Sabouraud agar kaj je, fundacija, priprava, uporablja

On Sabouraud agar, Znan tudi kot Sabouraud Dexstrose Agar, je trden medij za kulturo, še posebej obogaten za izolacijo in razvoj gliv, kot so kvasovke, plesni in dermatofiti.

Zato tega medija v laboratoriju za mikrobiologijo ne more manjkati, da bi preučil prisotnost patogenih ali oportunističnih gliv, bodisi kliničnih ali ne -kliničnih vzorcev. Idealen je tudi za rast nitastih bakterij, kot so Streptomices in Nocardias. Njegova uporaba je zelo široka, saj jo je mogoče uporabiti v človeški, živalski, zelenjavni in industrijski mikologiji.

Do. Sabouraud agar brez seja. B. Sabouraud agar, posajen s kvasom. Vir: Fotografije, ki jih je posnel avtor MSC. Marielsa Gil

Ta medij je leta 1896 ustvaril izjemni dermatolog Raimond Sabouraud, ki je postal specialist, ki je bil po vsem svetu priznan pri motnjah lasišča, ki ga povzročajo predvsem dermatofiti.

Njeno ustvarjanje je bilo tako pomembno, da se je od takrat uporabljalo in se vzdržuje danes, čeprav z nekaj spremembami.

Čeprav je posebna za glive, lahko v tej srednji bakteriji rastejo, zato je za vzorce z mešano floro potrebna vključitev antibiotikov v njegovo pripravo in tako zavira rast bakterijske flore, ki je lahko prisotna.

Izbira antibiotika je treba skrbno izvesti in upoštevati vrsto gliv, ki jih je treba obnoviti, saj so nekatere zavirane v prisotnosti nekaterih snovi.

Osnova

Sabouraud dexstrose agar je sredstvo.6 ± 0.2, vendar se lahko razvijejo bakterije, predvsem v dolgotrajnih inkubacijah.

Medij vsebuje pepton živalskega kazeina in digreanskega tkiva, ki zagotavljajo vir ogljika in dušika za razvoj mikroorganizmov.

Vsebuje tudi visoko koncentracijo glukoze, ki deluje kot vir energije, ki daje prednost rasti gliv nad bakterijami. Vse to pomešano z agar -agar, komponento, ki vam daje ustrezno doslednost.

Po drugi strani je lahko Sabouraud Dexstrose Agar selektiven, če dodamo antibiotike.

Z antibiotiki je še posebej koristno pri vzorcih ran, odprtih razjed ali v katerem koli vzorcu, v katerem obstaja velika bakterijska kontaminacija.

Večina uporabljenih kombinacij sabouraud dekstroze z antibiotiki

-Sabouraud agar s kloramfenikolom: idealno za obnovo kvasovk in nitastih gliv.

-Sabouraud agar z gentamicinom in kloramfenikolom: Skoraj vse nitaste glive in kvasovke rastejo v tem mediju in zavira veliko število bakterij, vključno z enterobakterij, pseudomonas in Staphylococcus.

-Sabouraud agar s cikloheksimidom: še posebej je uporaben za vzorce iz kože ali dihal, dokler je sum dimorfnih gliv.

Cikloheksimid je treba uporabljati previdno; Čeprav se uporablja za zaviranje rasti nepatogenih ali okoljskih gliv in kvasovk, ki so lahko prisotne kot onesnaževala v vzorcu, zavira tudi rast nekaterih gliv, kot so Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Boydii Allescheria, Penicillium sp in druge oportunistične glive.

-Sabouraud agar s kloramfenikolom in cikloheksimidom: v glavnem se uporablja za izolacijo dermatofitov in dimorfnih gliv. Ima neprijetnosti, ki zavirajo nekatere vrste oportunističnih gliv, kot so Candida brez albicanov, Aspergillus, Zigomicetos ali C. Neobormans.

-Sabouraud agar s kloramfenikolom, streptomicinom, penicilinom G in cikloheksimidom: Idealen je za izjemno onesnažene vzorce z glivicami bakterij in saprofitov, vendar ima neprijetnost zavirati rast rasti Actinomyces in nocardias, Poleg zgoraj omenjenih oportunističnih gliv.

Vam lahko služi: postopek hominizacije: značilnosti in faze

Priprava

Če imajo ločene sestavine, jih je mogoče pripraviti na naslednji način:

Sabouraud Dexstrose 

Tehtanje:

- 40 gr dekstroze

- 10 gr peptona

- 15 gr agar -agar

- Izmerite 1000 ml destilirane vode

Vse sestavine so mešane, pH je prilagojen na 5,6. Topilo se raztopi z vrenjem, 20 ml medija se porazdeli v 25 x 150 mm cevi, brez zadrževanja in z bombažnim pokrovom.

Cevi s pokrovom bombaža. Vir: Fotografija avtorja MSC. Marielsa Gil

V skladu z razpoložljivostjo se lahko uporabijo tudi drugi ukrepi cevi.

Avtoklav jemljejo 10 minut v ozračje tlaka (121 ° C). Ne smete preseči avtoklaviranega časa. Ko zapustite avtoklav, so cevi nagnjene s pomočjo podpore, dokler se ne strdijo v flavti.

Drug način je, da sestavine raztopimo s segrevanjem, dokler ne zavre. V isti avtoklavični feloli 10 minut in nato razdelite 20 ml v Petriji.

Če je na voljo medij za dekstrozo Sabouraud, ki že vsebuje vse sestavine, je določen znesek, ki jo določi komercialna hiša za liter vode. Preostali koraki so enaki zgoraj opisanim.

Sabouraud Dexstrose Agar (Emmons Modifikacija)

Tehtanje:

-  20 gr dekstroze

- 10 gr peptona

-  17 gr agar -agar

-  Izmerite 1000 ml destilirane vode

Vse sestavine so mešane, pH je prilagojen na 6,9. Nadaljujte na enak način v prejšnjem primeru.

Obstajajo komercialne hiše, ki ponujajo medij z vsemi sestavinami. V tem primeru tehtajte in pripravite način, kako ga opiše vložek.

Sabouraud Dexstrose Agar (Emmons Modification) s kloramfenikolom

Kloranfenikol matična rešitev

- Tehtamo 500 mg baze kloramfenikola

- Izmerite 100 ml 95% etanola

- Mešanje

Medij Sabouraud Dexstrose (Emmons) je pripravljen, kot je že opisano in dodatno za vsak liter dodajanja 10 ml matične raztopine kloranfenikola pred Autoclavic.

Sabouraud Emmons s cikloheksimidom dekstrozo

Raztopina matere cikloheksimida

- Tehtamo 5 gr cikloheksimida

- Izmerite 100 ml acetona

- Mešanje

Sabouraud dexstrose apoure.

Sabouraud dexstrose agar (Emmons) s kloramfenikolom in cikloheksimidom

Medij Sabouraud dekstroze (EMMONS) je pripravljen, kot je že opisano in dodatno za vsak liter dodajanja 10 ml matične raztopine kloranfenikola in 10 ml matične raztopine cikloheksimida pred avtoklaviranjem.

Vam lahko služi: znanosti, ki so povezane z biologijo

Druge antibiotike, ki jih je mogoče dodati

dvajset.000 do 60.000 enot penicilina na liter medija.

30 mg streptomicina na liter medija.

Oba morata biti vključena po mediju, rahlo ohlajena (50-55 ° C).

0,04 g neomicina na liter medija.

0.04 g gentamicina na liter medija.

Posebni premisleki

Varnost je raje posejanje sabourauda dekstroznega agarja v cevi v obliki klina (nagnjene v vrhov flavte) in ne v petrijskih ploščah, da se izognemo disperziji in vdihavanju spor.

Pomembno je, da so epruvete s starostjo Sabouraud prekrite bombaž in ne s pokrovom niti, saj se je pokazalo, da pol -aerobni pogoji zavirajo nastanek zbiranja v nekaterih sevih, na primer Coccidioides immitis. Poleg tega je večina gliv aerobe.

V primeru uporabe pokrova niti, ni tesno zaprtega.

QA

Pripravljeni mediji je treba nadzorovati kakovost, da se preveri njihov pravilen delovanje. Za to so posejani določeni sevi.

Za Sabouraud Dexstrose Candida albicans, ki mora imeti odlično rast. Druga plošča je inokulirana s sevi iz Escherichia coli, mora biti popolnoma zaviran.

Inkubirana je tudi plošča brez inokulacije, v kateri noben mikroorganizem ne bi smel rasti.

Za sabouraud dexstrose agar s kloramfenikolom in cikloheksimidom  Trichophyton Mentagrophytes, se mora dobro razviti. Druga plošča je inokulirana s sevom Aspergillus flavus, v katerem mora biti malo rasti ali ne -rasti. Poleg tega se inkubira nekulirajoča plak, da se pokaže svojo sterilnost.

Za sabouraud dekstrozo s cikloheksimidom, sevi Candida albicans, Trichophyton rubrum  tudi Canis microsporum, ki mora pokazati dobro rast.

Prav tako sev Aspergillus flavus, izkazovanje redke rasti ali ne -rasti. Končno inkubirajte ploščo brez inokuliranja za nadzor sterilnosti.

Prijave

Primarno gojenje

Klasični sabouraud dexstrose agar vsebuje 4 gr dekstroze in je odličen kot primarno sredstvo za izolacijo, saj prikazuje značilno morfologijo vsake glive.

Odličen je tudi za prikaz proizvodnje pigmentov. Vendar ni najprimernejše sredstvo za opazovanje sporulacije.

Prav tako se priporoča gojenje Blastomyces dermatitidis, ki jo zavira visoka koncentracija sedanje glukoze.

Po drugi strani je treba upoštevati določene premisleke.

Nekatere glive se bolje razvijejo pri sobni temperaturi, kot so kalupi, druge se uspešno razvijejo pri 37 ° C, kot so nekateri kvasovki, druge pa se lahko razvijejo pri obeh temperaturah (dimorfne glive).

Zato je včasih potrebno.

Na primer, Sporothrix Schenckii Posejana je na dveh krožnikih; Ena je inkuba pri sobni temperaturi, da dobimo fazo plesni, drugo pa se inkubira pri 37 ° C, da dobimo fazo uppaduriform, v slednjem.

Lahko vam služi: glukoza oksidaze: značilnosti, struktura, funkcije

V drugih primerih, kot v vzorcih mithoma, se posejemo dve plošči Agar Sabouraud, ena s kloramfenikolom in drugi s cikloheksimidom. Prva bo omogočila rast vzročnih povzročiteljev mitoma mitskega izvora (eumicetoma) in drugih vzročnih zdravil micetomov bakterijskega izvora, kot so aktinomicetomi.

Sporulacija

Agar Sabouraud Dextrose, ki ga spreminja Emmons.

V tem mediju, če lahko povrnete seve iz Blastomyces dermatitidis.

Ohranitev

Za ohranjanje glivskih pridelkov jih je mogoče shraniti v hladilniku (2-8 ° C). Čas ohranjanja se lahko giblje med 2 do 8 tedni. Po tem času morajo biti subjektivni, da ponovijo postopek.

Nekatere glive ostanejo boljše pri sobni temperaturi, kot je Epidermophyton Foccosum, Trichophyton Schoenleinnii, t. Violaceum in Microsporum audounii.

Vzdrževanje seva se lahko razširi, da se izognete pleomorfizmu, če je dekstroza agarja popolnoma odpravljena in če se količina agarja v okolje zmanjša, da se izognemo suhosti.

Mikrokulture

Za identifikacijo nekaterih nitastih gliv je treba opraviti mikrokulture z uporabo sabouraud agarja ali drugih posebnih sredstev za opazovanje spolnih in aseksualnih reprodukcijskih struktur.

V človeški mikologiji

Uporablja se predvsem za diagnozo glivičnih bolezni, zlasti tistih, ki vplivajo na kožo in njegove prilogi (lasje in nohti).

Vzorci so lahko izločki, eksudati, koža, dlake, nohti, sputum, LC ali urin. Pogosto izolirani patogeni so dermatofiti, glive, ki povzročajo subkutano in sistemsko mikozo.

Živalska mikologija

Na živali pogosto vplivajo glivične okužbe, zato je Sabouraud agar tako koristen pri mikologiji živali kot pri človeku.

Na primer, dermatofiti lahko vplivajo na živali. Takšen je primer Canis var popisotum microsporum, ki pogosto okužijo pse, mačke, konje, prašiče in opice. Poleg tega, MICROSPUM Gypseum okuži pse, mačke in govedo.

Na ptice, kot so piščanci, petelini in piščanci Microsporum Gallinae.

Druge glive, na primer Zymonema farciminosum, So tudi vzrok bolezni pri živalih, predvsem pri konjih, mulah in oslih, kar povzroča pomembno vnetje v limfnih žilah.

Sporothrix schenkii in histoplazma capsulatum Vplivajo na domače in človeške živali.

Okoljska mikologija

Številne patogene ali oportunistične glive se lahko v določenem okolju koncentrirajo v določenem času, zlasti v operacijskih dvoranah in enotah intenzivne oskrbe (ICU) klinik in bolnišnic. Zato je treba nadzorovati isto.

Drugi ranljivi prostori so stare knjižnice in stavbe, na katere lahko vpliva koncentracija okoljskih gliv.

V okoljskih študijah se uporablja sabouraud dextrose agar za izolacijo gliv.

Industrijska mikologija

Sabouraud Dextrose Agar ne more manjkati za preučevanje gliv onesnaževanja pri proizvodnji kozmetike, hrane, pijač, usnja, tekstila, med drugim.

Sadi mikologijo

Rastline trpijo tudi zaradi bolezni gliv, ki vplivajo na različne dele rastline, ki lahko celo končajo letino, kar povzroča velike izgube v kmetijstvu.

Reference

1. Laboratorij Valtek. (2009). Sabouraud dexstrose agar s cikloheksimido. Na voljo na: andinamedica.com.
2. Navarro oz. (2013). Veterinarska mikologija. Nacionalna agrarna univerza. Nikaragva.