Polovična fundacija Löwenstein-Jensen, priprava in uporaba

On Srednji Löwenstein-Jensen Je selektivni trden medij za izolacijo in razvoj bakterij rodu Mycobacterium, kot je Mycobacterium tuberculosis, M. Avij, med drugim, z izjemo vrste Leprae, ki jih ni mogoče obdelovati.

Bakterije rodu Mycobacterium ne rastejo v običajnih kulturnih medijih, zato je bilo treba oblikovati posebno sredstvo za njegovo izolacijo. Originalni medij je ustvaril Löwenstein, nato pa ga je spremenil Jensen.

Half Löwenstein-Jensen s kolonijami Mycobacterium tuberculosis. Vir: Agarwal et al / Biomed Central Ltd., Z dovoljenjem knjižnice biologije

Sprememba je bila sestavljena iz izločitve rdečega barvila Kongo, ki jo je nadomestila za večjo koncentracijo malahita. Prav tako je spremenila koncentracije magnezijevega citrata in monopotaznega fosfata.

Medij Löwenstein-Lose trenutno vsebuje papatni škrob, asparragin, magnetni citrat, monopofazni fosfat, magnetni sulfat, malahitno zeleno, nalidíxico kislina, cikloheksimid.

Mikobakterije so običajno izolirane z mesta, ki niso sterilne, na primer sputum, urin, abscesi. To pomeni, da bo večina vzorcev vsebovala običajno mikrobioto območja in patogen.

Zato medij Löwenstein-Jensen vsebuje vrsto zaviralcev v svoji sestavi, ki jih predstavljajo malahitski zeleni, antibiotiki in protiglivični.

Poleg tega je treba vzorce, ki prihajajo iz nesterilnega mesta.

[TOC]

Osnova

Prisotnost jajca in glicerina v mediju Löwenstein-Jensen spodbuja rast mikobakterij, ker zagotavljajo maščobne kisline in beljakovine, potrebne za razvoj teh mikroorganizmov.

Medij Löwenstein-Jensen vsebuje zeleno malahit, ki je spremljajoč zaviralec mikrobiote. Vendar vsebuje tudi nalidíxic kisline (35 µg/ml), ki zavira gram negativno mikrobioto, cikloheksimid (400 µg/ml), ki zavira glive saprofitov in kvasovke ter linč (2µ/ml), ki zavira pozitivno mikrobioto gram, kar zavira pozitivno mikrobioto gram.

Nekatere poslovne hiše raje dodajo naslednjo kombinacijo antibiotikov: Polymixina B 200.000 enot/L, amfotericin B 10 mg/L, karbenicilin 50 mg/l in trimetoprima 10 mg/l.

Ta medij ne vsebuje agarja, zato se utrditev medija zgodi s koagulacijo albumina, ki je prisoten v jajcu med sterilizacijo.

Priprava

Tehtajte 37,3 g dehidriranega medija v 600 ml destilirane vode, ki je bila prej dodana 12 ml glicerola. Zmes segrevamo, pogosto mešamo do njegovega skupnega raztapljanja. Avtoclavar medij pri 121 ° C 15 minut.

Vam lahko služi: 12 stopenj človeškega razvoja in njegove značilnosti

Po drugi strani je treba v aseptičnih pogojih pripraviti homogeno suspenzijo 1000 ml svežih jajc. Dodajte suspenzijo jajca pri 600 ml, pripravljene pri temperaturi 50 - 60 ° C, pri čemer se izognemo zračnim mehurčkom.

Raztopine antibiotikov se dodajo tudi po sterilizaciji v Autoclaveu.

Medij nalijemo v sterilne epruvete z navojem. Cevi segrejte pri 85 ° C 45 minut v nagnjenem položaju.

Barva pripravljenega medija je aguamarinsko zelena in lahko predstavlja belkaste točke za prisotnost jajčnih lipidov.

Srednji pH mora biti 7,2 ± 0,2

Shranite hladilne cevi in ​​zaščiteno pred neposredno svetlobo do uporabe. Potopite se pred setvijo.

Obstaja sprememba medija, imenovanega "Gruft Modifikacija Löwenstein Jensen". To vsebuje enake spojine kot klasični medij, vendar se doda RNA-5mg/100 ml.

Prijave

Löwenstein-Jensen medij se uporablja za izolacijo mikobakterij iz različnih vrst vzorcev. Priporočljivo je opraviti obarvanje Ziehl-Neelsen na kateri koli vzorec, v katerem obstaja sum na prisotnost mikobakterij.

Nekateri vzorci prihajajo z sterilnih mest, drugi pa ne. Nerodni vzorci morajo biti dekontaminirani, saj je primer:

Sputum

Vzorci sputuma morajo biti dekontaminirani na naslednji način: Določite količino vzorca sputuma v ML in dodajte enako količino 4% NaOH in Inckube na 37 ° C.

Mešanico pogosto pretresite v obdobju 30 minut. Nato 30 minut centrifugue pri 3000 vrtljajih.

Zavrzite supernatant na fenolni raztopini. Uporabite sejalno usedlin, najprej pa je treba pH nevtralizirati.

Za nevtralizacijo usedlin se uporablja h₂SW₄ pri 5% v prisotnosti indikatorja rdečega fenola, dokler ne vodi do nevtralnega pH, ki izvira iz barve lososa.

Želodčno pranje, bronhialno pranje in bronhialni aspirat

V tem primeru mora biti vzorec centrifuga pri 3000 vrtljajih v minuti 30 minut. Supernatant se zavrže in usedlina se uporablja. Za dekontaminiranje usedline dodamo 3 ml 4% NaOH in pogosto mešamo pri 37 ° C za obdobje pol ure.

Vam lahko služi: stroma (histologija)

Spet centrifuga, supernatant se zavrže in usedlina se uporablja. Slednji mora biti nevtraliziran, kot je razloženo v vzorcu sputuma.

Urin

Vzorec pustite v hladilniku 24 ur. Ločite supernatant. Preostali usedlin mora biti centrifugiran 30 minut pri 3000 RMP. Supernatant znova zavrzite in usedlin obnovite s 3 ml sterilne fiziološke raztopine.

Dodajte 3 ml 4% NaOH in nadaljujte z dekontaminacijo in nevtralizacijo, kot je opisano prej.

Ascitna tekočina, plevralna tekočina, cerebrospinalna tekočina

Pri tej vrsti vzorca je centrifugiran in supernatant zavrže. Naredite gram v usedlini ali opazujte neposredno v mikroskopu; Če bakterij ne opazimo, prehod dekontaminacije ni potreben in niti nevtralizacija.

V tem primeru je mogoče vzorec sejati neposredno s pomočjo usedline. Če obstajajo bakterije, nadaljujte z dekontaminiranjem in nevtraliziraj, kot je opisano zgoraj.

Biopsije

To vrsto vzorca je treba dodati 5 ml destilirane vode do poznejše centrifuge pri 1500 vrt./min. Zavrzite supernatant in centrifugirajte usedlin pri 3500 vrtljajih v minuti 30 minut. Uporabite usedlin za sejanje kulturnega medija.

Hiofare laringeal

Blad je treba vnesti v sterilno cev, ki vsebuje enake dele destilirane vode in 4% NaOH. Bris je treba stisniti na stene cevi, tako da je vzorec razredčen v tekočini. Centrifuga in uporabite usedline. Nevtralizirajte usedlin, kot je že opisano.

Posejan

Löwenstein-Jensen Media cenokuliramo z dodajanjem 0,5 ml vzorca na površini medija. Zavrtite cev, da razdelite vzorec po celotnem mediju. Ne nosite platinaste ročaja.

Lahko sejete drugo cev, ki vsebuje pol Stonebrink, da izolirate Mycobacterium bovis in druge vrste, ki ne rastejo v okolju Löwenstein-Jensen.

Inkubacija

Inokulirane cevi se inkubirajo v aerobiozi pri 37 ° C, z rahlo lenim pokrovom in nagnjeni k približno 5 ° in zaščiteni pred svetlobo. Okolje z ogljikovim dioksidom je mogoče obogatiti s 5-10%. Preverite pridelke dvakrat na teden do pojavljanja kolonij.

Lahko vam služi: nosni eksudat: za kaj je to, postopek, gojenje

Ko se vzorec absorbira, se tapasi prilagodijo. Najvišji čas inkubacije je 8 tednov, če po tem času ni nobene rasti kot negativna.

QA

Kot nadzor kakovosti lahko uporabite naslednje seve:

Mycobacterium tuberculosis ATCC 27294,  Mycobacterium kansasii ATCC 12478, Mycobacterium avium ATCC 19291, Mycobacterium bovis ATCC 19219, Mycobacterium Fortuitum ATCC 6841, Escherichia coli ATCC 25922, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Cryptococcus neoformans ATCC 32045

Za prve tri omenjene vrste se pričakuje odličen razvoj M. Fortuitum Rast mora biti dobra, medtem ko za M. Bovis Pričakuje se malo ali nič. Medtem ko je treba vrste, ki niso rod Mycobacterium.

Omejitve

Pripravljeni medij se mora zaščititi pred svetlobo, dolgotrajno izpostavljenost. To je zato, ker je malahitska zelena fotosenzibilna.

Medij, saj vsebuje jajce, je mogoče zlahka onesnažiti, če se ne manipulira aseptično. Lahko ga raztopimo, če je onesnažen s proteolitičnimi bakterijami.

Gojenje in manipulacija bakterij rodu Mycobacterium zahteva usposobljeno osebje, ki se zaveda ukrepov biološke varnosti, ki jih je treba izpolniti, da se ne bi onesnažili ali onesnažili druge.

HCl ne smemo uporabljati pri prehodu nevtralizacije zaradi nastajanja natrijevega klorida, ki je lahko strupen za koch bacillus.

Vzorce je treba hraniti hladilno in zaščiteno pred svetlobo, dokler niso obdelani.

Sklic

1. Laboratoriji Francisco Soria Melguizo. 2009. Löwenstein-Jensen Selektivni medij. Na voljo na: F-SORIA.je
2. Britanski laboratoriji. 2017. Löwenstein-Jensen Medium. Na voljo na: Britanaalab.com.
3. Neogen laboratoriji. Löwenstein-Jensen Medium. Na voljo na: FoodSafety.Neogen.com.
4. "Sredi Löwenstein-Jensen." Wikipedia, brezplačna enciklopedija. 20. november 2018, 15:15 UTC. 24. april 2019, 18:34. Wikipedija.org
5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Pan -ameriški uredništvo s.Do. Argentina.
7. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testi za identifikacijo bakterij kliničnega pomena. 3. izd. Pan -ameriški uvodnik. Buenos Aires. Argentina.