Polovica temeljev, priprave, uporabe in omejitev

On Polovica ali fermentacija glukoze je pol trden agar, posebej zasnovan za preučevanje oksidativnega in fermentacijskega presnove ogljikovih hidratov v pomembni skupini mikroorganizmov, ki se razlikujejo od enterobakterij.

Ustvarila sta ga Hugh in Leifson; Ti raziskovalci so spoznali, da običajni mediji za preučevanje proizvodnje kisline iz ogljikovih hidratov niso primerni za to specifično skupino bakterij.

Do. Sredi bazalne reklame. B. Cevi s polovico posejane. Vir: A in B fotografije, ki jih je posnel avtor MSC. Marielsa Gil.

To je zato, ker neentenski negativni bacili običajno proizvajajo majhne količine kislin, za razliko od enterobakterij.

V tem smislu ima medij posebne značilnosti, ki lahko zaznajo majhne količine kisline, tako z oksidativnim kot fermentacijskim. Te razlike so povezane s količino peptonov, ogljikovih hidratov in agarja.

Ta medij vsebuje manj peptonas in večjo koncentracijo ogljikovih hidratov, na ta način se izdelki, ki alkhetijo medij, zmanjšajo kot posledica presnove beljakovin in proizvodnja kislin z uporabo ogljikovih hidratov.

Po drugi strani pa zmanjšanje količine agarja daje prednost razširjanju kisline, ki jo proizvaja celoten medij, poleg opazovanja gibljivosti.

Medij je sestavljen iz peptona, natrijevega klorida, bromotimol modrega, dipotassijevega fosfata, agarja in ogljikovega hidrata. Najpogostejši ogljikovi hidrat je glukoza, druge pa se lahko uporablja v skladu s tistim, ki ga želite preučiti, kot so laktoza, maltoza, ksiloza.

[TOC]

Osnova

Kot vsaka kulturna sredstva mora tudi okolje vsebovati prehranske snovi, ki zagotavljajo rast bakterij; Te snovi so peptone.

Ogljikovi hidrat zagotavlja energijo in hkrati služi za preučevanje vedenja mikroorganizma proti njemu.

Medij vsebuje razmerje med peptonom/ogljikovim hidratom 1: 5 Za razliko od običajnih medijev 2: 1. To zagotavlja, da količina alkalnih aminov, ki nastanejo zaradi razgradnje peptonov, ne nevtralizira tvorbe šibkih kislin.

Vam lahko služi: sfingomielin: kaj je, struktura, funkcije, sinteza

Po drugi strani medij vsebuje natrijev klorid in dipotassijev fosfat. Te spojine se osmotično stabilizirajo na sredini in uravnavajo pH. Bromootimol Blue je indikator pH, zaradi česar je barva rumene zelene s proizvodnjo kisline.

Nekateri mikroorganizmi lahko uporabljajo ogljikove hidrate z oksidativnim ali po fermentacijski poti, drugi.

To je odvisno od značilnosti vsakega mikroorganizma. Na primer, nekateri strogi aerobni mikroorganizmi lahko oksidirajo nekatere ogljikove hidrate, neobvezni anaerobi.

Končno pride do spremembe medija, ki ga priporoča CDC, ki vsebuje posebno osnovo z rdečim fenolom kot indikatorjem.

Proces oksidacije

Proces oksidacije glukoze ne zahteva fosforilacije glukoze, kot se pojavlja v procesu fermentacije. V tem primeru je skupina aldehida oksidirana v karboksilno skupino, kar ima za posledico glukonsko kislino. To je oksidirano na 2-zo-glikonično.

Slednje ali dve molekuli piruvične kisline se kopičijo ali razgradijo. Ta sistem potrebuje prisotnost kisika ali anorganske spojine kot končni sprejemnik elektronov.

Proizvodnja kislin po tej poti je šibkejša od tiste, ki jo dobimo s fermentacijsko potjo.

Fermentacijski postopek

Za fermentacijo glukoze s katero koli od razpoložljivih cest je treba najprej fosforilirati, da postane glukoza-6-fosfat.

Fermentacija glukoze se lahko pelje na več cest, glavna je pot Embdena-Meyerhof-Parna razgradnje pentoze.

Izbrana pot bo odvisna od encimskega sistema, ki ima mikroorganizem.

Prek de embden-meyerhof-Parna

V fermentaciji glukoze s strani Embden-Meyerhof-Parna. Od tam izvira posredniška snov, ki je piruvična kislina.

Vam lahko služi: fotoperiod

Od tam se oblikujejo različne vrste mešanih kislin, ki se lahko razlikujejo od ene vrste do druge.

Ta sistem se pojavi v odsotnosti kisika in potrebuje organsko spojino kot končni sprejemnik elektronov.

Encoudoroff pot

V fermentaciji glukoze po poti Intner-Doucoroff se glukozni 6-fosfat odpravi na glukon-ᵼ-lakton-6-fosfat in od tam oksidira v 6-fosfogluvat in 2-ZO-3-dededexi-6 fosfoglukonat, končno oblikovati piruvično kislino. To prek potrebuje kisik, tako da obstaja glikoliza.

Pot za razgradnjo monofosfata Pentose ali Warburg-Dikens prek

Ta pot je hibrid prejšnjih 2. Začne se podobno poti Entner-Doudoroff, vendar se pozneje gliceraldehid-3-fosfat tvori kot predhodnik piruvične kisline, kot je to primer na poti Embden-Meyerhof-Parna.

Priprava

Tehtanje:

2 gr peptona

5 gr natrijevega klorida

10 gr-glukoze (ali ogljikovih hidratov, ki bo pripravljen)

0,03 gr bromotimol modre barve

3 gr agarja

0,30 gr dipotaznega fosfata

1 liter destilirane vode.

Zmešajte vse spojine, razen ogljikovih hidratov in se raztopimo v 1 liter destilirane vode. Segrejte in mešajte, dokler se v celoti raztopi.

Pri ohlajanju pri 50 ° C dodamo 100 ml glukoze 10% (filtrirano).

Aseptično porazdelite 5 ml medija v epruvetah z bombažnim pokrovom in avtoklavacijo pri 121 ° C, 15 kilogramov tlaka 15 minut.

Pustite v navpični položaj.

Srednji pH mora biti 7, 1. Barva pripravljenega medija je zelena.

Hranite v hladilniku.

Prijave

Medij je posebno sredstvo za določitev presnovnega vedenja mikroorganizma proti ogljikovi hidratu. Še posebej za tiste, ki tvorijo kisline na redkega, šibkega ali ničelnega.

Posejan

Za vsak mikroorganizem sta potrebna 2 cevi, obe sta inokulirani z mikroorganizmom, da bi preučevali. Kolonija je vzeta z ravnim ročajem in v središču cevi je narejena punkcija, ne da bi dosegla dno; Lahko naredite več prebojev, dokler vas ne zanima opazovanje gibljivosti.

Vam lahko služi: alanin: značilnosti, struktura, funkcije, biosinteza

V eni od cevi dodamo plast sterilnega tekočega vazelina ali sterilnega staljenega parafina (približno 1 do 2 ml) in je označen s črko "F". Druga cev je originalna in označena s črko "O". Obe cevi se inkubiramo pri 35 ° C in ga opazimo na dan do 3 do 4 dni.

Interpretacija

Metabolizem in proizvodnja plina

Tabela: Razvrstitev mikroorganizmov glede na njihovo vedenje v odprtih (oksidativnih) in zaprtih (fermentacijskih) cevi (fermentacijskih)

Vir: Izdelal avtorja MSC. Marielsa Gil

Plin opazimo s tvorbo mehurčkov ali premikom agarja.

Treba je opozoriti, da organizem, ki oksidira samo glukozo, vendar ne fermente. Zato bo v tej situaciji zaprta cev izpuščena za preučevanje drugih ogljikovih hidratov.

Gibljivost

Poleg tega je na sredini gibljivosti videti.

Pozitivna gibljivost: Rast, ki ni omejena na območje inokulacije. Obstaja rast proti strani cevi.

Negativna gibljivost: Rast samo v začetnem inokulumu.

QA

Kot nadzor kakovosti lahko uporabite naslednje seve: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa in Moraxella sp. Pričakovani rezultati so:

1. coli: Glukozni fermenter (tako rumene kot plinske cevi).
2. aeruginosa: Glukozni oksidader (rumena odprta cev in zeleno ali modro tesnilo).
3. Moraxella sp: Neremoval (zelena ali modra odprta cev, zeleno tesnjenje cev).

Omejitve

-Nekateri mikroorganizmi ne morejo rasti v okolju. V teh primerih se test ponavlja, vendar do srednjega 2% seruma ali 0,1% ekstrakta kvasa.

-Oksidacijske reakcije pogosto opazimo blizu površine, preostali del medija pa je lahko zelen, na enak način kot pozitiven.

Reference

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testi za identifikacijo bakterij kliničnega pomena. 3. izd. Pan -ameriški uvodnik. Buenos Aires. Argentina.
4. Laboratoriji Francisco Soria Melguizo. 2009. Glukoznega medija. Dostopno na: http: // f-soria.je
5. Conda Laboratories. Sredi glukoze. Na voljo na: Condalab.com
6. BD laboratoriji. 2007. Bazalnega medija. Na voljo na: BD.com