Krompir dekstroze, priprava in uporaba

On Dekstroza krompirjev agar Je trden, neselektivni medij za prehransko kulturo. V njem lahko rastejo bakterijske in glivične vrste, vendar je njegova uporaba navedena zlasti za izolacijo nitastih gliv in kvasovk. Znan je tudi kot PDA medij z izrazom v angleškem krompirjevem dekstroznem agarju.

Posebej je koristen za izolacijo fitopatogenih gliv, to je tistih, ki vplivajo na zelenjavo. Za sejanje vzorcev iz okužene zelenjave lahko uporabimo druge medije, kot sta Sabouraud ali Mal-agar.

Aspergillus niger in sinemas v dekstroznem papežnem agarju. Vir: Alextrevelian 006 v angleški Wikipediji [javna domena]/Joselrojas [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licence/by-sa/4.0)]

Uporablja se tudi za štetje glivičnih kolonij v vzorcih kozmetike, farmacevtskih izdelkov in nekaj mlečne hrane. Prav tako je ugodno za setev vzorcev strganja kože v iskanju dermatofitov, ki v tem mediju zelo dobro rastejo in razvijajo njihove značilne pigmente.

Srednji dekstrozni papež je zelo preprost in enostaven medij za pripravo v laboratoriju. Vsebuje, kot že ime pove, krompirjeva infuzija, dekstroza in agar -gar. Poleg tega lahko dodamo zaviralne snovi, da se prepreči rast bakterij in poveča selektivnost za glivične vrste.

[TOC]

Osnova

Dekstroza papeški agar je kulturni medij, ki zagotavlja potrebne prehranske elemente za razvoj nitastih gliv in kvasovk.

Kombinacija infuzije krompirja z glukozo zagotavlja popoln vir energije, tako da je zadovoljiva rast gliv. Medtem ko je agar tisti, ki zagotavlja doslednost okolju.

Sam medij ne zavira rasti bakterij, zato je neselektiven medij. Za to selektivno potrebuje agregat zaviralnih snovi, kot so tartarična kislina ali antibiotiki.

Priprava

-Domača (nekomercialna) papa dekstroza agar

Petrijeve plošče

Pripravljen je na naslednji način:

V prvi vrsti krompir zelo dobro opramo tako, da odstranimo zemljo, ki jo imajo. Z vsem in lupino jih razrežejo na drobne rezine. 200 gr krompirja tehtamo in zavremo v litru destilirane vode, pol ure.

Čas je končan filtri ali celoten pripravek obremenite skozi gazo.

Pridobljena tekočina se zaključi z destilirano vodo, dokler ne doseže litra. Infuzijo dodamo 20 gr agar -agar in 20 gr dekstroze, dobro meša in avtoklavo pri 121 ° C, 15 minut 15 kilogramov tlaka.

Vam lahko služi: koevolucija

Pustite, da se ohladi do 50 ° C in postrežemo v sterilnih ploščah Petri. Pripravljene plošče se hranijo v hladilniku.

Klini

Prav tako lahko pripravite krompirjeve klini dekstroze.

V tem primeru pred sterilizacijo v avtoklavi. Prihranite v hladilniku.

Medij je pri pH 5.6 ± 0.2, vendar nekateri laboratoriji dodajo 10% tartarne kisline, da pH znižajo na 3,1 ± 0.1 z namenom zaviranja rasti bakterij.

V istem smislu drugi laboratoriji raje dodajajo antibiotike, da bi to naredili selektivno za gojenje gliv in se izognili razvoju bakterij.

-Komercialna priprava papeškega agarja dekstroze

Tehtamo 39 gr komercialno dostopnih dehidriranih in se raztopi v litru destilirane vode. Pustite 5 minut.

Zmes segrevamo tako, da pogosto mešamo do njegovega skupnega raztapljanja. Kasneje ga v avtoklavu steriliziramo pri 121 ° C 15 minut.

Lahko pripravite krožnike ali klini. Nadaljujte, kot je opisano zgoraj.

PH je 5,6 ± 0,2. Če je zaželeno pH 3,1, je treba pred serviranjem v ploščah dodati 14 ml sterarične tartarične kisline.

Barva nepripravljenega medija je bež in pripravljena je jasna jantarna z rahlo oblačnim ali opalescenčnim videzom.

Prijave

Postopek za sajenje vzorcev rastlin v loncu za dekstrozo

-Za liste s pikami

Listi se razrežejo na koščke.

V 50 -kratni posodi s 50% alkoholom postavite koščke listov (obarvane in zdrave koščke), da površino razkužite za 20 do 30 sekund. Vrzite alkohol in dodajte natrijev hipoklorit 20% za 40 do 50 sekund, če so fini listi in čas povečajte na 80 sekund, če je lubje in kovčki.

Vrzite natrijev hipoklorit in vzemite razkužene koščke s sterilno sponko in jih postavite na srednjo površino (največ 10 kosov). Datum postavite in inkubirajte od 20 do 30 ° C.

-Za sadje in gomolje

Če je sadje mesnato, odprite sadje, ki ga je prizadela gliva, in vzemite koščke s sterilnim skalpelom, tako bolnega kot zdravega dela in ga postavite na površino agarja.

Če je sadje citrusi, na primer limona ali pomaranča, je treba odpreti njegova semena in sejati.

Vam lahko služi: fosfatidilinozitol: struktura, usposabljanje, funkcije

Kadar vpliva površina sadja in opazimo sporovanje, je idealno uporabiti naribano metodo na plošči; To je sestavljeno iz igranja z goloto s sterilizirano in ohlajeno lopatico z "L", nato.

-Za zrna

Razkužijo enako, kot je opisano v listih in nato postavljene na agar.

-Za veje in stebla

Izvede se Raspecue of Cortex, nato pa se jemljemo koščki zdravega in bolnega dela.

Zasajene plakete inkubiramo v aerobiozi pri 20-30 ° C 72 ur.

Postopek za sajenje kožnih lusk, las ali nohtov na dekstroznem papežnem agarju

Vzorec je treba izvesti s pomočjo Scalpel Sheet št. 11, bodisi za rezanje prizadetih lestvic za lase, kožo ali nohtov v iskanju dermatofitov. Pred odvzemom vzorca je treba območje s 70% alkoholom razkužiti.

-Vzorec kože

V prevari je treba lezije poškodbe strgati, ker je bolj verjetno, da bo gliva našli.

V eksudativnih lezijah se vzorec odvzame s suhim ali mokrim brisom. Sejajte takoj nad papež Dekstrozo ali agar Sabouraud. Izogibajte se prevoznim sredstvom.

Druga metoda za prevzem vzorca je s tehniko Mariat in Ada Campos's Carpet Square. V tem primeru prizadeto območje 5 -krat drgnemo s kosom sterilne volne za njen naknadni pridelek.

Vzorec je mogoče postaviti neposredno v gojišče.

-Vzorec las

Odvisno od patologije lahko prizadete del ali korenine. Vzorec postavite v kulturni medij.

-Vzorec nohta

Lahko jih strgajo ali razrežejo določen del prizadetega nohta. Bo odvisna od vrste poškodbe.

Vzorec prerežite na koščke 1 mm pred setvijo, da se poveča verjetnost stika z glivico s kulturnim medijem.

Postopek identifikacije

Kolonije, pridobljene v plošči, so izolirane v cevi.

Mikroskopsko študijo (opazovanje struktur in njihovih formacij) je mogoče opraviti z mikrokulturami ali neposrednim opazovanjem mikroskopa med listom in lamelico.

Vam lahko služi: histidin: značilnosti, struktura, funkcije, hrana

Število kolonij

Ta medij lahko uporabimo tudi za določitev obremenitve gliv in kvasovk, prisotnih v vzorcih rastlin, hrani, kozmetiki ali zdravilih. V ta namen se uporablja agar krompirja z antibiotiki, kot so: (kloramfenikol, klorotetraciklin ali oboje).

Na sterilno in prazno petrijsko ploščo nalijte 1 ml vzorca - po možnosti razredčen -, nato stopite dekstrozno krompirjevo pištolo in pustite, da se ohladi pri 45 ° C. Prelijemo čez petrijsko ploščo in se vrtimo do homogenizacije. Pustite v mirovanju do.

Inkubirajte v aerobiozi pri 20-25 ° C (kalupi) ali pri 30-32 ° C (kvasovke) 5 do 7 dni ali več, odvisno od vrste iskane glive in vrste vzorca. Za inkubiranje obeh temperaturnih razponov se lahko uporabljata dve plošči.

Profesor glivičnih kolonij v vzorcu hrane. Krompirjev agar dekstroze, dopolnjen z antibiotiki. Vir: pxhere.com fotografija/777267

Vzdrževanje sevov gliv

Dekstroza papež Agar se lahko več let uporablja za vzdrževanje izvedljivih glivskih sevov.

Za to se gliva goji v krompirjevih klinih dekstroze in ko gliva goji, je pokrita z mineralnim oljem. Olje je treba 45 minut sterilizirati v avtoklavu in imeti približno viskoznost od 300 do 330 saj. Olje mora presegati 1 do 2 cm konice okvirja.

QA

Iz vsake pripravljene parcele je treba odvzeti 1 ali 2 plošče in inkubirati pri 25 ° C 48 ur ali 20 ° C 96 ur. Dober nadzor sterilnosti je tisti, v katerem ni opaziti razvoja kolonij.

Uporabite lahko tudi znane ali certificirane kontrole, kot so:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton Mentagrophytes ATCC 9533. V vseh primerih se pričakuje dobra rast.

Reference

1. Britanski laboratoriji. Glycosado Pot. 2015. Na voljo na: Britanaalab.com
2. Neogen laboratoriji. Dekstroza krompir. Na voljo na: FoodSafety.Neogen.com
3. Laboratorij Insumolab. Dekstroza krompirjev agar. Na voljo na: Insumolab.Cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.
5. Hišna hiša g. Splošna mikologija. 1994.  2. izd. Centralna univerza v Venezueli, knjižnična izdaja. Venezuela Caracas.
6. Aceituno m. Vrednotenje mikrobiološke kakovosti v senčili za oči, kompaktni prah nacionalnega proizvodnega laboratorija, poroča Pharmacoea USP 2005. Diplomsko delo, da se odločite za naslov farmacevtskega kemika. Univerza v San Carlosu iz Gvatemale.
7. Cuétara m. Obdelava površinskih vzorcev. Ibero -ameriška revija Mycology. 2007; pp. 1-12