TCBS agar What, fundacija, priprava, uporaba

On TCBS agar Je zelo selektivna in diferencialna trdna kultura, ki se uporablja za izolacijo in gojenje bakterij rodu Vibrio Vibrio Cholerae, V. Vulnificus in V. Parahaemolyticus kot glavni patogeni tega žanra.

Akronim TCBS pomeni tiosulfat žolčni citrat. Ta agar je znan tudi kot selektivni medij za vibrire. Prvotno formulo je ustvaril Nakanishi, nato pa ga je spremenil Kobayashi.

Sestavljen je iz ekstrakta kvasovk, peptona mesa, tripteina, natrijevega citrata, natrijevega tiosulfata, volov žolča, saharoze, natrijevega klorida, železovega citrata, bromoolske modre barve, modrega timola in agarja.

Ta sestava omogoča ustrezen razvoj vibrijskih vrst iz vzorcev vode, hrane in blata; razen Vibrio Hollisae, ki v tem mediju ne raste. Poleg tega lahko medij TCBS zavira rast drugih spremljajočih bakterij, zlasti koliform.

Zaradi resnih prebavil in zunajinstrukcijskih težav, ki jih proizvajajo nekatere vrste rodu Vibrio, je njihova diagnoza zelo pomembna. Človek je okužen predvsem z uživanjem surove ali malo kuhane hrane morja ali onesnaženih voda, pa tudi z okužbo z rano.

Zaradi tega morajo klinični laboratoriji vključiti TCBS agar v preučevanje kopiranja vzorcev tekočega blata, zlasti z videzom riževe vode. Še posebej, če se pacient nanaša na stik z morsko vodo ali zaužije školjke ali ribe.

Osnova

Izvleček kvasovk, peptonov mesa in tripteína so hranljiv vir tega medija. Vendar je TCBS agar nevljuden medij za večino bakterij.

Njegova visoka selektivnost daje agregat natrijevega citrata in volovskega žolča; Oba sta zaviralna sredstva, ki v medij zagotavljajo tudi alkalni pH, kar omejuje rast spremljajoče flore in daje prednost rasti V. Kolere, med drugimi vrstami. Zlasti Vibrio kolere je zelo občutljiv na kislost.

Natrijev klorid se osmotično uravnoteži v okolju. Poleg tega, ker je njegova koncentracija velika, deluje tudi kot zaviralec, ki daje prednost rasti halofilnih bakterij.

Tarks je fermentacijski sladkor, ki skupaj z modrimi -bromotimol modri in modri pH kazalniki dajejo srednje diferencialni značaj. Zaradi tega je s tem medijem mogoče razlikovati fermentiranje sevov od nefermentacije.

Kolonije fermentacijskih sevov saharoze se razvijejo v barvi in ​​bodo medij iz zelene v rumene barve spremenile s kislinami. Prosojna prosojna raste in medij ostanke prvotne barve (zelena).

Prav tako ta medij vsebuje natrijev tiosulfat kot vir žvepla in železovega citrata kot razkrivajočega sredstva. Obe kažeta bakterije, ki lahko proizvajajo vodikov sulfid (brezbarven plin). H₂S tvori iz tiosulfata in nato reagira s železom citratom Vidna črna oborina se oblikuje.

Končno je agar tisti, ki zagotavlja trdno doslednost okolju.

Priprava

Tehtamo 89 gr dehidriranega medija in se raztopimo v litru destilirane vode. Pomagajte razpadati za pogosto ogrevanje in vznemirjenje. Zmes lahko kuhamo do 2 minuti.

Ta medij ne vsebuje avtoklave. Po svoji raztopini ga postrežemo neposredno na sterilnih ploščah. S strjevanjem so na voljo na obrnjenem načinu v trombocitih in so shranjeni v hladilniku (2-8 ° C) do uporabe.

Medij po pripravi mora biti pri pH 8,6 ± 0,2.

Barva dehidriranega medija je svetlo bež ali bež zelena, barva medija.

Pomembno je, da se plošče ublažijo, preden sejajo vzorce.

Uporaba

Najpogostejši vzorec za živahno izolacijo so driski.

Vzorcev blata ni mogoče sejati takoj v selektivnem okolju, prepeljati jih je treba sredi Caryja Blaira.

Za povečanje občutljivosti pridelka lahko iztrebke prenesejo peptonada voda na pH 8,4 kot sredstvo za obogatitev največ 8 ur, od tam je subjektivno do medija TCBS.

Upoštevati je treba tudi, da lahko nekateri živahni sevi povzročijo septikemijo pri imunosupresivnih bolnikih, zato jih je mogoče izolirati iz krvnih kultur. Prav tako lahko vzorce hrane in hrane iz morja analiziramo, kadar obstajajo epidemični izbruhi bolezni kolere.

Posejan

Inokulum preučenega vzorca mora biti izrazit, posejan se izvaja z metodo izčrpanosti. Plošče inkubiramo pri 37 ° C 24 ur v aerobiozi.

Domnevne kolonije Vibrio kolere So srednji, gladki, neprozorni, tanki in rumeno -obarvani robovi, ker fermentirajo saharozo.

Podobno gojijo vrste iz V. Alginolyticus, V. reka, V. Hareyi, v. Cincinnatiensis, v. Furnissii, v. Metschnikovii in nekaj V. Vulnificus. Druge klinično pomembne vrste, kot so V. Parahaemolyticus Ne fermentirajo saharozo in se razvijajo kot oljčno zelene kolonije.

Po drugi strani je treba upoštevati, da lahko v tem mediju rastejo nekateri sevi aeromonov in plesiomonov, ki so oksidaza (+), kar razvija rumene kolonije, ki lahko zmedejo kliničnega zdravnika. Medtem ko nekateri sevi pseudomonas tudi oksidaza (+) rastejo kot zelene kolonije kot tudi V. Parahaemolyticus.

Omejitev

Test oksidaze, ki je pozitiven za rod Vibrio, nikoli ne smete izvesti iz kolonij, pridobljenih iz agarja TCBS. Spojine medija v tem testu močno posegajo. Zato ga je treba storiti od oseb v krvnem agarju.

QA

Dokazati, da je medij v dobrem stanju, je priporočljivo.

Za to lahko uporabite seve:

-Vibrio kolere - zadovoljiva rast (rumene kolonije, prosojni rob).

-Vibrio parahaemolyticus - zadovoljiva rast (kolonija z zelenim središčem in prosojnim robom).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - zadovoljiva rast (rumene kolonije s halos iste barve okoli kolonije).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - Skupna ali delna inhibicija (majhne rumene ali prosojne kolonije).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- delna ali skupna inhibicija (modre kolonije).

-Escherichia coli ATCC 25922 - popolnoma zaviran.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Skupna ali delna inhibicija. (Majhne kolonije zeleni rob prosojnega roba).

Inkubacija medija brez inokulacije ne bi smela imeti spremembe.

Reference

1. BD laboratorij. Bd. TCBS agar. Na voljo na: BD.com
2. Britanski laboratoriji. Srednji TCB. Na voljo na: Britanaalab.com