Müeller Hinton Agar What je, fundacija, priprava, uporablja

On Müeller Hinton Agar Gre za trden, neselektivni prehranski medij, ki je sestavljen iz infuzije mesa, peptonske kisline kazeina, škroba, oprijema in destilirane vode. Ta medij omogoča odličen mikrobni razvoj najhitrejših bakterij.

Prvotno sta ga ustvarila John Howard Müeller in Jane Hinton, da bi z prehranskega vidika izolirala zahtevne bakterije, kot je na primer Neisseria Gonorrhoeae in Neisseria meningitidis. Vendar se je zaradi svojih značilnosti izkazalo za idealno za preučevanje dovzetnosti za antibiotike, ki zagotavljajo zanesljive in ponovljive rezultate.

Zato je Müeller Hinton Agar kulturni medij, ki ga sprejmejo Inštitut za klinične in laboratorijske standarde (CLSI) in Evropski odbor za testiranje protimikrobne občutljivosti, za izvedbo testa protimikrobne dovzetnosti z metodo širjenja Kirby in Bauer.

Osnova

Ker je neselektivni prehranski medij, je odličen za rast večine patogenih bakterij.

Po drugi strani pa njegova preprosta sestava povzroči, da se snovi zlahka širijo po njej, kar je bistvena značilnost za test dovzetnosti z metodo razširjanja diska.

Druga njegova značilnost je, da vsebuje majhno število zaviralcev, kar omogoča učinkovito oceno sulfonamida, trimetoprima in tetraciklina.

Vendar je treba upoštevati, da mora medij izpolnjevati določene pogoje, da bi zagotovili njegovo pravilno delovanje, vključno z:

Prileganje pH, globina agarja in ustrezna koncentracija Timine, Timidina, Kalifornija⁺⁺, Mg⁺⁺ in Zn⁺⁺.

Prav tako morate vedeti, da je metodologija standardizirana in zato vsi parametri, kot so:

Koncentracija inokuluma, koncentracija in ohranjanje antibiotičnih diskov, namestitev ustreznega števila diskov na agar, razdalja med enim diskom in drugim, strateško namestitev nekaterih antibiotikov, atmosfero, temperature in časa inkubacije.

Priprava

Tehtamo 37 gr srednjega Müellerja Hintona dehidriranega in se raztopi v 1 liter destilirane vode. Med mešanjem segrejte okolje, da pomagate razpadati. Zavremo 1 minuto.

Preuskajte se do avtoklava, da se sterilizira pri 121 ° C 15 minut. Ko odstranite iz avtoklava, je treba fixolo postaviti v kopalnico od marije do 50 ° C, da se ohladi. Nalijte 25 do 30 ml v sterilne sterilne plošče premera 10 cm.

Plošče je treba pustiti s povprečno debelino 4 mm (idealno), 3-5 mm pa je dovoljen.

Če želite pripraviti kri z Müeller Hintonom, se kot baza vlije 5% sterilne jagnjetine kri.

Vam lahko služi: gliceraldehid 3-fosfat (G3P): struktura, funkcije

Končni pH medija mora biti med 7,2 do 7,4.

Investirajte in prihranite v hladilnik do uporabe. Naj plošča pred uporabo vzame temperaturo okolice.

Barva pripravljenega medija je svetlo bež.

Prijave

Uporablja se za izvajanje antibiograma ali testa dovzetnosti za antibiotike na najhitrejše rastne patogene.

Če je agar dopolnjen s krvjo, služi za izvajanje antibiograma zahtevnih mikroorganizmov, kot so: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus sp, Neisseria meningitidis, med ostalimi. Uporablja se tudi za izolacijo Legionel pneumophila.

Tehnika antibiograma

Pred izvedbo antibiograma je treba pripraviti bakterijsko raztopino, enakovredno 1,5 x 10⁸ Celice.

Da bi to naredili, se odvzemajo 3 do 4 kolonije čistega pridelka in suspendirajo v triartični sojini juhi ali v juhi Müeller Hinton, inkubirajo 2 do 6 ur, koncentracija s sterilno raztopino fiziološke raztopine 0,5%.

Če zahtevajo mikroorganizme, je mogoče kolonije suspendirati neposredno do 0,5% koncentracije Mac Farland. Nato se müeller Hinton plošča posejemo z brisom, impregniranim z bakterijsko raztopino.

Za to je bris potopljen v raztopino, nato pa odvečno tekočino odstranimo s tlakom na stenah cevi. Takoj po tem, ko bris gre skozi celotno površino, ne da bi odšel brez dotika, se plošča rahlo obrne in spet poseje. Operacija se ponovi 2 -krat več.

Pustite stati 10 minut in nato postavite antibiotične diske s sterilno sponko, pri čemer ostane 24 mm med enim in drugim. Po namestitvi vsakega albuma na agar pritisnite vsakega s sponko, da zagotovite, da so dobro pritrjeni.

Po postopku vložimo ploščo in 35-37 ° C inkubiramo v aerobiozo 16 do 18 ur. Če gre za zahteven mikroorganizem, lahko zasluži mikroaerofilijo in če antibiogram vsebuje diske oksacilina, ga je treba brati pri 24 urah.

Za merjenje premera vsakega halo se uporablja pravilo. Rezultate je treba zabeležiti v mm. Nato so vrednosti, pridobljene s tabelami rezanih točk, ki jih je objavil trenutni priročnik CLSI.

Poročajo kot občutljivi (-i), vmesni (i) ali odporni (r), kot je primer.

Antibiotiki so izbrani v skladu z izoliranim mikroorganizmom in vrsto okužbe, ki nastane.

Vam lahko služi: ravni organizacije živih bitij

Včasih je treba upoštevati strateško namestitev antibiotikov, da se prikaže vzorce fenotipske odpornosti.

Strateška namestitev diskov na Müeller Hinton Agar

Za enterobakterije je treba disk klavulanske kisline postaviti pred 3. in 4. generacije cefalosporinov. Širjenje v obliki jajčeca kaže, da je sev proizvajalec razširjenih spektralnih beta -laktamaz (Blee). To pomeni, da bolnika ne bi smeli zdraviti s nobenim cefalosporinom.

V Staphylococcus je pomembno.

Halo odporen pri eritromicinu in ravnost v halo klindamicin kaže, da ima sev inducibilno odpornost na klindamicin, sev (RIC). To pomeni, da zdravljenje s klindamicinom ne bo učinkovito.

Za iskanje sevov AMP C, ki jih lahko inducirajo v enterobakterijah in nekaterih ne -fermentirajočih gram negativnih bacilih, ceftazidime, cefoksitina ali piperacilinu.

Halo, rjav na enem od diskov, ki so obrnjeni proti imipenemu, kaže na prisotnost inducibilnega ojačevalnika.

Za iskanje konstitutivnega AMP C, 500 µg kanalizacije s plokvičnim diskom. Širina zdravljenja v enem od cefalosporinov kaže na pozitivnost.

Kloksacilin disk lahko zamenjate tudi z 9 mm filtrirnega papirja Whatman št. 6, impregniranega z borovo kislino (400 µg) z razdaljo 18 mm. Razlaga se enako prejšnji.

Nazadnje, da raziščete proizvodnjo metalobethalactamases, zlasti v Pseudomonas aeruginosa, Uporabljen je disk, impregniran z 10 ul etilendiaminteraocetne kisline (EDTA 750 µg) in tioglikolne kisline (SMA 300 µg).

Test je pozitiven, če pride do širjenja imipenema ali meropenema halos proti albumu EDTA/SMA. Ta rezultat je treba potrditi s spremenjenim testom Hodge.

Ta metoda je sestavljena iz inokuliranja seva Escherichia coli ATCC 25922 na plošči Müeller Hinton. Imipenem diska na sredini plošče je nameščen in nato se na obodu s sevom na obodu izdela Str. aeruginosa sumljivo. Na ploščo lahko preizkusite do 4 seve.

Test bo pozitiven, če bo okoli Stro območje popačenja imipenemske halo.

Lahko vam služi: neolamarckismo: ozadje in značilnosti

Vzroki napačnih rezultatov

-Slabo ohranjeni diski z antibiotiki lahko povzročijo napačno odpornost. Na primer, disk Oxacilin je zelo ranljiv za temperaturne spremembe.

-PH medija pod navedenim (kislini) proizvaja manjše halos pri aminoglikozidih in makrolidih (tveganje za lažno odpornost) in večjih halos v penicilinu, tetraciklinu in novobiocinu (tveganje za lažno občutljivost).

-Če je pH nad navedenimi (alkalnimi), se zgoraj opisani učinki vložijo.

-Mediji z visokimi koncentracijami timina in timidina vplivajo na znatno zmanjšanje inhibicije sulfonamida in trimetoprima.

-Visoke koncentracije kalcija in magnezija povzročajo lažno odpornost aminoglikozidov, polimiksina B in tetraciklinov pred sevi Pseudomonas aeruginosa.

-Nizke koncentracije kalcija in magnezija proizvajajo lažne občutljivosti aminoglikozidov, poliksina B in tetraciklinov pred sevi Pseudomonas aeruginosa.

-Prisotnost cinka vpliva na rezultate diskov karbapenemov (imipenem, meropenem in ertapenem).

-Debelina medija pod 3 mm daje rezultate lažne občutljivosti, debelina nad 5.

-Mobilizacija diskov v antibiogramu bo dala deformirane halos, saj je odvajanje antibiotikov takojšnje.

- Zelo šibki inokular vplivajo na rezultate, saj v agarju ne bo enotne ali konvergirane rasti, nujen pogoj za merjenje halos inhibicij, poleg tega pa lahko halos daje večje od običajnih.

-Inoculos preveč naložen lahko daje manjši od običajnih HALS.

-Ne spoštujte razdalje med diski se z drugim prekriva ena halo in je ni mogoče pravilno brati.

-Inkubirajte s co₂ Poveča halos tetraciklinih in diskov.

-Inkubat pri temperaturah pod 35 ° C proizvaja večje halos.

-Agregat krvi zmanjšuje velikost sulfamidnega halo.

Omejitev

Občutljivost antibiotika je v antibiogramu pokazala proti mikroorganizmu (In vitro) Ni zagotovilo, da bo delovalo In vivo.

QA

Če želite vedeti, ali medij vsebuje pravo količino timine, je treba posejati sev Enterococcus faecalis ATCC 29212 in dokazujejo dovzetnost za trimetoprim sulfametoksazol (SXT).

Reference

1. Cona e. Pogoji za dobro študijo občutljivosti s testom razširjanja. Rev Chil Infect, 2002; 19 (2): 77–81
2. Britanski laboratoriji. Müeller Hinton Agar. Na voljo na: Britanaalab.com