Ziehl-Neelsen obarvanje

Mycobacterium tuberculosis je vizualizirana z obarvanjem Ziehl-Neelsen

Kaj je obarvanje Ziehl-Neelsen?

The Ziehl-Neelsen obarvanje V tehniki barvanja za prepoznavanje odpornih mikroorganizmov, ki so v kislini za alkohol (AAR). Ime tega mikrobiološkega postopka se nanaša na njegove avtorje: bakteriolog Franz Ziehl in patolog Friedrich Neelsen.

Ta tehnika je diferencialna barvna vrsta, ki pomeni uporabo različnih barvil, da se ustvari kontrast med želenimi strukturami, ki jih je treba opazovati, razlikovati in nato identificirati. Obarvanje Ziehl-Neelsen služi za prepoznavanje nekaterih vrst mikroorganizmov.

Nekateri od teh mikroorganizmov so mikobakterije (na primer, Mycobacterium tuberculosis), Nocardias (na primer, Nokardija sp.) in nekaj enoceličnih zajedavcev (na primer, Cryptosporidium parvum). Številne bakterije je mogoče razvrstiti s skupno tehniko, imenovano Gramovo obarvanje.

Vendar nekatere bakterijske skupine potrebujejo druge metode, da jih prepoznajo. Tehnike, kot je obarvanje Ziehl-Neelsen, zahtevajo toplotne kombinacije s toploto, da se prvi pritrdijo na celično steno.

Potem pride postopek razbarvanja, ki omogoča pridobitev dveh rezultatov: odpornost ali občutljivost na razbarvanje kisline in alkohola.

Osnova

Temelj te tehnike obarvanja temelji na lastnostih celične stene teh mikroorganizmov. Stena tvori vrsto maščobnih kislin, imenovanih mikolične kisline; Za njih je značilno, da predstavljajo zelo dolge verige.

Kadar imajo maščobne kisline zelo dolge strukture, lahko te lažje zadržijo barvila. Nekatere bakterijske žanre je zelo težko barvati z obarvanjem z gramom, zaradi visoke vsebnosti mikoličnih kislin iz celične stene.

Pri obarvanju Ziehl-Neelsen se uporablja fenolna spojina Fuchsin Carbol, osnovno barvilo. To ima sposobnost interakcije z maščobnimi kislinami celične stene, ki je pri teksturi cerosa pri sobni temperaturi.

Vam lahko služi: monosaharidi

Obarvanje s fuchsinskim karbolom se izboljša v prisotnosti toplote, ker se vosek stopi in molekule za barvanje hitreje premikajo v celično steno.

Kasneje uporabljena kislina služi za razbarvanje celic, ki niso bile pobarvane, ker njihova stena ni bila povezana z barvilom; Zato je sila kisle kisline sposobna izločiti kislinsko barvilo. Celice, ki se upirajo tej razbarvanju.

Sekundarno barvilo

Po razbarvanju vzorca je to v nasprotju z drugim barvilom, imenovanim sekundarno barvilo. MustIleo Blue ali Malachite Green se običajno uporablja.

Sekundarno barvilo obarva v ozadju in posledično ustvarja kontrast struktur, ki so bile pobarvane v prvem koraku. Samo razbarvane celice absorbirajo drugo barvilo (protiutection) in vzamejo svojo barvo, medtem ko celice, odporne na kislino, ohranijo rdečo barvo.

Ta postopek se pogosto uporablja za identifikacijo Mycobacterium tuberculosis in Mycobacterium Leprae, ki se imenujejo odporne kisline-alkoholne bacile.

Reagenti

Primarno barvilo

Uporablja se 0,3 % Fuchsin Carbol (filtrirano). To barvilo pripravimo iz mešanice alkoholov: etanol fenola (90 %) ali metanola (95 %), v tej mešanici.

Odkrivanje rešitve

V tem koraku lahko uporabite 3 % raztopine alkoholne kisline ali 25 % žveplove kisline.

Sekundarno barvanje (nasprotniki)

Najbolj uporabljeno barvilo za kontrast v vzorcih je običajno 0,3 % metilen modro. Vendar pa se lahko uporabljajo tudi drugi, na primer 0,5 % malahit.

Vam lahko služi: timina

Tehnika

Nematoda, prikazana z Ziehl-Neelsen

Postopek obarvanja s kislino

Pripravite bakterijski razmaz

Ta priprava se izvede na čistem in suhem diapozitivu, po varnostnih ukrepih.

Frovis sušenje

Pustite, da se razmaza posuši pri sobni temperaturi.

Segrejte vzorec

Vzorec je treba segreti z nanosom ogenj na diapozitiv spodaj. Fiksacija z alkoholom je mogoče izvesti, če vonj ni pripravil s sputumom (zdravljen z natrijevim hipokloritom, da ga beli) in če ga ne bomo takoj pobarvali.

M. tuberkuloza je odpravljen z belilom in med postopkom obarvanja. Termofiksacija nezdravljenega sputuma ne bo ubila M. tuberkuloza, Medtem ko je fiksacija alkohola baktericid.

Pokrijte madež

Madež je prekrit z raztopino Fuchsin Carbol (osnovno osnovno barvanje).

Segrejte madež

To se naredi 5 minut. Opazite parno odred (približno 60 ° C). Pomembno je, da se ne pregrejete in se izognete kurjenju vzorca.

Glede na ogrevanje madežev bi morali biti zelo previdni pri segrevanju fuchsinskega karbola, še posebej, če se obarvanje izvaja na pladnju ali drugem zabojniku.

Pod diapozitivi je treba nanesti le majhen plamen z uporabo brisače razsvetljave, ki je bila prej navlažena z nekaj kapljicami kislega alkohola, metanola ali 70 % etanola. Izogibajte se uporabi velikega brisa, namočenega v etanolu, ker je to tveganje za požar.

Operite madež

To pranje je treba opraviti s čisto vodo. Če voda iz pipe ni čista, drgnjenje sperite s filtrirano ali destilirano vodo.

Pokrijte razmaz s kislim alkoholom

Ta kisli alkohol mora biti pri 3 %. Pokritost se izvaja 5 minut ali dokler vonj ni dovolj razbarvan, torej bledo roza.

Vam lahko služi: epiblast

Upoštevati je treba, da je kisli alkohol vnet; Zato ga je treba uporabiti zelo previdno. Izogibajte se, da ste blizu virov vžiga.

Operite madež

Pranje naj bo s čisto, destilirano vodo.

Pokrijte razmaz z barvilom

Lahko je malahitno zeleno barvanje (0,5 %) ali metilen modro (0,3 %) 1 ali 2 minuti, pri čemer je glasnejši čas, če je vonj tanek.

Operite madež

Ponovno je treba uporabiti čisto vodo (destilirano).

Odtok

Zadnji del diapozitiva je treba očistiti, madež.

Preglejte razmaz v mikroskopu

Uporabiti je treba cilj 100x in potopnega olja. Sistematično skenirajte razmaz in zapišite ustrezna opažanja.

Razlaga rezultate

Teoretično se mikroorganizmi, ki jih barvamo iz rdečkaste barve, veljajo za pozitivno alkoholno kislino (AAR+).

Nasprotno, če so mikroorganizmi barvani modri ali zeleni, odvisno od barvila, ki se uporablja kot protivolari.

Reference

1. Apurba, s. & Sandhya, b. (2016). Bistvene praktične mikrobiologije (1. izd.). Medicinski založniki Jaypee Brothers.
2. Bauman, r. (2014). Mikrobiologija z deseodami s telesnim sistemom (4. izd.). Pearson Education, Inc.
3. Dediščina, J., Evans, e. & Killington, a. (devetnajst devetdeset šest). Uvodna mikrobiologija (1. izd.). Cambridge University Press.
4. Morello, j., Granato, str. Wilson, m. & Morton, V. (2006). Laboratorijski priročnik in delovni zvezek iz mikrobiologije: aplikacije za oskrbo pacientov (11. izd.). McGraw-Hill Education.
5. Vasanthakumari, r. (2007). Učbenik mikrobiologije (1. izd.). B.Yo. Publikacije Pvt.