Biuret Foundation, reagenti, postopek, uporabe

On Biuret Gre za reagent, ki se uporablja za določanje beljakovin z dolgimi verigami in kratkimi verigami. Posebej se uporablja na področju analitične kemije in uroanalize za raziskovanje koncentracije celotnega proteina v serumu, plazmi in urinu.

Vrednosti beljakovin se lahko pri določenih patologijah povečajo ali zmanjšajo. Slike hipoproteinemij so običajno predstavljene pri bolnikih z ledvično boleznijo, pri podhranjenih in pri bolnikih s kroničnimi okužbami.

Kemična struktura kompleksa, ki je nastala v pozitivnem testu Biuret Reaction. Vir: yikrazuul [javna domena]/flickr

Medtem ko med drugim opazujemo hiperproteinemijo pri patologijah, kot so multipli mielomi, sistemski eritematoz, bakterijski endokarditis, bakterijski meningitis, Waldenstrom makroglobulinemija, med drugim.

Po drugi strani je prisotnost beljakovin v urinu posledica filtracije albumina z ledvico. To je patološko vedenje, ki ga je treba preučiti.

V tem smislu je Biuret zelo koristen, saj omogoča količinsko določanje prisotnosti serumskih beljakovin, plazme, urina med številnimi drugimi vzorci.

Tudi biuret lahko uporabimo za raziskovanje prisotnosti in koncentracije beljakovin v neznanih ali neznanih vzorcih sestave. Zato se pogosto uporablja na raziskovalnem področju.

Biuret test temelji na zaznavanju peptidnih povezav. Test je podan v alkalnem mediju. Vzorec mora vsebovati vsaj dve peptidni povezavi, tako da se lahko oblikuje barvni kompleks z vijolično močjo. Kompleks tvori zveza povezav in ion bakra.

[TOC]

Osnova

Reagent Biuret je sestavljen iz kalijevega hidroksida, kipric sulfata ter natrija in kalijevega tartrato. Natrijev hidroksid se uporablja za alkalizacijo okolja, saj je ta pogoj nujno potrebno, da se reakcija pojavi.

Snovi, ki reagirajo z beljakovinami, je kuprac sulfat, medtem ko natrijev tartrato deluje, da ne omogočajo tvorbe bakrovega hidroksida, ki se ponavadi obori in posega v reakcijo.

Vam lahko služi: fermentacija: zgodovina, proces, vrste, primeri

Če v vzorcu obstajajo snovi, ki imajo peptidne vezi (polipeptidi ali beljakovine), bo test dal pozitivno.

Reakcija se razlaga kot pozitivna, ko rešitev postane vijolična. Barva nastane s tvorbo kompleksa med vsaj dvema peptidnima vezama, ki imata skupino CO-NH in trenutne katione CuPric.

Vijolični kompleks se lahko oblikuje na dva načina: ena je zaradi izgube protonov amidskih skupin, ki se vežejo na kovino (grobo), drugega.

Ta reakcija se lahko razlikuje po intenzivnosti in barvi, odvisno od vrste beljakovin.

Test se lahko izvaja kvalitativno ali kvantitativno. V kvalitativni obliki se poroča kot pozitiven ali negativen. Medtem ko v kvantitativni obliki koncentracija lahko merimo s spektrofotometrično metodo.

Reakcija se bere med 540-560 nm. Intenzivnost barve je neposredno sorazmerna s koncentracijo peptidnih povezav v vzorcu.

Reagenti

-Natrijev hidroksid (NaOH) pri 20%

-1% pentahidrat cupric sulfat (cuo₄. 5H₂Da)

-Mešani natrijev in tetrahidrat kalijev tartrato (Knac₄H₄Tudi₆· 4H₂Da)

Stabilnost reagenta Biuret

-Hraniti ga je treba v hladilniku.

Postopek

Tehnika

-Postavite 100 ul vzorca ali vzorec, ki ga je treba analizirati v epruveto.

-Dodajte 2 ml natrijevega hidroksida.

-Zelo dobro mešajte.

-Dodajte 5 ml biuretskega reagenta.

-Zmešajte in pustite 25 minut pri sobni temperaturi, pokrijte in zaščitite pred svetlobo.

-Opazujte tvorbo ali ne barve in izmerite spektofotometrično.

Kalibracijska krivulja

Za izvedbo kalibracijske krivulje lahko kot vzorec uporabite serumski goveji albumin. Iz nje je pripravljenih več koncentracij. Na primer 25, 50, 75, 100, 125 in 150%.

Reakcija je nameščena z vsemi temi znanimi koncentracijami in absorbanca se odčita na valovno dolžino 540 nm. S podatki o znanih koncentracijah in absorpcijskimi odčitki se izvaja kalibracijska krivulja.

Lahko vam služi: Kitajska flora in favna: reprezentativna vrsta

Pri vsaki odločitvi ali veliko predelanih vzorcev je priporočljivo. Kot kalibracijski vzorec lahko uporabite serumski goveji albumin 0,1-2 mg/ml.

Meritve so izvedene v 540 nm spektrofotometru.

Linearnost je izpolnjena do koncentracije 12 g/dl.

Vmešavanje

Snovi, ki se vmešavajo v test Biureta

Čeprav ni zelo pogosto, je treba opozoriti, da se med izvajanjem tega testa lahko motijo ​​nekatere snovi. Na primer, prisotnost amonija lahko zavira tvorbo barv.

Prav tako bi lahko druge snovi absorbirale isto valovno dolžino, kot so nekateri pigmenti.

Po drugi strani pa lahko nastane interferenca, kadar druga snov, ki ni peptidna povezava, tvori kompleks s kovinsko soljo. Primer: nekaj ogljikovih hidratov in nekaterih lipidov.

V primeru, da pokaže, da analizira neko vrsto oborine, ga je treba pred nastavitvijo testa filtrirati ali centrifugirati.

Snovi, ki se ne vmešavajo v test Biuret

Na test ne vpliva prisotnost:

-Bilirubin do koncentracije 20 mg/dl.

-Hemoglobin do koncentracije 750 mg/dl.

-Dexstran do koncentracije 30 g/l.

-Trigliceridi do koncentracije 4000 mg/dl.

Prednosti

-Je preprost način izvajanja.

-To je ekonomski test.

-Ima visoko specifičnost beljakovin.

-Malo motenj.

Slabosti

Ima malo občutljivosti za odkrivanje nizkih količin beljakovin. Delo, ki so ga opravili Fuentes in sodelavci.

Vendar pa še ena raziskava, izvedena na Univerzi v Amazonu. Omejitev zaznavanja, ki jo poroča študija, znaša 0,020 mg/ml in omejitev kvantifikacije 1.33 mg/ml.

Prijave

Biuret reagent ali test se uporablja za določanje beljakovin v kliničnih in nekliničnih vzorcih v rutinskih in raziskovalnih laboratorijih.

Vam lahko služi: značilnosti živih bitij

Patologije, ki so se preučevale ali zmanjšale Beljakovine

V mnogih patologijah je pomembno določiti koncentracijo skupnih beljakovin v kliničnih vzorcih, pri čemer je biti lahko visok ali zmanjšan.

So dvignjeni v:

-Več mieloma,

-Sistemski lupus eritematosus,

-Bakterijski endokarditis,

-Bakterijski meningitis,

Waldestrom Macroglobulinemija, med drugim.

Zmanjša se:

-Ledvična insuficienca,

-Ljudje s hudo podhranjenostjo,

-Bolniki s kroničnimi okužbami, med drugim.

Klinični vzorci

Najpogostejši klinični vzorci so serum, plazma in urin. Normalna vrednost beljakovin v serumu ali plazmi je 6.0-8.8 gr/dl.

Koncentracija beljakovin pri odraslih pri odraslih ne presega 150 mg/24 -urne slike.

Normalna vrednost indeksa beljakovin urina/kreatinina v urinu

Dojenčki: < a 0,50 mg

Otroci 2 leti in več: Indeks: 0,20 mg

Odrasli: < 0,2 mg

Neklinični vzorci

Reakcija Biureta se lahko uporablja za številne vrste nekliničnih vzorcev, kot so mlečni proizvodi, antiofidna seruda ali katera koli neznana snov, ki jo želi raziskati prisotnost beljakovin.

Reference

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez in. (2014). Fizikalno-kemijska karakterizacija in vsebnost beljakovin v izvlečkih tekočine mangrove ostrion (Crassostrearearearearophorae). Kubanski časopis za kemijo, 26 (1), 66–74. Pridobljeno 26. junija 2019 iz http: // scielo.Sld
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Funkcionalna karakterizacija mandljev semen manga (Mangifera označuje l.) Revija za razvojno znanost. 2015; 6 (1): 67–75
3. "Biuret." Wikipedia, brezplačna enciklopedija. 19. junij 2019, 16:37 UTC. 26. junij 2019, 22:18
4.  Fuentes F, Quispe I, García J. BIURET METODE standardizacija za količinsko določitev skupnih beljakovin v večnamensko protibotropnem serumu, proizvedenem v Nacionalnem centru za biološke izdelke. Bol - Inst NAC Health 2012; 18 (11-12).  Na voljo na: Repozitorij.Ins.Gob.pe
5. Winer Laboratories. Skupni beljakovine. Kolorimetrična metoda za določanje skupnih beljakovin v serumu in plazmi. Na voljo na: Wiener-lab.com.ar