfata, natrijevega klorida, natrijevega malonata, dekstroze in bromotimola modrega. Ta test je na splošno vključen v biokemično identifikacijsko baterijo za enterobakterije, ki pomaga razlikovati določene rodove in vrste.

Grafični prikaz testa Malonato. Do. Negativni test, b. (Zakisanje) negativni test, c. (Srednja alcalinizacija) Pozitiven test. Vir: Javne domene obarvane cevi.mreža

Test Malonato temelji predvsem na sposobnosti nekaterih mikroorganizmov, da uporabljajo natrijev malonato kot en sam vir ogljika in kot vir dušika do amonijevega sulfata.

Malonato test običajno daje pozitivno pri nekaterih vrstah žanrov Enterobacter, Klebsiella in Citrobacter. Medtem ko večina vrst žanrov Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganela, Proteus in Providencia daje negativno reakcijo.

[TOC]

Osnova

Malonate test je sestavljen iz dokazov.

Večina enterobakterij, ki ne uporabljajo malonato.

V tem primeru se bo vsak poskus alkalizacije zaradi uporabe peptonov preprečil s proizvodnjo kislin, ki nastanejo s fermentacijo dekstroze. Prav tako dipotassium in monopotazični fosfati delujeta kot pufer, ki drži pH pri 6,7.

Lahko vam služi: okoli Donaxa

Zato je, ko je test negativen, juha enaka originalna barva (zelena). Redko bi lahko medij zakisali zaradi fermentacije dekstroze; Brez uporabe peptonanov in pH indikatorja bi barvo obrnil iz medija v rumeno. Za to se mora pH spustiti na 6.

Zdaj, ko je ta test pozitiven, da je mikroorganizem kot vire ogljika in dušika uporabljal malonato in amonijev sulfat, ne da bi uporabil druge komponente.

V tem primeru je medij alkaliziran zaradi osvoboditve natrija in posledične tvorbe NaOH. V tem smislu indikator pH (bromotimol modra) obrača barvo sredine zelene do modre barve, ko je pH enak ali večji od 7,6. Modra je lahko jasna ali intenzivna (Prusija modra).

Končno natrijev klorid vzdržuje osmolarnost medija, voda pa je redčenje vseh komponent.

Interpretacija

Juha iste barve (zelena): negativni test

Rumena juha: negativni test

Jasna ali intenzivna modra juha: pozitiven test

Obstaja varianta, imenovana Malonato fenilalanin juha, imenovana tudi Shaw in Clarke Medium. V tem primeru je mogoče analizirati dva testa, uporaba malonata kot vira ogljika in proizvodnja piruvinske kisline iz fenilalanina.

Priprava

Malonato juha

Količina gramov, ki jih določa vstavljanje izbrane poslovne hiše, tehta (lahko se razlikuje od enega do drugega). Težki grami so suspendirani v litru destilirane vode. Rahlo segrejte do popolne raztapljanja. Razdelite 3 ml medija v testnih cevi 13/100 s pokrovom bombaža.

Sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 ali 20 minut.

Kul. Če jih ne bodo uporabili takoj, shranite v hladilniku do uporabe. Umilite juhe pri sobni temperaturi, preden jih inokulira.

Vam lahko služi: Giptodon

Srednji pH mora biti 6,7 ± 0,2. Barva pripravljenega medija je steklenica zelena.

Malonato fenilalanin juha

Tehtamo 11 gr dehidriranega medija in se raztopimo v 1 liter destilirane vode. Preostali del priprave, ki je enak zgoraj opisanemu.

Pripravimo ga lahko tudi tako, da v medij Malonato juhe dodajamo 2 gr/l fenilalanina, preden se sterilizira.

Uporaba

Uporablja se kot del biokemične testne baterije, ki je nameščena za identifikacijo bakterij družine Enterobacteriaceae.

Pomoč razlikovati med:

-Rod Klebsiella in Enterobacter (+) rodu Escherichia in Serratia (-).

-Vrsta SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP, SSP SSP Salame Salmonella Salmonella Enterica SSP Diarizonae (+), vrst Salmonella enterica SSP Enterica (-).

-Rodu Klebsiella na splošno (+) rodu Actinobacillus (-).

-Včasih lahko pomaga pri diferenciaciji žanrov in vrst bakterij, ki ne pripadajo družini Enterobacteriaceae, kot med nefermentacijskimi gram negativnimi bacili Alcaligenes faecalis (+) Acinetobacter sp (-).

Vir: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.

Postopek

Pod vžigalnikom se vzame del čiste kolonije z uporabo pravilno steriliziranega in ohlajenega platinskega ročaja. Vzeti vzorec (lahki inokulum) se raztopi v juhi Malonato. Inkubira se z lenim pokrovom v aerobiozi pri 35 ° C ± 0,2 24 do 48 ur.

Prav tako lahko inokulirate juho Malonato iz pridelka od 18 do 24 ur v sojini juhi Triptyse. V tem primeru se 0,01 ml vzame s sterilno pipeto in malonatova juha je inokulirana. Inkubira se z lenim pokrovom v aerobiozi pri 35 ° C ± 0,2 24 do 48 ur.

Vam lahko služi: sekundarni potrošniki

Končal čas razlage rezultatov. Vsak ostanek modre barve, dokončan 48 ur inkubacije, je treba šteti za pozitivne. Testa ne smemo razlagati kot negativen, dokler se ne izpolni čas 48 -urnih inkubacij.

V primeru uporabe variante malonato fenilalanin juha se najprej razlaga Malonato in nato dodajo 5 kapljic HCl 1N in 3-5 kapljic 8% železovega klorida. Temno zelena barva se razlaga kot pozitiven test za fenilalanin. Če nasprotno, postane medij bledo modro, je test negativen za fenilalanin.

QA

Za izvedbo sterilnosti nadzora medija je treba eno ali dve juhi inkubirati pri 35 ° C ± 0,2 24 ur inkubacije. Po tem času ne sme biti motnosti ali spremembe barve.

Za nadzor kakovosti lahko uporabite znane ali certificirane seve, kot so: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP ATCC 13314 in Escherichia coli ATCC 25922.

Pričakovani rezultati so:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae in SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP Dajejo pozitivno reakcijo (napol modra).
• Za Escherichia coli Rezultat mora dati negativno, to je pričakovati, da ni spremembe barve (zelena) ali da bo zaradi fermentacije glukoze postal rumen.

Omejitve

Ne uporabljajte juhe, ki prikazujejo motnost, oborine, spremembe barve ali kakršen koli znak poslabšanja.

Reference

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Mikrobiološka izolacija Salmonella spp. in molekularna orodja za odkrivanje. Uninorte Health. Barranquilla (col.) 2014; 30 (1): 73–94. Na voljo na: Scielo.org.co
2. Bbl. Malonate juha, Ewing Modified. 2007. Na voljo na: BD.com
3. Senna Laboratories. Malonato juha. Na voljo na: Znanstveni.com
4. RENYLAB. Malonato juha. 2013. Na voljo pri: to.RENYLAB.ind.Br
5. MBIOLOGIJA Diagnostika. Malonato juha. Na voljo na: MBIOLOGIJA.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.
7. Conda Laboratories. Malonato fenilalanin juha. Na voljo na: Condalab.com