Fosfatna pufer (PBS), priprava in uporabe

On fosfatni pufer, BPS ali fiziološki fosfatni pufer To je pufer in izotonična rešitev, katere funkcija je vzdrževanje pH in osmotskega tlaka, ki je najbližje naravnemu (fiziološkemu) okoljskemu okolju. Akronim PBS je pomenila fiziološko raztopino s fosfatom.

PH in osmolarnost sta dva zelo pomembna vidika, ki ju je treba nadzorovati v določenih laboratorijskih protokolih. V primeru pH je nujno, da ga je treba nadzorovati, zlasti v biokemičnih reakcijah, saj se lahko te razlikujejo ali ne, če so reaktanti v neprimernem pH.

Pufer salino pbs fosfat v dveh različnih pH. Vir: Pixinio.com

Medtem ko je nadzor nad osmolarnostjo bistvenega pomena, zlasti pri delu z živimi celicami, saj plazemske membrane celic reagirajo glede na koncentracijo topljenih.

Če se celice prenesejo v hipertonični medij, se bodo dehidrirale, saj se bo gradient vode prepeljal na stran, kjer je večja koncentracija topljencev. Če so celice v nasprotno nameščene v hipotonični medij, celice absorbirajo tekočino do laganja.

Zato se uporablja pufer PBS za laboratorijske protokole, ki potrebujejo vzdrževanje celic In vitro, Na ta način celice ne bodo poškodovane.

PBS je sestavljen iz kombinacije soli, kot so natrijev klorid, natrijev fosfat, kalijev klorid in kalijev fosfat. Sestava PBS se lahko razlikuje glede na protokol.

[TOC]

Osnova

V bistvu je funkcija fiziološkega fosfatnega pufra ohranjanje stalnega fiziološkega pH poleg elektrolitske koncentracije, podobne tisti v organizmu.

V tem okolju lahko celice ostanejo stabilne, saj fiziološki pogoji čim bolj simulirajo.

V prvotno formulacijo PBS je mogoče dodati še druge spojine, ki jih je potrebno.

EDTA preprečuje delček komplementa C1, ki je prisoten v serumu, da se razdeli in lise na rdeče krvne celice, to je, da se izogibajo napačnim rezultatom nezdružljivosti. Poleg tega EDTA pomaga disocialnim celicam.

Vam lahko služi: filogenetsko drevo: vrste in njihove značilnosti, primeri

Priprava

Količina soli, ki jo je treba tehtati za izdelavo PBS fizioloških fosfatov, bo odvisna od količine, ki je potrebna za pripravo:

-Raztopina pufra salino phfosfat (PBS 10X)

Za liter rešitve:

Tehtanje:

80,6 g NaCl,

2,2 g KCL,

11,5 g Na₂HPO₄,

2,0 g KH₂HPO₄

Tehnika priprave

V čaši postavimo težke soli, dodajte dovolj vode (80%) in mešajte na mešalni plošči z magnetno palico, dokler se soli ne raztopijo.

Priprava PBS z uporabo agitacije železa z magnetno palico . Vir: Uporabnik: Ruhrfisch, Wikipedia. com

Filtrirajte, da odstranite odvisne delce. Uporabite filtre z 0,45 µm pore. Autoclave Sterilice in aseptično distribuira v laminarnem pretoku v steklenih kozarcih s pokrovom.

Na 10x raztopino (koncentrirano) ne prilagaja pH. Prilagoditev je izvedena enkrat razredčena na koncentracijo PBS 1x (redčenje 1:10).

-Slani fosfatni pufer (PBS 1X)

PBS 1X lahko pripravite neposredno, tehtamo ustrezne količine vsake soli ali pripravite razredčenje matične raztopine (1:10) s sterilno destilirano vodo.

-Neposredno pripraviti liter slane fosfata PBS 1x obžalovanje:

8,06 g NaCl,

0,22 g KCL,

1,15 g Na₂HPO₄,

0,20 g KH₂HPO₄

Tehnika priprave

Nadaljujte, kot je razloženo v koncentrirani raztopini. Kasneje je treba pH prilagoditi. Če želite to narediti, izmerite pH in odvisno od rezultata uporabite kislino (HCl) ali bazo (NaOH), da po potrebi znižate ali naložite pH, dokler ni 7,4.

Kislina ali baza dodamo kapljico s kapljico med spremljanjem pH vrednost raztopine s pomočjo pH-merilnika. Filtrirajte, avtoklavirajte sterilice in po potrebi aseptično distribuira v stožčastih cevi ali steklenicah.

-Za pripravo PBS 1x iz 10 -kratne matere raztopine:

Naredite redčenje 1:10. Na primer, da pripravite 1 liter PBS 1x, izmerite 100 ml matične raztopine in dodajte 700 ml sterilne destilirane vode. Prilagodite pH in izpolnite količino vode, dokler ne doseže 1000 ml.

Lahko vam služi: Smernica Izbira: kaj je, definicija, primeri

Pripravljeni pufer PBS je brezbarven in prozoren.

Dnevno uporabo PBS lahko shranite pri sobni temperaturi, ostalo pa v hladilniku.

.Rešitve za nastavitev pH

Hcl

Za 100 ml HCl (klorovodikova kislina) do 1 molar.

Izmerite 91 ml destilirane vode in jo postavite v opremo za oborino 250 ml zmogljivosti.

Izmerite 8,62 ml koncentriranega HCl in ga počasi dodajte v čašo, ki vsebuje vodo (nikoli je ne nalepi). Pri ravnanju z močnimi kislinami (visoko jedko snov) sprejmite ustrezne ukrepe za biološko varnost.

5 minut premešajte z mešalno ploščo z magnetno palico v kozarcu. Pojdite na 100 ml kroglice in s H s h pobegnite na 100 ml₂Ali destilirano.

Naoh

Za 100 ml NaOH (natrijev hidroksid) 10 molar.

Izmerite 40 ml destilirane vode in jo postavite v 250 ml čaše. Izmerite 40 gr NaOH in dodajte v vodo. Mešajte z mešalno ploščo z magnetno palico v kozarcu.

Pojdite na 100 ml aggngroidne kroglice in stegnite z destilirano vodo. Upoštevajte standarde biološke varnosti, ker je ta reakcija eksotermična (sprošča energijo v obliki toplote).

Če želite pripraviti druge količine raztopine slane fosfata, se lahko posvetujete z naslednjo tabelo:

Vir: "Laboratorij za virusno in človeško genomiko, Medicinska šola UASLP"

Prijave

V glavnem se uporablja v celičnih bioloških laboratorijih, imunologiji, imunohistokemiji, bakteriologiji, virologiji in raziskavah.

Idealno je, da celično pranje naredimo s centrifugiranjem (rdeče krvne celice), celične monokape, oprane v spektroskopskih tehnikah elipsometrije, pri kvantifikaciji bakterijskih biofilmov pri vzdrževanju celičnih pridelkov za viruse kot raztopino pranja v tehniki indirektnega imunofluorescenca in v tehnikah za karakterizacijo monoklonskih protiteles.

Služi tudi za transport celic ali tkiv, kot redčenje za štetje celic, pripravo celičnih encimov (tripsin), kot redčenje metode izsuševanja biomolekul in pripravo drugih reagentov.

Vam lahko služi: prehrana heterotroph: značilnosti, stopnje, vrste, primeri

Po drugi strani so Martin in sodelavci leta 2006 pokazali, da je PBS uporaben v forenzičnih znanstvenih laboratorijih, zlasti pri okrevanju sperme iz nožnice ali pri okrevanju vaginalnih celic penilnih razmazov. Na ta način je mogoče ugotoviti, če je prišlo do spolnega odnosa.

Omejitve

-Nekateri pufer PBS prinaša kot konzervans snov, ki se imenuje natrijev azid. Ta spojina lahko ustvari eksplozivne snovi, če pride v stik s svincem ali bakrom. Zaradi tega je treba pri zavržbi tega reagenta za drenažo paziti posebno. Če ga zavržemo po tej poti, je treba dodati obilno vodo, da se zmanjša največji.

-Fosfatnega pufra ne smemo dodati cinka, saj obori nekaj soli.

-Wangen in sodelavci v letu 2018 so ugotovili, da uporaba PBS ni primerna za pranje primarne akutne mieloidne levkemije (AML), pridobljene iz periferne krvi, ker se številne celice izgubijo z lizo, z velikim zmanjšanjem beljakovinskega materiala.

Zato so ugotovili, da primarnih celic AML po shranjevanju v tekočem dušiku ne smete oprati s PBS.

Reference

1. Coll j. (1993). Diagnostične tehnike v virologiji. Ed Díaz de Santos. 360 str
2. Rodríguez M, Ortiz T. Celična kultura. Sprememba medija. Oddelek za normalno in patološko histologijo Univerza v Sevilji. Na voljo v osebju.nas.je
3. Priprava fosfatne puferirane fiziološke raztopine (PBS). (2008). Standardni operativni postopki (SOPS) virusni in človeški genomični laboratorijski fakulteta za medicino UASLP. Na voljo pri: Genomics.UASLP.mx
4. "Slani fosfat." Wikipedia, brezplačna enciklopedija. April 2019, 19:36 UTC. April 2019, 02:57 je.Wikipedija.org.
5. Pietrasanta L, von-Bilderling c.Teme v molekularni biofiziki. Na voljo pri: Uporabniki.Df.Uba.ar
6. Prerazporediti. Ročno. PBS+EDTA. Na voljo na: Felsan.com.ar
7. Martin NC, Pirie AA, Ford LV, Callaghan CL, McTurbate K, Lucy D, Scrimger DG. Uporaba fiziološke raztopine fosfata za obnovitev celic in spermatozoidov iz brisov. SCI pravičnost. 2006; 46 (3): 179–84. Na voljo v: NCBI.NLM.ameriški nacionalni inštitut za zdravje.Gov
8. Wangen R, Aasebø e, Treeni a, et al. Metoda ohranjanja in fosfatno pufrano pranje fiziološke raztopine Apfect akutni mieloidni levkemiji proteom. Int j mol sci. 2018; 19 (1): 296. Na voljo v: NCBI.NLM.ameriški nacionalni inštitut za zdravje.Gov
9. Martínez R, gragera r.  (2008). Teoretični in praktični temelji histokemije. Superior Svet znanstvenih preiskav. Madrid. Na voljo pri: Knjige.Google.co.pojdi