Tekoča kromatografija z visoko učinkovitostjo (HPLC), oprema, vrste

The Tekoči kromatografija z visoko učinkovitostjo To je instrumentalna tehnika, ki se uporablja pri kemijski analizi, s katero je dovoljeno ločevati mešanice, čiščenje in količinsko opredelitev njegovih komponent, pa tudi druge študije. Znano je s kratico HPLC, ki izhaja iz angleščine: Visokozmogljiva tekoča kromatografija.

Tako, kot že ime pove, deluje z manipulacijo s tekočinami. Te so sestavljene iz mešanice, sestavljene iz analita ali vzorca, ki vas zanima, in eno ali več topil, ki delujejo kot mobilna faza; to pomeni tisto, ki analit vleče po celotni ekipi HPLC in stolpcu.

HPLC oprema. Vir: dqwyy [cc by-sa 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licence/by-sa/4.0)]

HPLC v številnih podjetjih široko razširja laboratoriji za analizo kakovosti; kot so farmacevti in hrana. Zadevni analitik mora pripraviti vzorec, mobilno fazo, preveriti temperaturo in druge parametre ter ceste postaviti v kolo ali vrtiljak, tako da oprema samodejno izvede injekcije.

Oprema HPLC je povezana z računalnikom, s katerim lahko opazimo ustvarjene kromatograme, poleg tega pa zaženete analizo, nadzirate pretok mobilne faze, programirate vrsto elucije (izokratskega ali po gradientu) in vklopite detektorje (UV -VIS ali masni spektrofotometer).

[TOC]

Osnova

Za razliko od običajne tekoče kromatografije, kot sta papir ali stolpec, polnjen z gelskim silicijevim silicijevim. Namesto tega delajte z visokimi črpalkami, ki namakajo mobilno ali eluentno fazo skozi stolpec z večjo intenzivnostjo.

Na ta način ni potrebno.

Vam lahko služi: karbonoidi: elementi, značilnosti in uporabe

Toda učinkovitost te tehnike ni posledica izključno te podrobnosti, temveč tudi majhne polnilne delce, ki sestavljajo stacionarno fazo. Ker je manjše, je njegovo območje stika z mobilno fazo večje, zato bo z analitom v boljšo stopnjo sodeloval in njegove molekule bodo ločene več.

Ti dve značilnosti in dejstvo, da tehnika omogoča detektorsko spajanje, naredi HPLC veliko višji od fine ali papirnate kromatografije. Ločitve so učinkovitejše, mobilna faza se bolje premika skozi stacionarno fazo, kromatogrami pa omogočajo zaznavanje nekaterih analiz v analizi.

Oprema

Poenostavljen diagram delovanja opreme HPLC. Vir: Gabriel Bolívar.

Zgoraj je prikazan poenostavljen diagram, kako deluje ekipa HPLC. Topila najdemo v njihovih zabojnikih, razporejena s cevmi, da črpalka nosi majhno količino njih v opremo; Imamo mobilno fazo.

Mobilna ali eluentna faza mora biti najprej nositi, tako da mehurčki ne vplivajo na ločitev molekul analita, ki se meša z mobilno fazo.

Kromatografski stolpec je nameščen v pečici, ki omogoča urejanje temperature. Tako za različne vzorce obstajajo ustrezne temperature za doseganje ločevanja z visoko uspešnostjo, pa tudi širok katalog stolpcev in vrst polnil ali stacionarnih faz za posebno analizo v specifični analizi.

Mobilna faza z raztopljenim analitom vstopi v stolpec in iz nje najprej razseže molekule, ki "čutijo" manj afiniteto do stacionarne faze, nato pa eluirajo tiste, ki jih najbolj zadržujejo. Vsaka molekula Eluida ustvari signal, vizualiziran v kromatogramu, kjer opazimo zadrževalni časi ločenih molekul.

Vam lahko služi: utekočinjanje: koncept, plini, tla in seizmični, semenski

In na drugi strani se mobilna faza po prehodu skozi detektor konča v zabojniku.

HPLC vrste

Obstaja veliko vrst HPLC, med vsemi pa so najbolj izstopajoči naslednji štirje.

Normalna fazna kromatografija

Običajna fazna kromatografija se nanaša na to, kjer je stacionarna faza polarna narava, apolarna mobilna pa. Čeprav se imenuje normalno, je v resnici najmanj uporabljen, saj je obratna faza najbolj razširjena in učinkovita.

Inverzna fazna kromatografija

Ker je obratna faza, je stacionarna faza apolarna in polarna mobilna faza. To je še posebej koristno pri biokemični analizi, saj se veliko biomolekul bolje raztopi v vodni in polarni topili.

Ionska izmenjava kromatografija

Pri tej vrsti kromatografije se analit s pozitivno ali negativno obremenitvijo premika skozi stolpec, ki nadomešča ione, v katerih je. Večja je obremenitev, večja je zadrževanje, zato se pogosto uporablja za ločevanje ionskih prehodnih kovin.

Molekularna izključevalna kromatografija

Ta kromatografija je namesto ločevanja odgovorna za čiščenje nastale mešanice. Kot že ime pove, se analit loči več, odvisno od tega, kako povezan s stacionarno fazo, ampak glede na njegovo molekulsko velikost in mase.

Najmanjše molekule bodo bolj zadržane kot velike molekule, saj slednje niso ujete med pore polimernih polnil stolpcev.

Prijave

HPLC omogoča tako kvalitativno kot kvantitativno analizo. Glede na kvalitativno je mogoče zaznati prisotnost določene spojine pri primerjavi zadrževalnih časov kromatograma. Ta prisotnost lahko kaže na bolezen, ponarejanje ali uporabo zdravil.

Vam lahko služi: topilo in topilo

Zato je ekipa del diagnostičnih laboratorijev. Prav tako je v farmacevtskih industrijah, saj omogoča preverjanje čistosti izdelka, pa tudi kakovost istega glede na njegovo raztapljanje v želodčnem okolju. Začetni materiali predložijo tudi HPLC, da jih očistijo in zagotovijo boljše rezultate v sintezi zdravil.

HPLC vam omogoča analizo in ločevanje kompleksnih beljakovinskih mešanic, aminokislin, ogljikovih hidratov, lipidov, porfirinov, terpenoidov, v bistvu.

In končno, molekularna izključevalna kromatografija vam omogoča izbiro polimerov različnih velikosti, saj so nekateri morda manjši ali veliki. Na ta način dobimo izdelke z nizko ali visoko povprečno molekulsko maso, ki je to odločilni dejavnik v njegovih lastnostih in prihodnjih aplikacijah ali sintezi.

Reference

1. Dan, r., & Underwood, a. (1989). Kvantitativna analitična kemija. (Peti izd.). Pearson Prentice Hall.
2. Bussi Juan. (2007). Tekoča kromatografija z visoko učinkovitostjo. [PDF]. Okreval od: prst.Edu.Oh
3. Wikipedija. (2019). Visokozmogljiva tekoča kromatografija. Pridobljeno iz: v.Wikipedija.org
4. Clark Jim. (2007). Visokozmogljiva tekoča kromatografija. Okrevano od: Chemguide.co.Združeno kraljestvo
5. Matthew Barkovič. (5. december 2019). Visokozmogljiva tekoča kromatografija. Kemija librettexts. Okrevano od: kem.Librettexts.org
6. G.Str. Thomas. (15. aprila 2013). Visokozmogljiva tekoča kromatografija (HPLC) - Metode, koristi in aplikacije. Okreval od: azom.com